宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP基因及蛋白水平改变关系的研究

目的研究宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP基因及蛋白水平改变的关系。方法以我院收治的70例宫颈癌患者为观察组,另选正常宫颈组织70例为对照组。分别对两组对象的宫颈组织进行DNA提取、总RNA提取、cDNA合成、PCR反应扩增。并检测HPV感染、Rap1GAP基因外显子E11和E19缺失率、Rap1GAP mRNA表达及Rap1GAP蛋白表达情况。结果观察组患者HPV感染明显高于对照组(P<0.05)。观察组HPV阳性和阴性组E11和E19的缺失率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Rap1GAP mRNA、Rap1GAP蛋白在观察组HPV阳性组组织中的表达率、阳性表达率明显低于HPV阴性组(P<0.05)。宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP mRNA的表达呈正相关(r=0.578),与Rap1GAP蛋白的阳性表达呈正相关(r=0.554)。结论宫颈癌中HPV感染与Rap1GAP mRNA的表达呈正相关,与Rap1GAP蛋白的阳性表达呈正相关。

罗非鱼无乳链球菌gap基因的原核表达及免疫原性研究

试验旨在探究罗非鱼无乳链球菌(GBS)膜蛋白gap的免疫原性。试验提取GBS的DNA,利用PCR扩增出gap基因,并与表达载体pET-28a-SUMO构建重组质粒,转化至大肠杆菌BL21;经IPTG诱导、SDS-PAGE分析和Western blot检测确定其表达效果。采用纯化的gap蛋白与弗氏佐剂乳化腹腔注射免疫罗非鱼,以间接ELISA法检测血清效价并使用GBS进行攻毒试验。结果显示,PCR扩增出1011 bp大小的单条带gap基因,与预期一致;重组载体pET-28a-gap在23℃、0.4 mmol/L IPTG、12 h条件下成功表达49.8 ku的可溶性蛋白;ELISA检测显示,重组蛋白gap能够产生较高的血清抗体效价水平,对GBS攻毒后的罗非鱼相对保护率为64.1%。研究表明,重组蛋白gap具有较好的免疫原性,为鱼类的链球菌病的预防提供新的理论依据。

Rap1 gap基因在造血细胞中的调控功能和表达(英文)

Rap1是Ras超家族中一种微小G蛋白。在不同的组织细胞中,Rap1在调节细胞增殖、分化以及黏附方面都发挥着十分重要的作用。在调控细胞增殖和分化的过程中,Rap1可能通过调控细胞内促丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)以及细胞外信号激酶(ERK)通路来发挥作用。Rap1对特定种类细胞的ERK信号途径是增强还是减弱,取决于该种细胞是否具有Raf1或B-Raf。Rap1调控的活性通路独立于Ras通路,但两者之间又相互作用。而Ras基因的致癌突变发生在超过30%的人类恶性肿瘤中。本综述对Rap1在造血细胞发育中的调控功能,以及它在恶性血液病中的改变和作用作一简明扼要的介绍。

用gap基因和MALDI-TOF MS技术对临床常见凝固酶阴性葡萄球菌快速分子鉴定

目的研究旨在通过对比gap基因和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)蛋白质质谱鉴定,建立对临床常见凝固酶阴性葡萄球菌( coagulase negative staphylococcus,CNS )的快速分子学鉴定。方法用gap基因对临床常见 CNS 进行扩增和测序,获得序列在GenBank中进行比对,构建进化树进行同源分析,同时与MALDI-TOF MS蛋白质质谱鉴定比较。结果Gap基因相似率为39%~98%,有足够序列差异区分 CNS 。进化树同源分析显示, CNS 分类具有较高的可信度(大于77%);MALDI-TOF MS蛋白质质谱鉴定与gap基因鉴定符合率为100%。结论MALDI-TOF MS蛋白质质谱鉴定可以用于 CNS 的快速、准确鉴定,比传统方法和分子方法具有优势。

Rap1GAP基因表达上调对HL-60细胞体内及体外侵袭能力的影响

目的 探讨上调Rap1 GAP基因表达对白血病细胞株HL-60细胞体外侵袭能力的影响,并构建白血病动物模型验证体外实验的结果.方法 采用实时定量PCR及Western blot法检测已构建的Venus/HL-60细胞（空载体对照组）及Rap1 GAP过表达单克隆细胞株Rap1 GAP/HL-60 （R1、R2）细胞的Rap1GAP表达水平,Transwell方法检测空载体对照组、R1、R2细胞的体外侵袭能力,实时定量PCR检测各组细胞MMP-9 mRNA表达,并通过明胶酶谱法检测MMP-2及MMP-9活性;将4周龄BALB/c裸鼠进行预处理后接种白血病细胞,观察各组裸鼠生存时间及白血病细胞在其脏器中的浸润情况.结果 R1、R2细胞的Rap1GAP表达水平分别为空载体对照组的16.2、17.3倍,侵袭率分别为（55±5）％、（59±4）％,显著高于空载体对照组的（14±4）％（P值均＜0.001）.R1和R2细胞的MMP-9 mRNA表达水平增加,约为空载体对照组的12.0倍.动物模型实验结果显示接种R1细胞裸鼠（R1组）生存时间为（32.00±1.85）d,R2组为（33.37±2.50）d,空载体对照组为（43.62±2.32）d,R1组和R2组裸鼠生存时间较空载体对照组缩短（P＜0.05）.R1组和R2组共有3只裸鼠出现脑膜组织浸润,脑膜组织扩增出Rap1GAP和MMP-9基因,空载体对照组裸鼠各脏器白血病细胞浸润不明显.结论 Rap1GAP增强HL-60细胞侵袭能力,同时伴随MMP-9 mRNA表达水平升高,裸鼠体内实验亦证实Rap1GAP提高了HL-60细胞体内侵袭力.

