山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因的克隆及酵母表达载体的构建

为了构建山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因酵母表达载体,试验根据GenBank中鸡β防御素Gal-2基因序列设计引物,采用RT-PCR技术从山地乌骨鸡骨髓细胞中扩增出Gal-2基因,经PCR和酶切鉴定后测序,并采用DNAStar软件进行生物信息学分析;再根据毕赤酵母偏爱密码子和山地乌骨鸡β-防御素Gal-2成熟肽编码基因序列设计并合成1对引物,采用PCR技术从重组质粒pMD18-T-Gal-2扩增出其成熟肽编码基因,并将其插入载体pPICZaA,构建重组质粒pPICZaA-Gal-2,将pPICZaA-Gal-2线性化,通过电击转入毕赤酵母菌株GS115,用1%甲醇诱导表达120 h,表达产物纯化后进行Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定。结果表明:山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因克隆成功;山地乌骨鸡β-防御素Gal-2成熟肽编码基因重组真核表达载体构建成功;山地乌骨鸡Gal-2基因在酵母中得到表达。

鸡β防御素Gal-2基因的克隆及序列分析

为了研究不同品种或品系鸡β防御素Gal-2基因，试验根据GenBank中鸡β防御素Gal-2基因序列设计引物，采用RT—PCR技术从宝万斯尼拉、罗曼粉、山地乌骨鸡、大恒优质肉鸡配套系A、B骨髓细胞中扩增出Gal-2基因，经PCR和酶切鉴定后测序，并采用DNAStar软件进行生物信息学分析。结果表明：成功克隆出5个品种（品系）Gal-2基因，5个编码区核苷酸序列同源性为100％。与GenBank中鸡β防御素Gal-2编码区核苷酸序列同源性为97．4％-100％，说明鸡B防御素Gal-2尽管高度保守，但不同地方品种间仍然存在遗传多样性。

鸡β-防御素-2(Gal-2)基因在大肠杆菌中的融合表达与纯化

本试验通过优化基因工程菌pMAL-c2X-Gal-2-TB1的表达条件,找到使融合蛋白表达量达到最大的最佳表达条件,后采用Amylose树脂预装柱对可溶性目的蛋白分离、纯化和FactorXa因子酶切,为了得到Gal-2,再次过柱纯化,每一步产物用SDS-PAGE方法检测。结果融合蛋白的分子量约为50KD,融合蛋白的表达量约占全菌总蛋白的36%;纯化后的融合蛋白纯度达90%以上,且经再次纯化得到纯度较高的Gal-2。

安徽三黄鸡β-防御素2(gal-2)在毕赤酵母细胞内的表达

目的:构建安徽三黄鸡β-防御素2(gal-2)基因的真核表达载体,表达gal-2蛋白。方法:提取鸡肺组织中总RNA,应用RT-PCR技术获得鸡β-防御素2(gal-2)全长cDNA基因片段,经PCR获得gal-2的成熟肽基因片段,并将其克隆入真核表达载体pPIC3.5K中,构建重组表达质粒pPIC3.5K-gal-2;经测序鉴定正确后,电转化巴斯德毕赤酵母菌GS115。经甲醇诱导表达gal-2蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。结果:通过电转化方法成功将经酶切线性化的重组表达质粒整合入宿主菌基因组中,并在甲醇诱导的条件下成功表达出了目的蛋白。结论:成功构建了重组真核表达质粒pPIC3.5K-gal-2;并借助巴斯德毕赤酵母细胞表达出了gal-2的蛋白,其分子量大约为4.1kDa。该研究为下一步应用基因工程和蛋白质工程技术进行gal-2蛋白的规模化生产奠定了基础。

Gal-3和Bcl-2蛋白的表达与垂体腺瘤侵袭性的关系

目的探讨半乳糖凝集素-3(Gal-3)和细胞淋巴瘤/白血病基因-2(Bcl-2)蛋白水平的表达与垂体腺瘤侵袭性的关系。方法采用免疫组化S-P法检测31例非侵袭性和47例侵袭性垂体腺瘤组织中Gal-3和Bcl-2的蛋白表达。结果侵袭性垂体腺瘤组的Gal-3和Bcl-2的蛋白表达均较非侵袭性腺瘤组显著增高(P<0.01)。侵袭性腺瘤组中Gal-3和Bcl-2的表达水平成正相关(P<0.01)。结论侵袭性垂体腺瘤的生物学行为与Gal-3和Bcl-2的表达增高有相关性。Gal-3和Bcl-2在抗凋亡过程中可能存在着内在联系。

