通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(C on A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好。对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RN ase B...通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(C on A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好。对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RN ase B)为模型,对其进行了纯化;用糖苷酶切除糖链,并对切除糖链前后的RN ase B用胰蛋白酶酶解;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD I-TO F M S)对亲和色谱分离得到的糖蛋白、糖链及糖肽进行了分析,确定了RN ase B的一级结构、糖含量、糖基化位点及糖连接方式。该方法快速准确,适于糖蛋白和糖肽的分离表征。将其应用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分离富集,取得了很好的效果。展开更多
运用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对酶解螺蛳腹足肌得到的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽进行两步分离提纯,第一步主要得到8个组分;选取其中活性最高的组分进一步分离,得到2个组分,其中活性较高组分的ACE半抑制浓度为43.5μm o l/L,基本为...运用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对酶解螺蛳腹足肌得到的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽进行两步分离提纯,第一步主要得到8个组分;选取其中活性最高的组分进一步分离,得到2个组分,其中活性较高组分的ACE半抑制浓度为43.5μm o l/L,基本为单一肽组分。对提纯的组分分别使用高效液相色谱/电喷雾离子质谱法(HPLC/E S I-M S)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALD I-TO F M S)进行分析,同时结合氨基酸组成分析结果,最终得到的肽链一级结构为Lys-G lu-Ile-Trp(KE IW),符合已知的高活性ACE抑制肽的结构规律。经过对两种方法分析过程的比较,认为E S I-M S可以得到多方面的信息,但无法确定肽的序列;MALD I-TO F M S可以得到精确的二级质谱图(m/z精确至0.000 1),从而可以得到确定的肽的序列。展开更多
应用芴甲氧羰基(Fm o c)固相化学合成了海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ,并优化了其最佳氧化复性条件。最佳的氧化复性条件为pH7.5的重蒸水溶液体系,样品质量浓度为0.1g/L,还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的浓度分别为1.0mm o l/L和0.1mm o l/L、L-A...应用芴甲氧羰基(Fm o c)固相化学合成了海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ,并优化了其最佳氧化复性条件。最佳的氧化复性条件为pH7.5的重蒸水溶液体系,样品质量浓度为0.1g/L,还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的浓度分别为1.0mm o l/L和0.1mm o l/L、L-A rg浓度为1.0m o l/L。复性产物经质谱测定其相对分子质量为3 607.68;与天然毒素等量混合后用高效液相色谱分析得到单一峰;膈神经-膈肌标本生理实验结果表明,合成的毒素具有与天然毒素相同的生物学活性,从而可确定二者在结构与功能上具有一致性。展开更多
文摘通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(C on A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好。对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RN ase B)为模型,对其进行了纯化;用糖苷酶切除糖链,并对切除糖链前后的RN ase B用胰蛋白酶酶解;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD I-TO F M S)对亲和色谱分离得到的糖蛋白、糖链及糖肽进行了分析,确定了RN ase B的一级结构、糖含量、糖基化位点及糖连接方式。该方法快速准确,适于糖蛋白和糖肽的分离表征。将其应用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分离富集,取得了很好的效果。
文摘运用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对酶解螺蛳腹足肌得到的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽进行两步分离提纯,第一步主要得到8个组分;选取其中活性最高的组分进一步分离,得到2个组分,其中活性较高组分的ACE半抑制浓度为43.5μm o l/L,基本为单一肽组分。对提纯的组分分别使用高效液相色谱/电喷雾离子质谱法(HPLC/E S I-M S)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALD I-TO F M S)进行分析,同时结合氨基酸组成分析结果,最终得到的肽链一级结构为Lys-G lu-Ile-Trp(KE IW),符合已知的高活性ACE抑制肽的结构规律。经过对两种方法分析过程的比较,认为E S I-M S可以得到多方面的信息,但无法确定肽的序列;MALD I-TO F M S可以得到精确的二级质谱图(m/z精确至0.000 1),从而可以得到确定的肽的序列。
文摘应用芴甲氧羰基(Fm o c)固相化学合成了海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ,并优化了其最佳氧化复性条件。最佳的氧化复性条件为pH7.5的重蒸水溶液体系,样品质量浓度为0.1g/L,还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的浓度分别为1.0mm o l/L和0.1mm o l/L、L-A rg浓度为1.0m o l/L。复性产物经质谱测定其相对分子质量为3 607.68;与天然毒素等量混合后用高效液相色谱分析得到单一峰;膈神经-膈肌标本生理实验结果表明,合成的毒素具有与天然毒素相同的生物学活性,从而可确定二者在结构与功能上具有一致性。