伪狂犬病病毒gI/gE双缺失通用转移载体的构建与初步应用

对含伪狂犬病病毒 (pseudorabies virus,PRV) Ea株 g I、g E、11K全基因 ,g D、2 8K基因部分编码区的质粒p SK4.5进行改造 ,消除其中的 Bam H 和 Not 位点 ,将晚期基因 g G的启动子、多克隆位点以及 SV 40 poly(A)同时插入改造后的质粒 p SKBN的 Stu 和 Bst E 位点 ,取代 g I和 g E的部分编码区 ,构建了由 g G启动子驱动的 g I/ g E双缺失通用转移栽体 pg GIE- Uni。序列分析进一步证实 :至少有 8个单一酶切位点可供外源基因直接插入 ,上下游侧翼分别为 0 .8kb和 2 .4kb。将猪繁殖 -呼吸障碍综合征 (兰耳病 )主要抗原基因 ORF5插入 pg GIE- Uni的 Bam H 和 Not 位点之间 ,构建了含 ORF5的转移质粒 pg GIE- ORF5。上述结果为进一步研制猪伪狂犬病 -兰耳病的 2价基因工程疫苗奠定了基础。