甘加藏羊发情周期输卵管和子宫中THRs的表达及分布

【目的】为阐明甘加藏羊(Ovis aries)发情周期甲状腺激素受体α(THRα)和甲状腺激素受体β(THRβ)在输卵管和子宫中表达,探讨其对藏羊繁殖活动中的调控作用。【方法】选取健康未孕处于发情周期和乏情期的甘加藏羊30只,应用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织化学染色方法研究了发情周期和乏情期输卵管和子宫组织THRα和THRβmRNA及其蛋白含量的表达和分布。【结果】THRα、THRβmRNA及其蛋白在藏羊发情周期和乏情期输卵管和子宫中均有表达,输卵管中THRα、THRβmRNA表达量在发情后期最高,显著(P<0.05)高于其他3个时期和乏情期;子宫中发情期表达量最高,与其他时期差异显著(P<0.05)。THRβmRNA的平均相对表达量显著高于THRαmRNA。输卵管组织中THRα蛋白在发情后期表达量最高,子宫中发情期最高,显著(P<0.05)高于与其他时期。输卵管和子宫中THRβ蛋白在发情后期表达量最高,与其他时期差异显著(P<0.05)。乏情期THRα、THRβmRNA及其蛋白的平均表达量显著低于发情周期各时期。免疫组织化学染色结果显示:藏羊发情周期THRα和THRβ免疫反应阳性细胞主要表达在输卵管的黏膜上皮、纤毛细胞、分泌细胞和肌层,在子宫中主要表现在基质细胞和子宫腺。【结论】THRα和THRβ二者两者浓度差异性表达,表明THRs对甘加藏羊发情时期的输卵管和子宫有一定的调控作用,可能参与甘加藏羊生殖生理活动。

甘加型藏羊发情周期和乏情期血浆NKB动态变化及HPO轴NK3R的表达

为探讨神经激肽B(NKB)和神经激肽B受体(NK3R)在甘加型藏羊(Ovis aries)繁殖调控中的作用,本研究采用酶联免疫吸附法(ELISA)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(western blot)和免疫组织化学(IHC)方法,对甘加型藏羊发情周期和乏情期血浆NKB含量、下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴组织NK3R mRNA及蛋白的表达和分布进行检测。结果表明,甘加型藏羊发情周期和乏情期血浆中NKB含量呈动态变化,NKB平均含量在发情期最低、间情期最高,二者差异显著(P<0.05),发情周期各时期的NKB含量均高于乏情期。发情周期和乏情期HPO轴组织均有NK3R mRNA和蛋白表达,且各时期表达存在差异,下丘脑中发情前期NK3R mRNA表达量最高,显著高于发情期、发情后期、间情期和乏情期(P<0.05),NK3R蛋白在发情后期表达量最高;垂体中间情期NK3R mRNA表达量最高,与其他时期差异显著(P<0.05),NK3R蛋白在发情期表达量最高;卵巢组织中NK3R mRNA和蛋白表达趋势一致,均在发情前期表达量高;NK3R蛋白主要分布于下丘脑神经内分泌小细胞和神经胶质细胞,垂体嗜酸性细胞、嫌色细胞、嗜碱性细胞,卵巢颗粒层细胞、卵泡膜、黄体细胞中。以上结果表明,NKB与HPO轴特异性受体NK3R结合,参与调节甘加型藏羊生殖内分泌和周期性发情等生殖活动。本研究结果可为深入探究藏羊繁殖调控机理提供科学依据。

