源水和氯化饮用水中有机提取物对HepG2细胞DNA损伤的诱导作用及对gadd153基因表达的影响

背景与目的研究源水和氯化饮用水有机提取物对DNA的损伤作用以及对gadd153启动子和mRNA表达的影响。材料与方法应用彗星试验检测源水和氯化饮用水有机提取物对HepG2细胞的DNA损伤作用;构建含有gadd153启动子和荧光素酶报告基因的载体pGADD153-Luc,以检测荧光素酶活性(发光检测荧光素酶活性)反映gadd153启动子的活性,RT-PCR检测gadd153基因mRNA的表达。结果彗星试验显示在10、100ml/ml培养基剂量组源水和氯化饮用水有机提取物处理24h后,OTM(Olive尾距)显著高于对照组(P<0.01),并有良好的剂量反应关系(源水r=0.882,P<0.05;氯化饮用水r=0.940,P<0.05);氯化饮用水中有机提取物诱导OTM显著高于源水(P<0.05);荧光素酶表达在源水和氯化饮用水有机提取物各剂量组均显著高于对照组(P<0.01)并有良好的剂量反应关系(源水r=0.814,P<0.05;氯化饮用水r=0.921,P<0.05);相关分析表明荧光素酶活性与OTM呈正相关(源水r=0.980,P<0.01;氯化饮用水r=0.995,P<0.01);RT-PCR结果显示在100ml/ml培养基剂量组,源水和氯化饮用水中有机提取物诱导gadd153mRNA表达显著增加(P<0.05),并与OTM有良好的相关性(源水r=0.864,P<0.05;氯化饮用水r=0.897,P<0.05)。结论源水和氯化饮用水有机提取物可诱导HepG2细胞DNA损伤,导致gadd153启动子区的激活,并进一步调控下游gadd153基因mRNA的表达。

老年小鼠脾细胞DNA修复能力的变化及gadd45和gadd153基因的可诱导性改变

目的：研究小鼠脾细胞ＤＮＡ修复能力的增龄变化以及这种变化的发生与损伤可诱导的ｇａｄｄ４５、ｇａｄｄ１５３基因表达的关联。方法：以紫外线损伤脾细胞ＤＮＡ，用非程序ＤＮＡ合成和单细胞凝胶电泳试验测定ＤＮＡ修复能力；用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法检测紫外线损伤后ｇａｄｄ４５、ｇａｄｄ１５３基因转录水平的变化。结果：老年小鼠脾细胞ＤＮＡ修复能力低于青年鼠，老年鼠ｇａｄｄ４５和ｇａｄｄ１５３基因的紫外线损伤的可诱导性也低于青年鼠。结论：小鼠脾细胞ＤＮＡ修复能力随增龄而下降，这种变化的发生可能与老年小鼠脾细胞在紫外线损伤后ｇａｄｄ４５、ｇａｄｄ１５３ｍＲＮＡ表达的可诱导性下降有关。

gadd153基因对卵巢癌细胞生长抑制作用的研究

目的 研究生长抑制ＤＮＡ损伤基因（ｇｒｏｗ ｔｈ ａｒｒｅｓｔ ａｎｄ ＤＮＡ ｄａｍ ａｇｅ， ｇａｄｄ）对卵巢癌细胞生长抑制和凋亡的作用。 方法 ＲＴ－ＰＣＲ鉴定卵巢癌ＳＫＯＶ３ 和３ＡＯ细胞株ｇａｄｄ１５３ 基因表达。通过目的基因的克隆、载体构建技术，将目的基因ｇａｄｄ１５３ 重组于ｐｌＸＳＮ－ｎｅｏ 逆转录病毒表达载体；构建的ｐＬＸＳＮ－ｇａｄｄ１５３载体采用脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）（ＤＯＴＡＰ）的方法，分别转染ＳＫＯＶ３ 和３ＡＯ细胞株；经Ｇ４１８ 抗性筛选；ＲＴ－ＰＣＲ表达鉴定；足叶乙甙（ＶＰ１６）诱导，采用流式细胞仪分析（ＦＣＭ）的方法检测转染前后肿瘤细胞的生长抑制和凋亡。 结果 ＳＫＯＶ３－ｇａｄｄ１５３ 细胞生长抑制在Ｇ１／Ｇ０ 期，部分细胞进入凋亡的状态；３ＡＯ－ｇａｄｄ１５３ 细胞生长抑制，未引起凋亡。 结论 转染ｇａｄｄ１５３ 基因的肿瘤细胞系，诱导表达后可诱发肿瘤细胞生长抑制在Ｇ１／Ｇ０期，并有细胞进入凋亡状态。证实ｇａｄｄ１５３ 基因参与了细胞生长抑制和凋亡过程。

真核细胞筛选系统快速检测环境水样的DNA损伤效应

目的利用含生长抑制和DNA损伤诱导基因153(gadd153)启动子和荧光素酶报道基因真核细胞株GADD153-Luc,建立快速检测环境水样中有机提取物的DNA损伤作用的新方法。方法RT-PCR方法检测内源性gadd153基因mRNA表达;生物发光和彗星试验分别检测环境水样对稳定转染细胞和HepG2细胞的DNA损伤效应。结果RT-PCR结果表明,在100ml/ml培养基剂量组,源水和氯化消毒饮用水中有机提取物可诱导gadd153基因mRNA表达显著增加(P<0.05),并与荧光素酶活性呈正相关;荧光素酶表达在源水和氯化消毒饮用水有机提取物各剂量组均显著高于对照组(P<0.01),并有良好的剂量反应关系;彗星试验显示,在10、100ml/ml培养基剂量组源水和氯化消毒饮用水有机提取物处理后,OTM(Olive尾距)显著高于对照组(P<0.01);相关分析表明,各剂量组诱导荧光素酶活性和DNA损伤程度(OTM)呈正相关(P<0.01)。结论真核细胞gadd153-Luc检测体系可用于快速检测环境水样的DNA损伤效应,并具有较高的灵敏性。