人类抑癌基因DAB2IP和P120GAP的克隆真核细胞表达和功能性检测探索

DAB2IP和P120GAP是两种在癌症发生发展进程中具有重要作用的抑癌基因,通过研究克隆这两种抑癌基因,并构建真核表达载体p CMV-Tag2b/Flag-DAB2IP/P120GAP转染293细胞进行表达检测,最后对RAS进行功能检测,进而研究DAB2IP和P120GAP对于RAS蛋白的影响。

早期耳鸣和持续耳鸣对大鼠听觉中枢GAP43和egr-1基因表达的影响及变化

目的通过检测早期耳鸣与持续耳鸣大鼠听觉通路中GAP43和egr-1基因的表达情况来探讨耳鸣发生的中枢源性机制。方法将48只大鼠随机分为6组,每组均8只:水杨酸钠组分为早期组与持续组,每次训练前2小时腹腔注射10%水杨酸钠溶液(400mg/kg),其中持续组在耳鸣模型建立成功后,继续每天同一时间腹腔注射相同剂量水杨酸钠溶液10天;盐水1组与盐水2组,每次训练前2小时腹腔注射与水杨酸钠组相同体积生理盐水,其中盐水2组在造模成功后,继续每天同一时间腹腔注射同体积生理盐水10天;空白对照组也分为空白1组与空白2组。早期组、盐水1组、空白1组同时断头取标本,而盐水2组、空白2组与持续组一同断头取标本。再利用实时荧光(sybgreena染料法)相对定量PCR检测GAP43和egr-1的mRNA在听觉通路四个核团中的表达情况。结果空白组与生理盐水组相比较,听皮层GAP43与egr-1的mRNA表达水平明显提高(P<0.01)。耳蜗核中GAP43的mRNA随着水杨酸钠注射次数的增加先下降(P<0.01),后又逐渐回升(P<0.01);egr-1mRNA明显下降(P<0.01)。下丘GAP43、egr-1的mRNA表达水平均有明显提高。上橄榄核中,仅持续组GAP43的mRNA有明显降低(P<0.01);两组水杨酸钠组的egr-1的mRNA随着水杨酸钠注射次数的增多而逐渐降低(P<0.05)。结论 GAP43和egr-1基因表达水平的改变不但证实了由水杨酸钠诱导的耳鸣大鼠的听觉通路中听觉神经元发生了可塑性改变,并且能够维持这种可塑性改变,从而使大鼠耳鸣症状得以长期持续。

TaqMan实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数

以3-磷酸甘油醛脱氢酶为内参基因,建立一种快速检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的TaqMan荧光定量PCR方法。通过对反应参数进行优化,建立针对目的基因和内参基因的双标准曲线,并对重组酵母基因组中外源基因和内参基因的拷贝数进行同时定量检测,外源基因与内参基因起始模板拷贝数的比值即为外源基因在重组酵母菌株基因组中的拷贝数。结果表明,2条标准曲线在101～108拷贝.μL-1具有良好的线性关系,以及良好的敏感性和重复性。利用该方法对60株重组酵母菌株进行荧光定量PCR检测,结果筛选到38株单拷贝插入菌株和22株多拷贝插入菌株。本研究所建立的TaqMan探针荧光定量PCR方法方便、高效,可用于重组毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的检测。

实时荧光定量PCR技术运用于肝癌患者基因检测

目的探讨实时荧光定量PCR SYBR Green I探针技术在研究肝癌患者中基因表达情况的可行性。方法运用实时荧光定量PCR SYBR Green I技术,检测肝癌患者癌组织及癌旁组织RAP1GAP基因表达情况。结果实验组和对照组有明显的统计学差异。结论Real-time PCR技术检测目的基因的表达是非常方便快捷准确的方法。