甘加型藏羊血浆E_2动态变化及其受体GPR30在HPO轴的表达及定位研究

[目的]旨在探讨雌二醇(E_(2))与其膜受体(GPR30)对甘加型藏羊(Ovis arise)生殖活动的调控作用,以期为甘加型藏羊生殖生理活动规律提供研究依据。[方法]以甘加型藏羊为试验材料,采用酶联免疫吸附法、实时荧光定量PCR法、免疫印迹法和免疫组织化学染色法分别检测甘加型藏羊繁殖季节不同发情阶段(发情前期、发情期、发情后期和间情期)与非繁殖季节的乏情期血浆中E_2含量的动态变化、GPR30 mRNA及其蛋白在HPO轴的表达水平和分布情况。[结果]繁殖季节不同发情阶段与非繁殖季节乏情期血浆中E_(2)浓度呈波动式变化,波峰出现在发情后10,24,36 h和发情前期的第16天早晨,波谷出现在发情后22,39,60 h、第5天早晨和发情前期的第14天早晨,E_(2)平均浓度在发情期最高[(73.269±0.241) pg/mL],间情期最低[(57.919±0.547) pg/mL],除发情后期外,且与其他各时期差异显著(P<0.05);下丘脑和卵巢中GPR30 mRNA和蛋白的最高表达量均出现在其发情后期(P<0.05),但垂体中GPR30 mRNA表达量在间情期最高,蛋白表达量在发情前期最高(P<0.05);GPR30免疫阳性细胞主要在下丘脑大神经元胞体、胞核及轴突、神经胶质细胞胞浆,垂体嗜酸性和嗜碱性细胞胞浆以及卵巢卵泡颗粒层细胞、卵泡膜细胞和黄体细胞胞浆上表达。[结论]甘加型藏羊发情周期血浆E_(2)浓度在发情期最高,间情期最低;发情周期各时期GPR30 mRNA、GPR30蛋白及其免疫阳性细胞在下丘脑、垂体和卵巢中均有差异性表达,其中下丘脑和卵巢中GPR30 mRNA和蛋白的表达呈正相关,垂体中呈负相关,表明E_(2)通过与分布在HPO轴上的GPR30受体结合,调节甘加型藏羊周期性发情和生殖器官功能活动。

甘加型藏羊种质特性研究

本研究以甘加羊为研究对象,通过现场资源调查和实验室分析相结合的方法,对甘加羊种质资源现状、及毛、肉品质进行了系统的研究。结果表明甘加羊属肉毛兼用型异质粗毛羊,主要分布在甘南州夏河县甘加乡、达麦乡和唐尕昂乡,以夏河县甘加乡为中心产区。甘加羊羊毛两型毛、无髓毛和有髓毛的细度分别为43.47μm、24.10μm和91.37μm;甘加羊羊毛含脂率和净毛率分别为6.48%和68.25%。甘加羊羊肉中水分含量低,干物质含量和粗蛋白含量较高,肌肉内脂肪含量适中,灰分含量较低,矿物质、维生素含量丰富,其中Fe和Zn的含量分别为31.80 mg/100g和3.48mg/100g。

甘加型藏绵羊发情周期下丘脑GnRH分泌的动态变化规律

【目的】研究甘加型藏绵羊发情周期下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)分泌的动态变化及其对藏羊生殖活动的调控.【方法】选取发情周期不同阶段的甘加型藏绵羊48只,采集藏羊发情期、发情后期、间情期、发情前期的血浆.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各个时期血浆中GnRH的含量,比较研究其动态变化规律.【结果】甘加藏绵羊发情周期不同阶段血浆中GnRH分泌呈现一定的规律:在发情期和发情后期呈脉冲式分泌,间情期和发情前期既有脉冲式又有波动式分泌.分泌特点为发情前期血浆中GnRH(57.409pg/mL)开始升高,至达到最大值(73.389pg/mL),发情后期(62.058pg/mL)和间情期(55.687pg/mL)分泌量降低,其中发情期分泌量最多,且与其他3个时期差异显著(P<0.05).在整个发情周期中GnRH先后出现4个明显分泌峰,第1个峰出现在发情期4h,第2个峰出现在发情后期60h,第1个峰略高于第2个;第3个峰出现在间情期第9天早上,第4个峰出现在发情前期第14天早上,第3个峰较第4个低.【结论】了解甘加型藏绵羊发情周期下丘脑GnRH分泌的动态变化规律,以及GnRH在甘加型藏绵羊发情周期中的调控作用.

