lncRNA GHET1表达水平对人胃癌细胞MGC-803增殖迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)胃癌高表达转录本1(GHET1)对人胃癌细胞MGC-803增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法以MGC-803细胞作为实验对象,通过慢病毒转染的方法构建lncRNA GHET1过表达和lncRNA GHET1沉默的MGC-803细胞模型,分别为过表达组和沉默组,并设置其对应的阴性对照组。通过荧光显微镜观察慢病毒转染效率。通过实时荧光定量PCR检测各组lncRNA GHET1、miR-105表达水平。通过CCK-8实验检测各组细胞增殖能力。通过Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果荧光显微镜下观察见各组细胞病毒转染率均高于90%。实时荧光定量PCR结果显示,过表达组lncRNA GHET1的相对表达量显著高于过表达对照组(P<0.05),沉默组lncRNA GHET1相对表达量显著低于沉默对照组(P<0.05),提示成功建立过表达和沉默lncRNA GHET1的MGC-803细胞模型。CCK-8实验结果显示,过表达组细胞增殖速度较过表达对照组快,而沉默组细胞增殖速度较沉默对照组慢。Transwell实验结果显示,过表达组迁移和侵袭细胞数多于过表达对照组,而沉默组迁移和侵袭细胞数少于沉默对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,过表达组miR-105表达水平显著低于过表达对照组(P<0.05),沉默组miR-105表达水平显著高于沉默对照组(P<0.05)。结论lncRNA GHET1可促进人胃癌细胞MGC-803增殖、迁移及侵袭,其机制可能与调控miR-105的表达水平有关。

TFAP4低表达对胃癌细胞恶性生物学行为的影响及机制

目的探讨TFAP4低表达对胃癌细胞恶性生物学行为的影响及机制。方法用RT-PCR、Westernblot⁃ting法检测细胞中TFAP4表达,选取TFAP4 mRNA和蛋白表达最高的MGC-803细胞作为实验细胞。将MGC-803细胞随机分为空白对照组(Control组)、阴性对照组(NC组)、TFAP沉默组(siTFAP组)、TFAP沉默+空载转染组(siT⁃FAP4+Vector组)、TFAP沉默+HMGB1过表达组(siTFAP4+HMGB1组)并进行转染。用RT-PCR技术检测各组细胞中TFAP4 mRNA表达,确认转染效率。用RT-PCR技术检测细胞中HMGB1 mRNA表达,用Westernblotting法检测细胞中TFAP4、HMGB1蛋白表达及胞质、胞核YAP蛋白表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,用体外血管生成实验检测内皮细胞成管能力,用双荧光素酶报告基因实验验证TFAP4对HMGB1的转录调控作用。结果与NC组比较,siTFAP4组细胞迁移率低,细胞侵袭数目和管腔形成数目少,TFAP4、HMGB1及胞核YAP表达低,胞质YAP表达高(P均<0.05)。与siTFAP4+Vector组比较,siTFAP4+HMGB1组细胞迁移率高,细胞侵袭数目和管腔形成数目多,HMGB1、胞核YAP表达高,胞质YAP表达低(P均<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,与pGL3-Basic+TFAP4+pRL-TKVector转染细胞比较,pGL3-Basic-Promoter+TFAP4+pRL-TKVector转染细胞荧光素酶相对活性高(P<0.05)。结论TFAP4低表达可抑制胃癌细胞侵袭、迁移,促进内皮成管,其机制可能与TFAP转录调控HMGB1激活YAP信号有关。

胃癌高表达转录因子1在肝细胞癌中的表达及其对患者预后的影响

目的探讨长链非编码RNA胃癌高表达转录因子1（GHET1）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其与患者预后、肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的关系。方法收集2016年3月至5月中国人民解放军福州总医院手术的20例HCC患者的肝癌和癌旁组织。回顾性收集2012年6月至2013年12月182例HCC患者肝癌组织和临床资料，根据GHET1表达中位值分为GHET1高表达组和低表达组，各91例。Huh7、HepG2细胞分为：空白对照组（Con）用无血清培养基，siRNA．GHET1组转染siRNA—GHET1．阴性对照组（siRNA．NC）转染阴性对照序列。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测GHET1表达，CCK-8、Transwell实验和Western印迹分析GHET1对HCC细胞的影响。结果与癌旁组织比较，肝癌组织中GHET1的mRNA相对表达明显升高；与L02细胞比较，Huh7以及HepG2细胞GHET1的mRNA表达升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。GHET1高表达组肿瘤〉5cm、有血管侵犯、AFP〉400μg／L、EdmonsonI级、肿瘤无包膜比例较低表达组升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。生存分析显示GHET1高表达的HCC患者比低表达的患者预后差。多因素Cox回归分析显示，GHET1高表达、有血管侵犯（HR=2．067，95％CI：1．350～3．162）、无肿瘤包膜是HCC患者复发的独立预测因素。Huh7和HepG2细胞转染后，与Con和siRNA-NC组比较，siRNA-GHET1组增殖明显下降；与siRNA—NC组比较，siRNA-GHET1组迁移与侵袭能力下降，E-钙黏蛋白表达升高，纤连蛋白和波形蛋白表达降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论GHET1在肝癌组织和细胞中表达升高，增加肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，为HCC患者预后的独立预测因素，是临床治疗的潜在靶点。