巨细胞病毒肝炎患儿gB基因型分析及细胞因子水平测定

探讨新生儿肝炎患儿CMV gB基因型分布,研究不同gB基因型致病性的差异.采用巢式聚合酶链反应(nested PCR),限制性片段长度多态性(RFLP)分析技术等测定 45 例新生儿肝炎患儿尿中巨细胞病毒gB基因型,并分析gB基因型与其临床症状的关系.并用ELISA方法测定患儿血清TNF-α和IFN-γ水平.结果显示,新生儿肝炎在gB 1～4型中均可发生,以gB1型为主.病理性黄疸为惟一症状的患儿只在gB1型和gB3型中出现,且预后较好.新生儿肝炎患儿血清TNF-α和IFN-γ皆高于对照组,可能与CMV肝炎的病理变化和病损程度有密切的关系.

新疆地区汉族高血压患者人巨细胞病毒gB基因型分析

目的调查新疆地区汉族人群及高血压患者人巨细胞病毒（HCMV）感染流行株,研究其糖蛋白B（gB）基因型分布。方法采用病例-对照研究方法,采集300例高血压患者和200例非高血压（对照）中的HCMV活动性感染外周血标本。使用Real-time PCR、PCR限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）及测序技术检测HCMV-DNA,鉴别gB基因型并构建进化树。结果 18例HCMV活动性感染患者中高血压患者占77.8%（14/18）,健康对照组22.2%（4/18）,差异有统计学意义（χ~2=5.556,P〈0.05）。汉族人群中存在4种gB基因型,其中gB1占5.6%（1/18）,gB2占50%（9/18）,gB1＋2占38.9%（7/18）,gB2＋3占5.6%（1/18）,差异有统计学意义（χ~2=11.333,P〈0.05）;高血压患者中存在3种gB基因型,其中gB1占7.1%（1/14）,gB2占57.1%（8/14）,gB1＋2占35.7%（5/14）,差异无统计学意义（χ~2=4.069,P〉0.05）。男性高血压患者存在两种基因型,其中gB2占87.5%（7/8）,混合基因型gB1＋2占12.5%（1/8）;女性高血压患者存在3种基因型,gB1和gB2各占16.7%（1/6）,混合基因型gB1＋2占66.7%（4/6）。男、女患者gB基因型分布差异有统计学意义（χ~2=6.725,P〈0.05）。生物信息学分析10例单一gB基因核苷酸序列差异性为0~3.9%,氨基酸序列差异性为0~3.8%。结论新疆地区汉族居民HCMV感染流行株gB基因型存在单一及混合gB基因型,人群以gB2型为主,高血压男性以gB2型为主,高血压女性以gB1＋2型为主;尚未发现gB3和gB4型,该人群中单一gB基因序列变异不大。本研究中感染HCMV的高血压患者所占比例高于健康对照组,提示HCMV感染可能为新疆汉族人群高血压易感的诱因之一。

婴幼儿人巨细胞病毒gB基因型分析

目的调查温州地区婴幼儿人巨细胞病毒(HCMV)感染流行株,研究其gB基因型分布。方法收集HCMV活动性感染患儿标本187例,检测血清HCMV IgM/IgG抗体、尿液HCMV-DNA载量、检测外周血HCMV pp65抗原;采用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测HCMVgB基因型,并予基因测序进行验证。结果 187例HCMV感染流行株存在gB1～3型,其中gB1型97例,占51.87%;gB2型39例,占20.86%;gB3型34例,占18.18%;gB混合型17例,占9.09%;gB混合型中gB1+3混合型16例,gB1+2混合型1例;gB混合型患儿尿液HCMV-DNA载量比单一gB基因型患儿高,差异具有统计学意义(t=2.018,P=0.045);单一gB基因型患儿间尿液HCMV DNA载量差异无统计学意义。结论温州地区HCMV感染流行株gB基因型存在gB1～3型,以gB1型为主,尚未发现gB4型;HCMVgB混合型感染尿液HCMV-DNA载量高于单一gB基因型感染,提示HCMVgB混合型感染可能更具病毒复制性。