甘加藏羊发情周期不同阶段血浆生殖激素分泌规律

为研究甘加藏羊发情周期血浆中生殖激素的分泌变化规律,选取24只处于发情周期内的甘加藏羊,采集甘加藏羊发情周期不同阶段的血液,采用酶联免疫分析法(ELISA)检测甘加藏羊发情周期血浆中促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、孕酮(P)和雌激素(E)的分泌变化。结果显示,FSH含量在发情期最高,为3.406 m IU/m L,发情后期降低至2.492 m IU/m L,间情期又开始升高,至发情前期达2.727 m IU/m L,发情期含量极显著高于发情后期、间情期和发情前期;LH含量在间情期最高,为4.377 m IU/m L,发情后期显著低于间情期和发情前期;P含量在发情前期最高,为18.039 ng/m L,发情期降至16.196 ng/m L,发情后期缓慢升高,间情期达17.127 ng/m L,发情前期极显著高于发情期与发情后期;E含量在发情前期最低,为29.625 pg/m L,发情期升高(36.035 pg/m L),发情后期达到最高,为38.573 pg/m L,间情期又降低(35.531 pg/m L),发情后期极显著高于发情期、间情期以及发情前期,发情期与间情期极显著高于发情前期。

甘加型藏羊发情周期血浆雌激素测定及HPO轴ERα的表达

为研究甘加型藏羊(Ovis arise)发情周期内血浆雌激素的分泌规律及其受体α(Estrogen receptorα,ERα)在下丘脑-垂体-卵巢(Hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPO)组织中的表达及分布,选取发情周期内健康且未孕甘加型藏羊32只,运用酶联免疫分析法(ELISA)研究其血浆雌激素分泌规律,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹技术(Western Blot)和免疫组织化学染色法(IHC)检测HPO组织中ERαmRNA及蛋白的表达与分布。结果显示,发情周期内血浆雌激素含量呈脉冲式和波动式交替变化,发情期最高,发情后第10小时达到第1个峰值(97.21 ng/mL);ERαmRNA及蛋白在HPO中均有表达。下丘脑组织中发情后期最高,显著高于间情期;垂体组织中发情期最高,与其他3个时期差异显著;卵巢组织中在发情前期最高,各时期表达差异显著。免疫组织化学试验结果显示,ERα阳性表达主要在下丘脑促垂体区神经胶质细胞胞核和大神经元胞体及轴突分布;在垂体远侧部及中间部嗜酸性细胞胞核中高表达,胞浆中表达较弱,在卵巢的生长卵泡颗粒细胞胞浆和胞核、卵泡内膜细胞及黄体细胞胞浆中分布。甘加型藏羊发情周期内血浆雌激素及其受体在HPO组织中呈动态表达变化,表明雌激素及其受体α参与调节甘加型藏羊的生殖生理活动。

甘加藏羊发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴KISS-1/GPR54的表达与分布

为了研究高原甘加藏羊(Ovis aries)发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamic-pituitary-ovary axis,HPOA)中肿瘤转移抑制基因(kisspeptins,KISS-1)/G蛋白偶联受体54(G protein-coupled receptors 54,GPR54)的表达及其对藏羊季节性发情周期的调控作用,本实验选取处于发情周期的甘加藏羊32只,应用qRT-PCR和免疫组织化学技术,检测其在发情周期HPOA组织中的表达和分布。qRT-PCR结果显示,甘加藏羊整个发情周期HPOA组织中均有KISS-1和GPR54 mRNA表达。下丘脑组织中发情前期KISS-1 mRNA相对表达量显著(P<0.05)高于其他3个发情时期;在垂体组织中发情前期和间情期的相对表达量较高,与发情后期差异显著(P<0.05);卵巢轴组织中间情期的相对表达量最高,显著(P<0.05)高于其他3个时期。下丘脑组织中发情期GPR54 mRNA相对表达量显著(P<0.05)高于其他3个时期;垂体组织中发情前期的相对表达量显著(P<0.05)高于其他时期;卵巢轴组织中发情后期的相对表达量显著(P<0.05)高于其他时期。免疫组织化学染色结果显示:Kisspeptin和GPR54阳性产物在下丘脑中主要分布于促垂体区的弓状核、脑室前腹侧区;腺垂体中主要在嗜碱性细胞和嫌色细胞中表达;卵巢轴中主要在卵泡颗粒层及卵泡内膜上表达。KISS-1和GPR54在藏羊发情周期HPOA中的差异表达,对藏羊季节性发情周期有一定的调控作用。

