Galectin-9阳性肿瘤相关巨噬细胞在肌层浸润性膀胱癌中的表型、功能及临床治疗意义

目的·分析半乳糖凝集素9阳性肿瘤相关巨噬细胞(galectin-9^(+)tumor-associated macrophages,galectin-9^(+)TAMs)在肌层浸润性膀胱癌(muscle-invasive bladder cancer,MIBC)组织中的表型特征,探究MIBC微环境对galectin-9^(+)TAMs的调控作用,galectin-9^(+)TAMs抑制CD8^(+)T细胞反应的机制及其临床治疗意义。方法·通过流式细胞术检测MIBC与癌旁组织中galectin-9^(+)TAMs的表型特征。利用TCGA (The Cancer Genome Atlas)数据库筛选与LGALS9和LGALS9巨噬细胞基因集显著相关的细胞因子。用人重组细胞因子体外刺激巨噬细胞,分为人重组巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human macrophage-stimulating factor,rh M-CSF)刺激组、人重组白介素-16 (recombinant human interleukin-16,rh IL-16)刺激组和人重组干扰素γ (recombinant human interferon-γ,rh IFN-γ)刺激组,并通过流式细胞术检测3组galectin-9表达情况。流式细胞术检测加入rh M-CSF中和性抗体后巨噬细胞表达galectin-9的情况。Anti-galectin-9抗体处理MIBC单细胞悬液后,通过流式细胞术检测TAMs的效应功能变化。分选癌与癌旁组织中galectin-9^(+)TAMs和人外周血CD8^(+)T细胞并进行体外共培养,通过流式细胞术检测CD8^(+)T细胞效应功能变化。采用anti-galectin-9抗体和程序性死亡受体1 (programmed cell death protein 1,PD-1)抗体单独及协同处理体外培养的肿瘤组织,通过流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡及CD8^(+)T细胞效应功能变化。结果·Galectin-9^(+)TAMs高表达人类白细胞DR抗原(human leukocyte antigen DR,HLA-DR)、CD86、CD206和细胞程序性死亡-配体1 (programmed cell death-ligand 1,PD-L1),分泌IL-10和转化生长因子-β (transforming growth factor-β,TGF-β)增加,分泌肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)减少。TCGA数据库筛选结果显示,M-CSF、IL-16和IFN-γ与LGALS9和LGALS9巨噬细胞基因集的相关性最显著。用rh M-CSF、rh IL-16和rh IFN-γ体外刺激巨噬细胞,rh M-CSF刺激组中galectin-9的表达显著升高,加入中和性抗体后表达显著下调。阻断galectin-9后,TAMs表型从高表达抑制性分子向促炎症分子转换,其表面表达PD-L1显著下降。体外共培养galectin-9^(+)TAMs和CD8^(+)T细胞后,galectin-9^(+)TAMs能够抑制CD8^(+)T细胞的效应功能,该作用部分依赖于galectin-9。联合阻断galectin-9和PD-1后,肿瘤细胞凋亡比例、CD8^(+)T细胞的增殖能力和效应分子的分泌与单独阻断PD-1相比,均显著增多或增强。结论·Galectin-9^(+)TAMs具有免疫抑制表型和功能。肿瘤来源M-CSF诱导TAMs高表达galectin-9。Galectin-9^(+)TAMs抑制CD8^(+)T细胞功能从而促进MIBC免疫逃逸。联合阻断galectin-9和PD-1能够更有效地重激活CD8^(+)T细胞功能。