COX-2和Gal-3表达与甲状腺乳头状癌浸润转移的关系

目的探讨COX-2和Gal-3在甲状腺乳头状癌中的表达及其与癌组织浸润转移的关系。方法应用免疫组化染色EliVisionTMplus两步法检测164例甲状腺乳头状癌组织和30例癌旁甲状腺组织中COX-2和Gal-3的表达状况。结果癌组织COX-2和Gal-3总体阳性表达率分别为72.6%和92.1%,显著高于癌旁组织(P<0.05);有浸润和有淋巴结转移者COX-2和Gal-3阳性表达率均显著高于无浸润和无淋巴结转移者(P<0.05);癌组织COX-2与Gal-3表达呈正相关(r=0.38)。结论 COX-2和Gal-3在甲状腺乳头状癌组织中多数呈强阳性表达,两者与癌组织浸润转移密切相关。

沙库巴曲缬沙坦与培哚普利对慢性心力衰竭患者心功能指标及血清sST2和Gal-3水平的影响

目的 探讨沙库巴曲缬沙坦与培哚普利对慢性心力衰竭患者心功能指标及血清生长刺激表达基因2蛋白(sST2)和半乳糖凝集素3(Gal-3)的影响。方法 118例慢性心力衰竭患者均分为沙库巴曲缬沙坦组和培哚普利组,两组患者在给与慢性心力衰竭常规治疗的基础上,分别给与沙库巴曲缬沙坦或培哚普利治疗,均持续治疗3个月;比较2组患者治疗3个月时临床疗效、于治疗前和治疗3个月时检测2组患者心功能指标[左心房内径(LAD)、左心室收缩末径(LVESD)、左心室舒张末径(LVEDD)及左心室射血分数(LVEF)],检测两组患者血清sST2、Gal-3水平,比较2组患者治疗期间的不良反应发生率。结果 沙库巴曲缬沙坦组治疗总有效率(94.92%)高于培哚普利组(81.36%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗前,2组患者心功能指标和血清sST2、Gal-3水平比较,差异无统计学意义(P> 0.05);治疗3个月时,2组患者LAD、LVESD、LVEDD及血清sST2、Gal-3水平均低于治疗前,LVEF高于治疗前,且沙库巴曲缬沙坦组LAD、LVESD、LVEDD和血清sST2、Gal-3水平低于培哚普利组、LVEF高于培哚普利组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗期间2组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 沙库巴曲缬沙坦与培哚普利均可有效提高慢性心力衰竭患者疗效,改善患者心功能,其机制可能与降低血清sST2和Gal-3有关;但沙库巴曲缬沙坦优于培哚普利。