新疆哈萨克族原发性高血压患者人巨细胞病毒流行基因型及变异分析

目的为了解新疆地区哈萨克族及原发性高血压(EH)患者人巨细胞病毒(HCMV)感染流行株的分子流行病学特征,并确定该人群中EH患者HCMV的易感基因型。方法采用病例-对照研究方法,采集新疆塔城地区沙湾县博尔通古乡800例哈萨克族(467例EH患者,333例健康参与者)的外周血标本。使用Real-time PCR、PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及测序技术检测HCMV-DNA,鉴别gB基因型并构建进化树。结果107例HCMV活动性感染患者中EH患者占65.4%(70/107),明显高于健康对照组34.6%(37/107)。新疆地区哈萨克族人群中HCMV感染流行株存在3种gB基因型:gB2占37.4%(40/107),混合基因型:gB1+2占47.6%(51/107)、gB2+3占15%(16/107),分布及构成比存在差异;EH患者中存在三种gB基因型:gB2型占37.1%(26/70)、gB1+2占48.6%(34/70)、gB2+3占14.3%(10/70),分布及构成比存在差异;高血压男性中存在三种基因型:gB2型占47.1%(16/34),gB1+2型占47.1%(16/34),gB2+3型占5.8%(2/34);高血压女性中则存在三种基因型:gB2型占27.8%(10/36),gB1+2型占50.0%(18/36),gB2+3型占22.2%(8/36);高血压男性和女性的3种基因型的分布及构成比不存在差异(χ^(2)=5.049,P>0.05);生物信息学结果发现:23例单一gB基因核苷酸序列差异性在0~11.5%,氨基酸序列差异性在0~13.1%。结论新疆哈萨克族人群及高血压患者中易感基因型为gB1+2和gB2型。且新疆哈萨克族人群中单一HCMV gB基因核苷酸以及氨基酸序列存在变异。

人巨细胞病毒糖蛋白B基因分型与婴幼儿感染致病的相关性研究

目的探讨不同人巨细胞病毒糖蛋白B基因分型与婴幼儿感染致病间的关系。方法临床采集200例婴幼儿感染HCMV血液标本,采用巢式PCR检测130例婴儿肝病综合征患者、33例血小板减少症患者和37例神经性耳聋患者标本中HCMV的gB基因,并通过限制性片段长度多态性分析(RFLP)对gB基因进一步分型。分析HCMV及其不同gB基因型与上述婴幼儿感染致病的关系。结果婴儿肝病综合征患者中gB基因型主要以gB1型为主,占56.9%;血小板减少症患者中gB基因型分布较均衡,各gB分型无特异性;而在神经性耳聋患者中,gB基因型主要为gB4型,占40.5%,其次为gB1型占24.3%。不同gB基因型HCMV感染患者在婴儿肝病综合征和神经性耳聋中的分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论婴儿肝病综合征和神经性耳聋与HCMV的gB分型密切相关,而血小板减少症无直接关系。

从MT2、HeLa细胞DNA及人和黑猩猩PBMC DNA中扩增GBV-C核苷酸同源序列的研究

目的 检测MT2和HeLa细胞DNA、6例人和 1例黑猩猩PBMCDNA中是否存在与GBV C同源的核苷酸序列。方法 直接以上述DNA为模板、采用GBV C 5′ NCR和NS3区引物的直接套式PCR(dPCR)、核苷酸序列分析、引物介导原位扩增 (PRINS)NDA序列特异荧光标记技术。结果 从MT2和HeLa细胞DNA、4例人PBMCDNA标本中获得 5′ NCR引物扩增片段 ,从MT2和HeLa细胞DNA、5例人和黑猩猩PBMCDNA标本中获得NS3区引物扩增片段。这些扩增产物的核苷酸序列与GBV C同源性分别为 74 2 9%～ 77 14%和 73 80 %～ 79 15 %。PRINS检测结果显示 ,dPCR阳性的PBMC及其染色体上有荧光着色。结论 MT2和HeLa细胞DNA、人和黑猩猩PBMCDNA中存在与GBV C 5′ NCR和 或NS3区同源性较高的核苷酸序列 ,这些序列可能位于dPCR阳性的PBMC染色体上。