甘加型藏绵羊发情周期内输卵管和子宫中MTR1a mRNA的表达

旨在研究褪黑素受体(MTR1a)基因在甘加型藏绵羊(Ganga Tibetan ovis aries)输卵管和子宫组织中的表达规律,选取发情周期内正常且未孕的甘加型藏绵羊32只,应用qRT-PCR方法检测输卵管和子宫组织中MTR1a基因的表达差异。结果显示:在整个发情周期中,甘加型藏绵羊输卵管和子宫中均有MTR1a mRNA表达。在发情前期、发情期、发情后期、间情期4个阶段,输卵管组织中MTR1a mRNA的相对表达量分别为0.604±0.253、 0.033±0.031、 0.202±0.151和1.000±0.221,间情期的相对表达量最高,与发情期差异极显著,与其他时期差异显著;子宫组织中MTR1a mRNA的相对表达量分别为0.188±0.086、0.525±0.347、1.878±0.209和1.000±0.094,发情后期的相对表达量最高,与其他3个时期差异极显著。发情周期内MTR1a基因在输卵管和子宫中的表达变化规律表明褪黑素(Melatonin,MT)在动物排卵、受精及早期胚胎发育过程中起调节作用。

甘加藏羊发情周期和乏情期血浆T3和T4浓度动态变化及HPOA轴DIO2和DIO3的表达

为探讨甲状腺激素(T3、T4)及其合成酶(DIO2、DIO3)对甘加藏羊生殖活动的调控,本研究以发情周期和乏情期甘加藏羊(Ovis arise)为研究对象,应用酶联免疫吸附法、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测甘加藏羊发情周期和乏情期血浆中T3和T4的动态变化、下丘脑-垂体-卵巢轴(Hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPOA)及甲状腺组织中DIO2、DIO3 mRNA和蛋白的表达。结果显示:整个发情周期和乏情期血浆中T3和T4浓度均以脉冲式和波动式交替变化,T4的浓度均显著高于T3,T3的平均浓度在发情前期最高,T4的平均浓度在发情期最高,与其他各时期比较差异均显著。藏羊发情周期和乏情期HPOA和甲状腺组织中均有DIO2、DIO3 mRNA及其蛋白的表达,且差异显著;垂体、卵巢、甲状腺DIO2 mRNA及其蛋白的相对表达量均高于DIO3 mRNA及其蛋白的相对表达量。甘加藏羊发情周期和乏情期血浆T3、T4的浓度和DIO2、DIO3在HPOA及甲状腺组织中的表达呈现动态变化,表明甲状腺激素及其合成酶参与调控甘加藏羊的生殖活动。

甘加藏羊发情周期血浆Kisspeptin动态变化和PHPT轴中Kiss1/GPR54的表达与分布

松果体-下丘脑-垂体-甲状腺轴(PHPTA)对动物的繁殖活动有重要的调节作用。为探讨Kiss1/GPR54系统在甘加藏羊PHPT轴的表达及其对繁殖活动的调控,选取24只处于发情周期内健康未孕的甘加藏羊作试验组,6只处于非繁殖季节的甘加藏羊作对照组,运用酶联免疫吸附法检测其血浆Kisspeptin动态变化,用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织化学方法检测视神经、松果体、下丘脑、垂体和甲状腺组织中Kiss1、GPR54 mRNA及其蛋白的表达与分布。结果显示:血浆Kisspeptin分泌量在发情后期显著高于其他时期(P<0.05),繁殖季节内各时期分泌量均显著高于非繁殖季节(P<0.05)。Kiss1、GPR54 mRNA及其蛋白在视神经、PHPT轴组织中均有表达:视神经Kiss1、GPR54 mRNA相对表达量在发情前期显著高于其余时期;松果体在Kiss1 mRNA及其蛋白乏情期达到最大值,显著高于繁殖周期;下丘脑和甲状腺Kiss1、GPR54 mRNA相对表达量均在发情后期显著升高(P<0.05);垂体组织中二者mRNA的相对表达量在发情期显著高于其他时期。免疫组织化学检测结果显示:在视神经中,Kisspeptin与GPR54分别主要分布在神经胶质细胞核与胞质中;松果体细胞胞质中二者均呈强阳性表达;在下丘脑中,Kisspeptin表达在神经内分泌小细胞和神经胶质细胞中,GPR54表达在神经内分泌小细胞胞质中;在垂体组织中,Kisspeptin和GPR54主要表达在嗜碱性细胞的胞质中;而在甲状腺中,二者主要表达在滤泡细胞胞质中。甘加藏羊发情周期血浆Kisspeptin的动态变化及Kiss1、GPR54在各组织中的差异表达,表明Kiss1/GPR54系统参与调节了甘加藏羊的生殖生理活动。