2型糖尿病伴冠心病患者血糖波动及血清Gal-3对主要不良心血管事件的预测价值

目的探讨2型糖尿病伴冠心病患者血糖波动及血清半乳糖凝集素-3(Gal-3)对主要不良心血管事件的预测价值。方法选取2019年3月—2021年3月吉安市中心人民医院收治的118例2型糖尿病伴冠心病患者和54例单纯2型糖尿病患者,另选取同期该院46例健康体检者。比较3组空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)及血清Gal-3水平;比较不同病情严重程度2型糖尿病伴冠心病患者24 h血糖、血糖波动幅度及血清Gal-3水平;采用Pearson相关性分析病情严重程度与24 h血糖、血糖波动幅度及Gal-3的关系;随访1年,统计2型糖尿病伴冠心病患者主要不良心血管事件发生情况;采用单因素分析影响2型糖尿病伴冠心病患者主要不良心血管事件发生的因素,并对其影响因素进行多因素逐步Logistic回归分析;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析24 h血糖、血糖波动幅度及血清Gal-3预测2型糖尿病伴冠心病患者发生主要不良心血管事件的价值。结果2型糖尿病伴冠心病患者FBG、HbA1c及血清Gal-3水平较单纯2型糖尿病患者和健康体检者高(P<0.05);高危组24 h血糖、血糖波动幅度及血清Gal-3水平较中危组、低危组高(P<0.05);相关性分析结果显示,患者病情严重程度(Gensini分数)与24 h血糖、血糖波动幅度及血清Gal-3呈正相关(r=0.404、0.437和0.526,均P<0.05);随访1年,118例2型糖尿病伴冠心病患者中共有36例发生主要不良心血管事件,发生组患者2支及以上病变支数、FBG、HbA1c、24 h血糖、血糖波动幅度及血清Gal-3水平高于未发生组(P<0.05);多因素逐步Logistic回归分析结果显示,病变支数[O^R=2.821(95%CI:1.053,7.557)]、24 h血糖[O^R=3.873,(95%CI:1.446,10.376)]、血糖波动幅度[O^R=3.636(95%CI:1.357,9.742)]、Gal-3[O^R=3.442(95%CI:1.285,9.221)]是影响2型糖尿病伴冠心病患者主要不良心血管事件发生的危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,2型糖尿病伴冠心病患者24 h血糖、血糖波动幅度及血清Gal-3预测主要不良心血管事件的最佳截断值分别为3.72 mmol/L、2.15 mmol/L和11.90 ng/mL,敏感性分别为83.33%(95%CI:0.672,0.936)、80.56%(95%CI:0.640,0.918)和86.11%(95%CI:0.705,0.953),特异性分别为76.83%(95%CI:0.662,0.854)、65.85%(95%CI:0.546,0.760)和63.41%(95%CI:0.522,0.738),曲线下面积(AUC)分别为0.840(95%CI:0.761,0.901)、0.775(95%CI:0.689,0.847)和0.813(95%CI:0.731,0.879),三者联合预测的敏感性、特异性及AUC分别为80.56%(95%CI:0.640,0.918)、97.56%(95%CI:0.915,0.997)和0.949(95%CI:0.892,0.981)。结论2型糖尿病伴冠心病患者血糖波动及血清Gal-3影响主要不良心血管事件的发生,两者均可作为预测主要不良心血管事件的敏感指标。

老年高血压患者血清sST 2、Hcy、Gal-3水平与射血分数保留性心力衰竭发生的相关性

目的探讨老年高血压患者血清可溶性肿瘤发生抑制蛋白2(sST2)、同型半胱氨酸(Hcy)、半乳糖凝集素3(Gal-3)水平与射血分数保留性心力衰竭(EFpHF)发生的相关性,以期为临床早期诊断、制定治疗方案提供依据。方法选取2020年5月至2022年10月南阳市第一人民医院收治的83例老年高血压患者为研究对象,其中单纯高血压患者51例(对照组),高血压合并EFpHF患者32例(研究组)。比较两组入院时血清sST2、Hcy、Gal-3水平,比较两组入院时超声心动图指标[左心房内径(LAD)、右心房内径(RAD)、二尖瓣口舒张早期最大血流速度E峰与舒张晚期最大血流速度A峰的比值(E/A)、左心室质量指数(LVMI)],分析入院时血清sST2、Hcy、Gal-3水平与超声心动图指标及EFpHF发生的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sST2、Hcy、Gal-3水平联合检测对老年高血压患者发生EFpHF的诊断价值。结果与对照组相比,入院时研究组血清sST2、Hcy、Gal-3水平较高(P<0.05);入院时与对照组相比,研究组LAD、RAD、LVMI指标明显升高,E/A指标明显降低(P<0.05);入院时血清sST2、Hcy、Gal-3水平与LAD、RAD、LVMI、EFpHF呈正相关,与E/A呈负相关(P<0.05);入院时血清sST2、Hcy、Gal-3水平联合检测诊断高血压患者发生EFpHF的曲线下面积(AUC)为0.841,大于各单一指标,最佳诊断敏感度为87.50%,特异度为80.39%。结论血清sST2、Hcy、Gal-3水平变化与老年高血压患者并发EFpHF密切相关,为临床早期诊断提供参考依据,以尽早制定相应干预方案,改善预后。

侵袭性垂体腺瘤的MRI表现与Bcl-2、Gal-3表达的相关性研究

目的:探讨侵袭性垂体腺瘤MRI表现与B细胞淋巴瘤基因2(Bcl-2)和半乳糖凝集素3(Gal-3)蛋白水平表达的相关关系。方法:采用免疫组织化学Envision法检测26例侵袭性和23例非侵袭性垂体腺瘤组织中Bcl-2与Gal-3的蛋白表达水平,并与MRI表现上垂体腺瘤最大径线进行相关分析。结果:侵袭性垂体腺瘤组Bcl-2与Gal-3的蛋白表达均较非侵袭性垂体腺瘤组增高(P<0.05)。Bcl-2、Gal-3的蛋白表达与侵袭性垂体腺瘤最大径线呈正相关关系。结论:侵袭性垂体腺瘤生物学行为与Bcl-2与Gal-3的表达增高有关。Bcl-2、Gal-3可用于临床对于垂体腺瘤进行诊断及预后的评价。

