Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定

目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染的Hela细胞进行RT PCR检测和和Dot ELISA分析。结果 :重组质粒转染细胞的总RNA中 ,可扩增出目的基因的转录产物。Dot ELISA的结果显示 ,目的基因在Hela细胞内得到表达。结论 :成功地构建了表达gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ,为HIV

表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因酵母工程菌的构建及表达条件的优化

目的 构建表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的酵母工程菌 ,并优化表达条件。方法 将gag gp12 0嵌合基因插入到酵母表达载体pHILS1中 ,构建了表达质粒pHILGP。线性化质粒电转化毕赤酵母菌GS115后进行整合 ,通过PCR及表达产物的SDS PAGE和ELISA等方法筛选阳性酵母工程菌 ,并优化表达条件。结果 成功构建表达融合蛋白的酵母工程菌 ,表达量为 13%左右。表达蛋白能与HIV 1阳性血清发生反应 ,但其相对分子质量 (Mr)比预计计算的值要小。最佳表达条件为 :BMMY培养基 ,85 %溶解氧 ,培养时间 3d ,1%甲醇诱导浓度。结论 表达的融合蛋白具有很好的抗原特异性 ,存在于上清中 ,这有利于目的蛋白的分离纯化。

中国株HIV-1融合基因gag-gp120在大肠杆菌中的表达

艾滋病是目前人类最难控制、耗资最大的一类病毒性疾病,引起艾滋病的主要病原为HIV-1.Gap蛋白是HIV-1的主要结构蛋白之一,它在病毒的复制、成熟、感染和形态维持等方面均起着重要的作用,并能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫.由于它在不同毒株间相对保守,因此,其诱导的抗体水平在临床上成为HIV感染的主要检测指标.Gp120蛋白是由HIV-1 Env蛋白经剪切而形成的,在gp120上的C2区及其羧基末端等都与中和抗体的产生有关,因此,它已作为首选的HIV-1亚单位疫苗和重要的诊断试剂.在大肠杆菌中表达外源基因具有操作简便,成本低廉等优点.尽管有些表达的产物不能被忠实地翻译后加工,但可作为检测和诊断方面的研究.

共表达HIV-1的gag-gp120与IL-2的pGPIL-2诱导小鼠产生细胞毒性T细胞的研究

目的 研究HIV-1CN融合基因与IL-2基因共表达基因质粒pGPIL-2诱导产生细胞毒性T细胞（CTL）。方法 脂质体介导共表达中国流行株HIV-1gag-gp120基因与IL-2基因的基因疫苗质粒pGPIL-2转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光法鉴定其表达。取pGPIL-2免疫鼠脾细胞,检测pGPIL-2诱导的细胞毒性T细胞杀伤活性。结果 杀伤实验结果证明,经基因免疫获得的 CTL效应细胞,可杀伤 HIV-1CN 融合基因转染的靶细胞。结论 pGPIL-2可有效地诱导 CTL的产生,该研究结果为进一步设计中国流行株HIV-1基因疫苗提供了重要实验依据。