甘加羊发展现状及提质增效途径探讨

对甘加羊的选育情况、现有品种标准及产品商标情况及近15~20年消长形势进行系统阐述,并针对存在问题,提出了甘加羊提质增效的途径。

甘加型藏羊发情周期血浆孕酮动态变化及HPO轴PGR的表达

为研究甘加型藏羊(Ovis arise)发情周期血浆孕激素(P4)的分泌及孕激素受体(Progesterone receptor,PGR)在HPO轴中的表达,分析其在藏羊繁殖活动中的调控作用,本研究应用酶联免疫吸附试验、蛋白免疫印迹法、实时荧光定量和免疫组织化学染色法检测甘加型藏羊发情周期血浆中孕酮含量的动态变化、HPO组织中PGR mRNA及其蛋白的表达和组织分布。结果显示:1)甘加型藏羊发情周期血浆孕酮呈波动式和脉冲式分泌,在间情期达到最高峰值,发情期最低,二者差异显著(P<0.05)。2)PGR mRNA及其蛋白在HPO组织中均有表达;下丘脑中,PGR mRNA及其蛋白相对表达量在间情期最高,各时期之间差异显著(P<0.05);垂体中,PGR mRNA表达量在发情后期达到最高,显著高于发情前期和间情期(P<0.05),发情前期蛋白相对表达量高于其他时期;卵巢中,PGR mRNA在发情期最高,与间情期差异显著(P<0.05),蛋白表达水平在发情前期最高。3)PGR免疫阳性反应产物表达在下丘脑神经胶质细胞和大神经元胞体中,腺垂体嗜酸性细胞和嗜碱性细胞的胞浆中,卵巢生长卵泡的颗粒层细胞、卵泡膜细胞以及黄体细胞胞浆中。综上,甘加型藏羊发情周期血浆中孕酮含量的动态变化、HPO轴中PGR mRNA、蛋白的差异性表达表明孕酮通过与分布在HPO生殖轴上的PGR受体结合,调节甘加型藏羊周期性发情和生殖器官的功能活动。

高原甘加藏羊发情周期垂体FSH β和LH β mRNA表达差异的研究

为了研究高原甘加藏羊发情周期垂体组织中促卵泡素β亚基(FSHβ)和促黄体素β亚基(LHβ)基因在m RNA水平的表达规律,选取发情周期不同阶段的高原甘加藏羊24只,从其垂体组织中提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术,以β-actin为内参基因,比较研究了高原甘加藏羊发情周期垂体组织中FSHβ和LHβ基因在m RNA水平的表达差异。结果显示,FSHβ和LHβ的m RNA在高原甘加藏羊发情周期不同阶段的垂体组织中均有表达。发情前期、发情期、发情后期和间情期的FSHβm RNA相对表达量分别为0.235 9、1.0、3.547 5和3.666 7,发情前期与发情期、发情后期和间情期差异极显著(P<0.01),发情期与发情后期和间情期差异显著(P<0.05),发情后期与间情期差异不显著(P>0.05);LHβm RNA相对表达量为0.025 9、1.0、16.109 1和0.563 8,发情前期与发情期、发情后期和间情期差异极显著(P<0.01),发情期与发情后期差异极显著(P<0.01)、与间情期差异不显著(P>0.05),发情后期与间情期差异极显著(P<0.01)。因此,甘加藏羊发情周期内垂体组织中FSHβ和LHβ在m RNA水平上的表达呈现一种动态差异性变化趋势。本研究结果在分子水平上为揭示藏羊生殖内分泌调控机制提供了科学数据。