Gallinacin-2在毕赤酵母中的分泌表达

利用RT-PCR技术,从鸡肺脏总RNA中克隆了Gal-2 cDNA全序列,以克隆载体为模板PCR扩增Gal-2成熟肽cDNA,将成熟肽cDNA插入到分泌型表达载体pPIC9k中,构建pPIC9k-Gal-2成熟肽表达载体;通过电转化方法将表达质粒导入到毕赤酵母GS115体内,阳性克隆菌经甲醇诱导表达,SDS-PAGE蛋白电泳检测在3.9ku附近出现预期大小的条带,灰度扫描显示蛋白表达量占总分泌蛋白量的63.7%。抑菌试验结果表明,表达的防御素对大肠埃希氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑菌活性。

鸡β-防御素-2基因的克隆及原核表达载体的构建

鸡β-防御素是一类广谱抗菌阳离子小肽的总称,一般具有3个分子内二硫键。防御素对细菌、真菌乃至某些被膜病毒具有广谱杀伤作用。试验根据已发表的Gal-2基因序列,设计并合成了一对引物。以骨髓中的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增目的片段并克隆到pGEM-TEasy载体上,经筛选鉴定获得阳性重组子pGEM-T-Gal-2。再经EcoRI、XbaI双酶切,插入pMAL-c2x质粒构建表达载体。利用PCR技术和酶切反应筛选转化子成功获得pMAL-c2x-Gal-2重组质粒。

半乳糖-3-O-磺酰基转移酶-2与肿瘤转移关系的研究

半乳糖-3-O-磺酰基转移酶-2(GP3ST)是一个新近克隆的磺酰基转移酶,其生物学功能还不明确.GP3ST在肿瘤细胞和肿瘤组织中差异性表达,以及催化所形成的磺酰化糖链与肿瘤转移潜能密切相关,是首次研究报道.在高转移潜能的肿瘤细胞中,GP3ST及其产物的表达明显高于低转移潜能的细胞,在伴有淋巴结转移的喉癌组织中,GP3ST的高表达率也明显高于无淋巴结转移的喉癌组织(P<0.05),而且在喉癌组织中的表达也明显高于相对应的癌周组织.利用RNAi技术下调肝癌细胞SMMC7721中GP3ST的表达,观察到稳定转染RNAi/GP3ST的细胞形态发生明显的改变,由多边形转变为近似梭形,与TNF-α刺激后的HUVEC和sL-选凝蛋白的黏附能力下降.进一步研究表明,GP3ST表达的下降能抑制细胞中的整合蛋白αV亚基的表达,而β3亚基表达无改变,同时在高转移细胞株中αV的表达也明显高于低转移细胞株,与GP3ST表达的差异性相一致.上述结果充分说明GP3ST催化合成的糖链可通过调节肿瘤细胞的黏附性和影响整合蛋白αV亚基的表达参与肿瘤转移.

用2-氯-4-硝基苯-α-半乳糖麦芽糖苷作底物测定总淀粉酶和胰腺淀粉酶

目的 建立一个稳定的单一试剂直接测定总淀粉酶和胰腺α 淀粉酶方法。 方法 用 2 氯 4 硝基苯 α 半乳糖麦芽糖苷 (Gal G2 α CNP)作底物 ,同时用麦芽唾液淀粉酶抑制物直接测定总淀粉酶和胰腺淀粉酶。淀粉酶水解Gal G2 α CNP为半乳糖麦芽糖苷和CNP ,在 4 0 5nm波长测定。 结果 本法不需要其它工具酶 ,延迟相较短 ( <60s) ,线性范围可达 1 0 0 0U/L ,并且试剂的稳定性很好。精密度分析批内CV<2 .2 5% ,总CV <3 .0 5。本法 (Y)与IFCC推荐方法 (X)比较 :r=0 .9997,Y =1 .3 74 5X +0 .0 4。 结论 本法测定体液中总淀粉酶和胰腺淀粉酶活性非常简便和灵敏 ,适用于常规分析。