NUSAP1在肿瘤相关巨噬细胞中的表达及对非小细胞肺癌的影响

目的探究NUSAP1在肿瘤相关巨噬细胞中表达对非小细胞肺癌的影响机制。方法使用Western blot检测检测人癌和癌周巨噬细胞中NUSAP1、p-PI3K以及MMP-9的相对蛋白表达量;使用慢病毒感染M2巨噬细胞,构建骨髓诱导M2与人非小细胞肺癌细胞株Lewis共培养体外模拟NSCLC肿瘤微环境,使用Western blot检测M2巨噬细胞中NUSAP1、p-PI3K以及MMP-9的相对蛋白表达量。使用细胞划痕实验检测非小细胞肺癌细胞的迁移能力。结果人体样本Western blot检测结果显示非小细胞肺癌组织中NUSAP1,PI3K与MMP-9的相对蛋白表达量显著高于癌周组织(P<0.05);体外实验通过小鼠巨噬细胞与Lewis共培养以模拟体内肿瘤环境,Western blot检测慢病转染敲低NUSAP1后p-PI3K与MMP-9均表达降低(P<0.05),上调NUSAP1后p-PI3K与MMP-9表达均升高(P<0.05)。MMP-9过表达(OV-MMP-9)抵消了由于敲低NUSAP1所造成的MMP-9表达水平降低,同时shRNA-NUSAP1+ovMMP-9组侵袭率明显高于shRNA-NUSAP1+OVNC组(P<0.05)。shRNANUSAP1(NUSAP1敲低)组比shNUSAP1组的迁移宽度明显增加,说明迁移能力受限;在敲低NUSAP1的基础尚过表达MMP-9(OV-MMP-9)后迁移能力明显变强,迁移宽度显著变小(P<0.05)。结论NUSAP1在肿瘤相关巨噬细胞中通过促进PI3K通路的激活及MMP-9的表达从而促进非小细胞肺癌细胞的迁移。

TGF-β对膀胱癌组织中巨噬细胞来源肿瘤相关成纤维细胞的影响及其机制

目的探讨TGF-β对膀胱癌组织中巨噬细胞来源肿瘤相关成纤维细胞(CAF)的影响及其机制。方法采用Kaplan-Meier法分析膀胱癌组织中α-SMA^(+)CD68^(+)CAF表达水平与患者的总生存率(OS)的关系;采用免疫荧光技术检测α-SMA^(+)CD68^(+)CAF在膀胱癌组织中的浸润情况;采用Western blot实验检测TGF-β对α-SMA^(+)CD68^(+)CAF体外诱导作用。同时构建膀胱癌小鼠模型,采用免疫荧光技术和免疫组化法检测TGF-β对膀胱癌小鼠体内α-SMA^(+)CD68^(+)CAF的诱导作用及对CD8^(+)T细胞浸润的影响。结果膀胱癌组织中α-SMA与CD68的表达呈正相关,且α-SMA^(+)CD68^(+)CAF高表达的患者预后更差(χ^(2)=9.05,P<0.05)。免疫荧光技术检测结果显示,膀胱癌组织中存在α-SMA^(+)CD68^(+)CAF。Western blot实验检测结果显示,TGF-β可显著促进α-SMA^(+)CD68^(+)CAF的生成。膀胱癌小鼠模型体内实验显示,TGF-β可促进膀胱癌组织中α-SMA^(+)CD68^(+)CAF的生成,从而抑制CD8^(+)T细胞的浸润。结论TGF-β可显著促进膀胱癌组织中巨噬细胞来源CAF的生成,从而抑制CD8^(+)T细胞的浸润。

直肠癌中肿瘤相关巨噬细胞、基质金属蛋白酶-9与微淋巴管生成关系

目的:研究直肠癌的微淋巴管生成情况、肿瘤相关巨噬细胞(TAM)计数与基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的关系,探讨TAM与MMP-9在直肠癌微淋巴管生成中的作用。方法:通过免疫组化法测定41例直肠癌标本微淋巴管密度(LMVD)、TAM密度及MMP-9的表达,并分析LMVD、MMP-9与直肠癌其它临床病理学因素间的关系。结果:①直肠癌组织LMVD、TAM密度、MMP-9的表达明显高于正常组织(P<0.05)。②TAM浸润与MMP-9表达和肿瘤微淋巴管生成相关(P<0.05)。③三者与肿瘤分化程度、Dukes分期、淋巴浸润和淋巴结转移等有不同程度的相关性。结论:TAM与MMP-9、直肠癌微淋巴管生成在直肠癌转移中起着重要的作用,MMP-9很可能是肿瘤微淋巴管生成的始动因子之一。