甘加型藏羊发情周期阴道细胞变化规律

采用阴道涂片法,观察了8只甘加型藏羊连续2个发情周期阴道细胞涂片,统计分析了发情周期不同时期阴道细胞种类、形态变化特点及其所占比例。结果显示:甘加型藏羊发情周期阴道涂片中主要有副基底层上皮细胞、中间层上皮细胞、表层上皮细胞、不完全角化上皮细胞、完全角化上皮细胞、白细胞和细胞碎片。发情期角化细胞所占比例最高,显著高于发情前期、发情后期和间情期(P<0.05);发情前期表层上皮细胞所占比例显著高于其他三个时期(P<0.05);间情期和发情后期白细胞所占比例显著高于发情前期和发情期;中间层上皮细胞在各时期所占比例差异不显著(P>0.05)。结果表明:根据涂片中阴道细胞种类和各类细胞所占比例的变化特点可以简便、快速准确地鉴定和区分甘加母羊发情周期的不同阶段,阴道凃片是高效、准确的发情鉴定方法。

高原甘加型藏羊发情周期不同阶段卵巢FSHR和LHR基因表达差异的研究

为研究高原甘加型藏羊发情周期卵巢组织中促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)基因在mRNA水平上的表达规律,选取发情周期不同阶段的甘加型藏羊24只,从其卵巢组织中提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术,以GAPDH为内参基因,比较研究了高原甘加型藏羊发情周期卵巢组织中FSHR和LHR基因在mRNA水平的表达差异。结果显示,FSHR mRNA和LHR mRNA在整个发情周期的卵巢组织中都有表达。发情前期、发情期、发情后期、间情期的FSHR mRNA表达量分别为46.0±0.21、51.7±0.33、17.7±0.56、1.0±0.82,其中发情期表达量最高,极显著高于间情期(P<0.01);LHR mRNA表达量分别为19.8±2.63、30.1±1.81、85.3±0.63、1.0±1.37,其中发情后期表达量最高,极显著高于间情期(P<0.01)。甘加型藏羊FSHR和LHR发情周期在mRNA水平上表达量不相同,呈现一种动态变化趋势。这一研究结果为藏羊的生殖内分泌调控机制研究提供了分子水平的试验数据和进一步研究依据。

甘加藏羊发情周期腺垂体和血浆中GTH含量动态变化

为了探讨甘加藏羊发情周期腺垂体和血浆中FSH和LH含量动态变化规律及排卵的关系。选取2.5~5岁,健康未孕雌性甘加藏羊30只,采集发情周期各阶段和乏情期腺垂体和血浆,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定发情前期、发情期、发情后期、间情期及乏情期腺垂体和血浆中FSH和LH的含量。结果表明,甘加藏羊发情周期内腺垂体FSH浓度在发情期(6.873IU/L)和发情后期(6.863IU/L)较低,与间情期最大(8.228IU/L)差异显著(P<0.05),发情前期又降低(8.096IU/L);腺垂体LH浓度发情期(9.39IU/L)和发情后期(9.585IU/L)较低,间情期最大(10.629IU/L),发情前期(9.7325IU/L)降低,各时期差异不显著(P>0.05);发情周期内血浆中FSH浓度在发情前期(2.599IU/L)达到峰值,其他时期均较低,发情前期与其他时期差异显著(P<0.05);血浆LH浓度在发情期(3.866IU/L)达到峰值,发情后期(3.179IU/L)和间情期(3.292IU/L)降低,各时期差异不显著(P>0.05);并且FSH和LH在发情周期内均出现4个波峰:乏情期腺垂体和血浆中FSH和LH的浓度均低于发情周期内FSH和LH各自的基础值。FSH和LH含量在垂体和血浆的这些差异性应该是两者协同调控藏羊发情和排卵的主要原因。