鸡β-防御素cDNA的克隆与序列分析

使用总RNA提取试剂盒,从1月龄粤黄鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT＿PCR)扩增出鸡β＿防御素(Gal＿2)cDNA片段。PCR产物经凝胶回收纯化,加A尾后与载体pGEM＿TEasy相连,然后转化感受态细胞DH＿5α。在含X＿gal、IPTG的LA平板上筛选阳性克隆,经菌落PCR与提取质粒作限制性酶切鉴定后,对目的片段进行测序。结果表明RT＿PCR扩增出的cDNA片段碱基数为195bp,用Blast程序进行检索比较表明此扩增序列与Genbank中发表的鸡Gal＿2cDNA编码区序列100%相同。该cDNA编码64个氨基酸,包括信号肽、前片段和成熟肽,成熟肽由36个氨基酸残基组成。

果糖-1,6-二磷酸锌对D-半乳糖和亚硝酸钠致衰老小鼠的作用

目的 :观察果糖 1,6二磷酸锌 (ZnFDP)对D 半乳糖 (D Gal)和亚硝酸钠 (NaNO2 )致衰老小鼠的作用。方法 :采用腹腔注射D Gal+NaNO2 的方法造模 ,通过水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力 ,生化法测脑内胆碱酯酶(AchE)、超氧化物歧化酶 (SOD)含量 ,并进行脑组织冠状切片和HE染色。结果 :造模小鼠学习记忆能力下降 ,AchE水平上升 ,SOD水平下降 ,脑内可见明显病理改变。灌胃 3个剂量ZnFDP (14 2 ,2 84 ,5 6 8mg·kg-1·d-1)均可改善模型小鼠脑内AchE和SOD水平 ,高剂量可提高其学习记忆能力。结论 :ZnFDP可改善D Gal+NaNO2 致衰老小鼠的学习记忆能力 ,具有促智、延缓脑衰老的作用。

混和式步进电动机正弦驱动技术

针对混合式步进电动机开环运行时的振荡和失步问题,介绍一种以可编程逻辑器件GAL16V8和E2PROM为核心实现的三相混合式步进电动机系统。实验结果表明:通过采用正弦波细分驱动技术,系统具有无低频振荡和运行平稳的特点。

一种改进的GALS异步包装电路

GALS(全局异步、局部同步)架构适用于NoC的时钟分布,但现有的GALS需要定制地设计异步包装电路,不利于验证和集成.采用通用的数字ASIC设计流程,在仅使用已有标准单元的情况下,提出了一种新的基于FIFO的异步包装.通过此包装电路,实现了一个信号传输只需2步操作,提高了通信吞吐率.实验结果表明该包装电路在吞吐率和延迟上获得了显著改进.

APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠海马神经元凋亡的影响(英文)

目的研究APP17肽对D-半乳糖脑病小鼠海马神经元凋亡的影响,为进一步探讨APP17肽对脑老化的临床治疗意义提供理论依据。方法雄性昆明小鼠66只,按随机数字表法分为3组:正常对照组(C组)、D-半乳糖对照组(D组)、APP17肽治疗组(P组),每组动物22只。用D-半乳糖制备脑老化模型,并皮下注射APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠进行治疗,3个月后取脑组织做Bcl-2,Bax,CREB,Akt,AIF免疫组织化学染色。结果D-半乳糖脑病小鼠海马内Bax,AIF阳性反应神经元细胞数目多,细胞计数与C组及P组有显著性差异;胞质与突起深染,而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性细胞数目少,染色淡;D-半乳糖小鼠海马内Bcl-2,CREB(cAMP反应结合蛋白),AKt阳性细胞数目少,染色淡,细胞计数与C组及P组有显著性差异;而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元细胞数目多,胞质与突起深染。结论促进凋亡的Bax,AIF(凋亡诱导因子)在D-半乳糖小鼠海马表达增加;与凋亡呈负相关的Bcl-2,CREB,Akt在D-半乳糖小鼠海马表达降低APP17肽能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内Bcl-2,Bax,CREB,Akt,AIF的表达,使之接近正常。

三个血浆生物标志物对急性冠脉综合征预后作用的研究进展

急性冠脉综合征(ACS)会导致心律失常、左心室室壁血栓、心脏纤维化、心力衰竭、心源性休克、动脉瘤,甚至引发心脏破裂,是造成心脏疾病患者死亡的主要原因之一。多年来,人们一直在寻找具有可靠预测性的心脏病恶化生物标志物,其中半乳糖凝集素-3(GAL-3)、可溶性基质溶素-2(s ST2)和生长分化因子-15(GDF-15)作为新近发现的能够预测ACS患者预后的重要标志物得到广泛关注,本文将对这三个新型ACS预后的生物标志物目前的研究进展进行综述。