肿瘤相关巨噬细胞、基质金属蛋白酶-9与食管鳞癌浸润、转移的关系

目的:探讨肿瘤相关巨噬细胞(TAM)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与食管鳞癌浸润、转移之间的关系。方法:选取60例食管鳞状细胞癌、20例癌旁不典型增生组织及20例正常食管黏膜组织,采用免疫组化SP法检测CD163(标记TAM)、MMP-9的表达。结果:食管鳞癌组织中CD163、MMP-9阳性细胞数明显多于癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织;食管鳞癌组织中CD163、MMP-9的表达与食管鳞癌的浸润深度和淋巴结转移均呈正相关;食管鳞癌组织中CD163与MMP-9的表达呈正相关。结论:TAM的浸润数量与食管鳞癌的浸润深度和淋巴结转移有关,其浸润数量与MMP-9的表达呈正相关,TAM可能是通过分泌MMP-9从而促进食管鳞癌的浸润、转移。

肿瘤相关M2型巨噬细胞通过Toll样受体增强卵巢癌细胞MMP-9的表达

目的探讨M2型巨噬细胞在卵巢癌侵袭转移中的作用及其可能涉及的Toll样受体(TLRs)信号通路机制。方法用320 nmol/L佛波醇酯(PMA)诱导THP-1细胞,直接免疫荧光技术鉴定M2型巨噬细胞;Transwell小室建立M2细胞与卵巢癌细胞SKOV3体外非接触式共培养模型;24和48 h共培养后,实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime PCR)检测SKOV3内TLR1、2、6和基质金属蛋白酶MMP-9水平,蛋白免疫印记(Western blot)检测My D88、TRAF6、P-NF-κB和MMP-9表达;TLR1、2和6激动剂分别作用SKOV3 6、12和24 h后评价MMP-9的变化。结果PMA可诱导THP-1成为M2型巨噬细胞;M2型巨噬细胞与SKOV3共培养24和48 h后,MMP-9的表达水平显著高于对照组(P<0.05);TLR1、2、和6于共培养24和48 h后在SKOV3有较高表达(P<0.05);共培养24和48 h后,TLRs信号通路蛋白My D88、TRAF6和P-NF-κB在SKOV3也同步表达增高(P<0.05);TLR1、2和6激动剂Pam3CSK4、HKLM和FSL-1分别刺激SKOV3 6、12和24 h后MMP-9 mRNA水平有显著高表达(P<0.05)。结论分化诱导后的M2型巨噬细胞,可能通过刺激和活化TLR1、2、6信号途径,引起卵巢癌细胞SKOV3内基质金属蛋白酶MMP-9水平增加,增强肿瘤的侵袭转移能力。

晚期NSCLC组织巨噬细胞表面Tim-3表达与临床特征和预后的关系

目的探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织浸润巨噬细胞表面T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)表达特点,以及与其配体半乳凝素-9(Gal-9)组织表达、患者临床特征、预后的关系。方法选择80例晚期NSCLC组织和30例肺良性病变肺组织,采用免疫组织化学法和流式细胞术分别检测组织Tim-3和Gal-9蛋白表达量,以及肿瘤相关巨噬细胞(TAM)表面Tim-3表达,并分析HLA-DR^(+)TAM和CD163^(+)TAM表面Tim-3表达与组织Tim-3表达、Gal-9表达、临床特征、总生存期的关系。结果NSCLC组织Tim-3和Gal-9蛋白阳性表达率高于肺良性病变肺组织(P<0.05),且Tim-3在CD163^(+)TAM阳性表达率高于HLA-DR^(+)TAM(P<0.05)。NSCLC组织Gal-9蛋白表达与组织Tim-3蛋白表达呈正相关性(P<0.05)。HLA-DR^(+)TAM表面和CD163^(+)TAM表面Tim-3表达与患者肺外转移、TNM分期和2年生存预后有关(P<0.05)。HLA-DR^(+)TAM表面Tim-3蛋白高表达亚组患者总生存期长于低表达亚组(P=0.003),而CD163^(+)TAM表面Tim-3蛋白高表达亚组患者总生存期则短于低表达亚组(P=0.001)。结论晚期NSCLC组织中Tim-3和Gal-3均呈高表达,Tim-3/Gal-3信号通路在NSCLC肺外转移、疾病发展及预后不良中的作用可能与TAM向M2型巨噬细胞极化导致的肺癌炎症微环境有关。

肿瘤相关巨噬细胞促进微囊化胃癌细胞增殖细胞核抗原、血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9表达