甘加藏羊发情周期血浆FSH和LH的分泌规律

为了研究甘加藏羊发情周期血浆中促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)的分泌变化规律及其与藏羊繁殖力之间的关系,采用酶联免疫分析法(ELISA)测定发情期、发情后期、间情期和发情前期血浆中FSH和LH的含量,并分析其动态变化规律。结果显示,FSH和LH在发情期、发情后期和发情前期的分泌均呈现脉冲式变化,而间情期既有脉冲式分泌又有波动式分泌。FSH和LH在发情周期中先后均出现4个分泌峰,其中FSH和LH的第1个峰分别出现在发情的2h和0h;第2个峰分别出现在72h和69h;第3个峰分别出现在第10天和第9天;第4个峰分别出现在第13天和第12天。FSH和LH的分泌趋势相似,其特点是分泌量先在发情期升高,然后在发情后期和间情期降低,最后在发情前期又升高。结果表明,发情周期不同阶段FSH和LH的分泌方式明显不相同。在发情期和发情后期,FSH出现峰值的时间分别比LH晚2h和晚3h;在间情期和发情前期,FSH出现峰值的时间比LH晚1d,并且FSH和LH形成2个分泌峰的时间间隔不同。

高原甘加藏羊发情周期GnRHR基因在垂体和卵巢表达规律的研究

探究高原甘加藏羊发情周期促性腺激素释放激素受体（GnRHR）基因在垂体和卵巢组织中的表达规律,选取处于繁殖期健康未孕高原甘加藏羊48只,分为4组,每组12只,分别于发情前期、发情期、发情后期、间情期从甘加藏羊垂体和卵巢组织中提取总RNA,应用荧光定量RT-PCR方法,以GAPDH为内参,研究高原甘加藏羊发情周期垂体和卵巢组织中GnRHR基因表达的差异。结果显示：高原甘加藏羊整个发情周期不同阶段GnRHR mRNA在垂体和卵巢组织中均有表达。在甘加藏羊发情前期、发情期、发情后期、间情期垂体组织中GnRHR mRNA的相对表达量依次为0.8246±0.1739、1.5100±0.4187、0.2923±0.0202、1.0000±0.2100,其中发情期的相对表达量最高,与发情后期差异极显著（P〈0.01）,与发情前期、间情期差异显著（P〈0.05）;在卵巢组织中,GnRHR mRNA的相对表达量分别为1.0910±0.7665、0.5420±0.0763、1.3799±0.7452、1.0000±1.1221,其中发情后期的相对表达量最高,与发情期差异极显著（P〈0.01）,与发情前期、间情期差异显著（P〈0.05）。这一研究结果为在分子水平上研究藏羊生殖活动调控机理提供了科学数据。

甘加型藏羊发情周期Kiss-1/GPR54在生殖器官中的表达和分布

为阐明高原甘加藏羊(Ovis aries)发情周期Kiss-1/GPR54在生殖器官中的表达及其对藏羊繁殖调控的影响,选取30只处于发情周期和乏情期的甘加藏羊,分别应用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织化学染色等方法研究了发情周期和乏情期卵巢、输卵管和子宫组织中Kiss-1、GPR54 mRNA及其蛋白含量的表达和分布。结果表明,Kiss-1、GPR54 mRNA及其蛋白在发情周期和乏情期的卵巢、输卵管和子宫中均有表达,发情周期卵巢中Kiss-1、GPR54 mRNA及其蛋白相对表达量在发情期达到最大值,各时期差异显著(P<0.05);子宫中Kiss-1 mRNA及其蛋白在间情期表达量最高,显著高于发情周期其他3个时期(P<0.05);GPR54 mRNA及其蛋白在发情期相对表达量显著高于其他时期(P<0.05);输卵管中Kiss-1、GPR54 mRNA在发情期达表达量最高,而Kiss-1、GPR54蛋白在发情前期表达量达到最高,显著高于其他时期(P<0.05)。乏情期Kiss-1、GPR54 mRNA及其蛋白的表达显著低于发情周期各时期,差异显著。免疫组织化学染色结果显示,Kisspeptin和GPR54的免疫阳性产物在卵巢中主要分布在卵泡颗粒层以及卵泡膜上,在输卵管中主要在黏膜上皮的纤毛细胞、分泌细胞中表达,在子宫中主要在上皮细胞和基质细胞中表达;说明两者参与甘加藏羊生殖生理活动,并可能对其产生一定的调控作用。