卵巢癌患者HPV16/18感染与抑癌基因Rap1GAP表达的关系

目的探讨卵巢癌患者人乳头瘤病毒16/18(HPV16/18)感染与抑癌基因Rap1GAP表达的相关性。方法回顾性选取2014年3月-2019年10月河南大学淮河医院妇科收治的200例卵巢癌患者作为研究对象,依据患者是否发生HPV16/18感染将其划分为感染组(n=106)和非感染组(n=94),检测和比较两组患者卵巢组织的Rap1GAP基因表达情况,分析卵巢癌患者HPV16/18感染和Rap1GAP基因表达之间的相关性。结果HPV16/18感染组Rap1GAP mRNA相对含量和表达率均低于非感染组(P<0.05),且Rap1GAP mRNA在卵巢癌中的表达与HPV16/18感染呈负相关性(r=-0.613,P=0.142)。200例卵巢癌患者中,HPV16/18感染与患者是否合并有糖尿病、肿瘤分化程度、性伴侣数、有无异体输血和Rap1GAP mRNA表达率有关(P<0.05);多因素分析结果显示,肿瘤低分化、性伴侣数≥2个和Rap1GAP mRNA表达(-)是卵巢癌患者HPV16/18感染的影响因素(P<0.05)。结论抑癌基因Rap1GAP在卵巢癌HPV16/18感染患者中的表达率和相对含量均较低,其与卵巢癌HPV16/18感染呈负相关性,Rap1GAP可能共同参与了卵巢癌的发生、发展过程。

宿主RAB3GAP2基因单核苷酸多态性与流感疫苗免疫应答的关联性

目的探讨宿主RAB3GAP2基因的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)与流感疫苗免疫应答的关联性。方法采用巢式病例对照研究方法,于2009-2019年在中国2个地区招募健康人群接种三价流感灭活疫苗,采集接种前和接种后28d血清样本,检测血凝抑制抗体;三种流感病毒疫苗成分抗体均血清阳转者(应答组)和均未血清阳转者(低应答组)进行RAB3GAP2基因5个SNP位点的基因型检测,比较两组基因型频率分布。结果流感疫苗低应答组和应答组分别纳入227名和365名研究对象。宿主RAB3GAP2基因rs12404566位点的AA基因型频率与TT+TA基因型相比在低应答组中更高(OR=3.67,95%CI:1.09-12.35);rs2289189位点的CG+GG基因型频率与CC基因型相比在低应答组中更高(OR=1.93,95%CI:1.20-3.10);5个SNP位点组成的GTTTG单体型频率与GTGTC单体型相比在低应答组中更高(OR=1.90,95%CI:1.14-3.18)。结论宿主RAB3GAP2基因SNP与流感疫苗的免疫应答存在关联性,可为优化流感疫苗个体化接种提供参考。

一例RAB3GAP1变异所致的Warburg micro综合征1型的分析

目的探讨1例发育落后患儿的临床及遗传学特征。方法对患儿进行全外显子组测序分析,并用Sanger测序对变异位点进行验证。结果全外显子组测序显示患儿携带两个RAB3GAP1基因的杂合性剪接变异:c.2607-1G>C和c.899+2dupT,分别遗传自其表型正常的母亲和父亲。结论确诊了1例罕见的Warburg micro综合征1型。患儿的表型与文献报道一致,并存在腭弓发育不良、显著的高腭弓及牙齿发育不良等罕见表现。

16种常见凝固酶阴性葡萄球菌的快速分子鉴定

目的 建立对16种常见凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）的快速分子鉴定.方法 用gap基因对16种常见CNS进行扩增和测序,获得序列在GenBank进行比对,构建进化树进行同源分析,同时与16S rRNA基因比较.结果 16种常见CNS中,gap基因相似率介于39% ～ 98%,人葡萄球菌和与人葡萄球菌亚种相似率最高（98%）,腐生葡萄球菌与木糖葡萄球菌相似率最低（39％）,16SrRNA基因相似率介于96% ～ 99%,至少2种细菌99%以上相似率,最多4种葡萄球菌99%以上相似率；进化树同源分析显示,两种方法在检测缓慢葡萄球菌与松鼠葡萄球菌、产色葡萄球菌与中间葡萄球菌和人葡萄球菌与人葡萄球菌亚种时,都有很高的可信度（99%以上）,而对于其他10种细菌,gap基因同源分析有较少的不可靠信度（49%,56%）,16S rRNA基因同源分析有较多不可靠信度（43%、43%、50%、56%、63%、65%、76%）.结论 gap基因序列分析能够对16种常见CNS进行准确鉴定,同源分析可信度要明显优于16S rRNA基因.

不明原因发热患者骨髓中分离解糖葡萄球菌的实验研究

目的建立对解糖葡萄球菌的快速分子诊断,为临床药物治疗提供帮助。方法采用碱裂解法从血培养瓶中提取DNA,用16SrRNA和gap基因分别对细菌进行检测,构建进化树进行同源分析,同时用连续梯度药敏试验(E-test)方法进行药敏试验。结果 16SrRNA序列分析显示,与该细菌>99.0%相似率的细菌有5种,同源分析显示,该菌与解糖葡萄球菌低度同源为45.0%;gap基因分析显示与该细菌>99.0%相似率有解糖葡萄球菌1种,具有高度同源为100.0%;E-test试验结果万古霉素1.5μg/ml、青霉素0.002μg/ml、克林霉素0.023μg/ml、左氧氟沙星0.094μg/ml和甲硝唑256μg/ml。结论 gap基因序列分析能够及时准确鉴定解糖葡萄球菌,在数据同源分析方面要优于16SrRNA基因。