肿瘤组织中巨噬细胞的浸润与肿瘤患者的不良预后相关。我们通过巨噬细胞与微囊化胃癌细胞共培养，观察其对微囊化胃癌细胞表型的影响。

CTRP9通过调节M1/M2巨噬细胞极化改善大鼠心肌梗死后早期心功能的临床研究

目的探讨C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)通过调节M1/M2巨噬细胞极化对大鼠心肌梗死后早期心功能的改善作用。方法将SD大鼠60只随机分为对照组、模型组、干预组,每组20只。采用结扎左冠脉前降支方法制作模型组、干预组的心肌梗死大鼠模型,干预组采用pcDNA3.1-CTRP9重组质粒进行干预,比较各组一般情况、心肌梗死面积、心功能[左心射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVDd)、心室收缩末期内径(LVDs)、短轴缩短率(FS)]、心肌细胞凋亡率、M1/M2巨噬细胞极化情况[M1型巨噬细胞F4/80阳性和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)阳性百分比、M2型巨噬细胞F4/80阳性和精氨酸酶1(ARG-1)阳性百分比]、心肌组织中CTRP9蛋白表达量。结果干预组大鼠精神状态、毛发生长、饮食活动、存活等一般情况较模型组好转。模型组和干预组心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积、LVDs、LVDd、M1型巨噬细胞F4/80阳性和iNOS阳性百分比高于对照组(P<0.05)。干预组心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积、LVDs、LVDd、M1型巨噬细胞F4/80阳性和iNOS阳性百分比显著低于模型组(P<0.05)。模型组和干预组LVEF、FS、M2型巨噬细胞F4/80阳性和ARG-1阳性百分比低于对照组(P<0.05)。干预组LVEF、FS、M2型巨噬细胞F4/80阳性和ARG-1阳性百分比高于模型组(P<0.05)。模型组心肌组织中CTRP9蛋白表达量低于对照组(P<0.05),干预组心肌组织中CTRP9蛋白表达量高于模型组和对照组(P<0.05)。结论CTRP9可通过促进M1/M2巨噬细胞极化改善心肌梗死后早期心功能。

胃癌组织中MCP-1、MMP-9的表达与间质中TAMs浸润的关系

目的检测胃癌组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,分析它们与肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)浸润的关系及对胃癌生物学行为的影响。方法采用免疫组化SP法检测50例胃癌组织中MCP-1、MMP-9的表达及TAMs计数,以20例胃炎作对照组。结果(1)MCP-1在胃癌组织中的阳性率为(53.27±30.98)%,高于对照组的(16.21±7.64)%,两者差异有统计学意义(P<0.01);MCP-1与胃癌的淋巴结转移有关(P<0.05),与分化及分型均无关。(2)胃癌中MMP-9表达的阳性率为(37.64±24.88)%,高于对照组的(16.96±12.88)%,两者差异有统计学意义(P<0.05);MMP-9与胃癌的分化、分型和转移均相关(P<0.05)。(3)TAMs在胃癌组织中的计数为16.94±5.98,高于对照组的6.72±3.41,两者差异有统计学意义(P<0.01);在胃癌组织中TAMs计数与胃癌的组织学分型及分化无关(P>0.05),但有淋巴结转移组的TAMs计数明显高于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论MCP-1与TAMs之间可能具有协同作用,共同促进肿瘤的生长和转移;TAMs有可能通过上调肿瘤细胞MMP-9表达,促进肿瘤的侵袭和转移。

子宫颈鳞癌组织中MMP-9的表达与间质中TAMs浸润的临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达与肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)浸润与子宫颈鳞状细胞癌(squamous carcinoma of cervix,SCC)临床病理特征的关系。方法:选取50例SCC组织、30例宫颈上皮内肿瘤Ⅲ级组织(CINⅢ)及20例正常宫颈组织,采用免疫组化SP法检测MMP-9、CD68(标记TAMs)的表达。结果:SCC组织中MMP-9、CD68阳性细胞数明显多于CINⅢ组织和正常宫颈组织;SCC组织中MMP-9、CD68的表达与SCC的浸润深度、淋巴结转移和临床分期均呈正相关;SCC组织中MMP-9与CD68的表达呈正相关。结论:TAMs的浸润数量和MMP-9的表达与SCC的浸润深度、淋巴结转移和临床分期有关,TAMs浸润数量与MMP-9的表达呈正相关,MMP-9可能参与TAMs募集,而TAMs又通过分泌更多的MMP-9促进SCC的浸润、转移。