胃黏膜TGF-β1在幽门螺杆菌感染中的表达及与外周血T细胞亚群变化的关系

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)感染、TGF-β1及T淋巴细胞亚群在胃黏膜癌变过程中的作用及相互关系.方法:选取不同胃黏膜病变组织的72例胃镜活检标本,采用快速尿素酶试验(rapid urease test,RUT)结合Giemsa染色判断H.pylori感染,免疫组织化学染色技术检测胃黏膜组织中TGF-β1表达,流式细胞术检测不同胃黏膜病变患者外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值.结果:TGF-β1在慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)、肠上皮化生及不典型增生(IM/Dy)和胃癌(GC)中表达的阳性率分别为39.1%,52.6%,62.3%和87.5%,CSG组与IM/Dy、GC组相比,差异有统计学意义(P<0.05);IM/Dy中H.pylori阳性者TGF-β1表达明显高于H.pylori阴性者(87.5%vs33.3%,P<0.05).与CSG相比,GC中CD3+明显降低(P<0.05),CD4+及CD4+/CD8+明显降低(P<0.01);IM/Dy患者CD4+及CD4+/CD8+低于CSG,有显著性差异(均P<0.01).不同胃黏膜病变TGF-β1表达与CD3+、CD4+T细胞、CD4+/CD8+呈负相关.结论:在GC前病变中,从CSG到GC,TGF-β1表达逐渐增加,细胞免疫功能降低,TGF-β1对细胞免疫功能的抑制作用是IM/Dy、GC患者细胞免疫功能低下的原因之一.

SRF在胃癌细胞中的表达及其意义

目的:研究胃癌细胞中血清应答因子(serum response factor,SRF)的表达水平,探讨SRF的表达与胃癌发生、发展关系。方法:利用RNAi技术沉默胃癌SGC-7901细胞SRF基因,荧光显微镜检测转染效率,CCK-8法检测细胞增殖情况,Real-time PCR法检测SRF基因表达水平,Western blot法检测SRF蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞周期。结果:RNAi技术沉默胃癌SGC-7901细胞SRF基因后SRF蛋白下调为空白对照组的40.1%,有显著性差异(P<0.05)。与空白对照组及阴性对照组相比,siRNA转染组细胞增殖明显受抑制,抑制率为64.24%,周期阻滞于G0/G1期(P<0.05)。结论:SRF在胃癌细胞中表达可促进胃癌细胞增殖,以此促进胃癌的发生、发展。SRF很可能是胃癌防治的一个重要靶点。

siRNA-SRF对人肺癌A549增殖和侵袭的影响

目的研究siRNA-SRF对肺癌A549增殖和侵袭能力的影响。方法应用RNAi技术基因沉默SRF,观察其对肺癌A549细胞增殖和侵袭的影响。设计并合成4条siRNA(SRF-900,SRF-901,SRF-1107和SRF-1649)。采用Realtime PCR筛选沉默效率最高的siRNA用于后续研究,采用免疫细胞化学染色和western blot进行验证。采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,transwell小室检测细胞侵袭能力。结果设计合成的4条针对SRF的siRNA(900、901、1107、1649)均能有效下调A549细胞SRF mRNA的表达,分别为空白对照组的56.4%、36.4%、25.0%和53.6%,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫细胞化学染色显示SRF定位于细胞核,应用siRNA后SRF阳性染色显著减少,Western blot结果显示转染siRNA后SRF蛋白下调为空白对照组的40.1%,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组、阴性对照组和转染对照组相比,siRNA-1107转染组细胞增殖明显受抑,抑制率为64.24%,细胞周期S期比例明显下调,侵袭细胞数为空白对照组的41.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用RNA干扰技术基因沉默SRF能够显著抑制A549细胞增殖和侵袭能力。

Y-27632抑制胃癌SGC-7901细胞系侵袭与转移

目的探讨Y-27632对胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响,及其作用机制是否是通过对SRF的调控来实现的。方法将细胞分为3组:1)对照组;2)Y-27632通路阻断剂组;3)siRNA-SRF-1107干扰组。各组分别转染、加药,孵育48 h。用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室和划痕实验检测细胞侵袭能力和迁移能力。Western blot法检测SRF、ROCK1、E-cadherin、β-catenin、F-actin、MRTF-A及Cyclin D1的表达。结果 Y-27632能显著抑制胃癌SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力(P<0.05),而对其增殖没有影响。Y-27632能显著下调SGC-7901细胞的ROCK1、SRF、F-actin和MRTF-A的表达,上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 Y-27632通过上调E-cadherin表达,同时阻断ROCK信号抑制SRF辅因子MRTF-A的表达,最终下调SRF转录水平,从而抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭、转移和迁移能力。

胃癌血清应答因子和血管内皮生长因子受体2的表达及其临床意义

目的：观察胃癌组织中血清应答因子（SRF）和血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学SABC法检测50例胃癌、50例配对的手术切缘黏膜组织和29例胃癌淋巴结转移标本中SRF、VEGFR2的表达。结果胃癌组SRF表达阳性率为52.00%（26／50），高于正常黏膜组的16.00%（8／50），差异具有统计学意义（P＜0.05），与淋巴结转移组（65.52%，19／29）比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。胃癌组VEGFR2表达阳性率为60.00%（30／50），高于正常黏膜组（10.00%，5／50），差异具有统计学意义（P＜0.05），与淋巴结转移组（72.41%，21／29）比较差异无统计学意义（P＞0.05）。胃癌中SRF表达与浸润深度、淋巴结转移相关（P＜0.05）；VEGFR2阳性表达率与胃癌分化程度、侵及浆膜及浆膜外、淋巴结转移相关（P＜0.05），而与患者性别、年龄、肿瘤大小无关（P＞0.05）。胃癌组SRF和VEGFR2共表达23例，具有正相关性（r＝0.594，P＜0.05）。结论胃癌中SRF和VEGFR2的高表达提示患者可能有胃癌侵袭、转移以及预后不良，在胃癌发生、发展中起到重要作用。