类风湿性关节炎滑膜组织中GATA1表达水平及其与MMPs的相关性

目的探究类风湿性关节炎(RA)滑膜组织中GATA1表达水平及其与基质金属蛋白酶(MMPs)的相关性。方法将97例接受关节置换术治疗的RA患者作为观察组,35例因外伤置换关节或截肢的患者作为对照组。比较两组滑膜组织中GATA1、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达水平;分析RA滑膜组织炎性浸润情况与GATA1、MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13水平的相关性;分析RA患者滑膜组织中GATA1与MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13水平的相关性。结果观察组滑膜组织的GATA1、MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13水平高于对照组(P<0.05)。低度滑膜炎患者41例,高度滑膜炎患者56例;高度滑膜炎患者滑膜组织的GATA1、MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13水平高于低度滑膜炎患者(P<0.05)。RA患者滑膜组织中GATA1水平与MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13水平呈显著正相关(P<0.05)。结论RA滑膜组织中GATA1呈高表达状态,与组织炎性浸润程度密切相关,其可能通过上调MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13表达,参与RA病理发生、发展过程。

当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞的转录因子GATA1、BCL11A、KLF1、NFE2影响

目的:通过实验研究当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞转录因子GATA1、BCL11A、KLF1、NFE2的影响。方法:C57BL/6小鼠20只,雌雄各半,28~32 g。给模型组小鼠每日腹腔注射1次环磷酰胺380 mg·kg-1,正常小鼠腹腔注射等量生理盐水,连续3 d。造模后,以脱颈椎法处死各组小鼠,取出股骨,剔除肌肉和结缔组织,剪开股骨两端,用6号针头以生理盐水反复冲洗骨髓腔,并将冲出的骨髓打碎,再用4号针头过滤制成单个细胞悬液,在离心机上2000 r/min,离心10 min,去上清液,加入4 mL冷70%乙醇固定,上振荡器摇匀制成骨髓干细胞样本。细胞实验分为7组,包括正常组、模型组、"EPO"组、"EPO+(G-CSF)"组、当归多糖组、黄芪多糖组、两药配伍组。直接给药当归多糖0.2 mg/mL,黄芪多糖0.2 mg/mL,EPO50 U/mL,(G-CSF) 50 U/mL于骨髓干细胞体外培养体系中,培养3 d,室内18~20℃,20%相对湿度,5%CO2,37℃孵育箱。采用MTT法检测骨髓干细胞生长和增殖的情况;采用ELISA检测骨髓干细胞中GATA1的蛋白含量;采用RT-qPCR法检测骨髓干细胞中BCL11A、KLF1、NFE2的mRNA表达。结果:(1)造模后模型组GATA1蛋白含量明显下降,与正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。各给药组与模型组GATA1均有明显差异,药物组之间差异均有统计学意义,当归多糖与黄芪多糖有交互作用,合用比单一用药好。(2)造模后模型组小鼠骨髓干细胞BCL11A、KLF1、NFE2mRNA明显下降,与正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。①各给药组与模型组BCL11A均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有提升BCL11A作用,两药交互作用明显,合用比单一用药好;②各给药组与模型组KLF1均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有提升KLF1作用,两药交互作用明显,合用不如单用黄芪多糖;③各给药组与模型组NFE2均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有提升NFE2作用,两药交互作用明显,合用比单一用药好。结论:当归多糖、黄芪多糖及两药配伍能够显著提升GATA1蛋白含量,上调骨髓抑制小鼠骨髓干细胞的BCL11A mRNA、KLF1 mRNA、NF-E2 mRNA的表达水平,对珠蛋白基因的调控网络起到促进作用,从而为促进骨髓干细胞红系分化发育创造条件。两药配伍的作用优于单一用药。

敲低GATA1慢病毒表达载体的构建及敲低效果检测

目的:为了探讨与人血细胞相关的GATA1转录因子在实体肿瘤发生发展中的功能,构建GATA1的慢病毒干扰载体,并验证其敲低效果。方法:根据人GATA1的cDNA序列,设计含有小发卡结构的寡核苷酸序列,将其克隆到慢病毒表达载体上;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过实时定量RT-PCR及Western印迹检测GATA1的表达水平。结果和结论:构建了具有明显干扰效果的GATA1基因的小干扰RNA(siRNA)慢病毒表达载体,能够有效抑制GATA1 mRNA和蛋白水平,为后续的GATA1生物学作用研究奠定了基础。

GATA1不同激酶活性突变体质粒的构建及蛋白表达和亚细胞定位

目的采用大引物法构建GATA1不同激酶活性突变体GATA1 S161A S187A(死型)和GATA1 S161D S187D(激活型)真核表达载体,并证实其融合蛋白在细胞内的表达及定位,旨在进一步探讨其生物学功能和潜在肿瘤治疗靶点。方法以GFP-GATA1 WT为模板,采用大引物法扩增S161A S187A、S161D S187D突变体片段,双酶切克隆至p EGFP-C1表达载体中,将重组质粒转染至HEK293中,经免疫印迹鉴定融合蛋白的表达。结果用大引物PCR法成功构建GATA1不同激酶活性突变体的真核表达载体p EGFP-GATA1 S161A S187A和p EGFP-GATA1 S161D S187D,验证了其融合蛋白表达。共聚焦激光显微镜技术显示,融合蛋白主要定位于细胞核内。结论利用大引物法成功构建GATA1不同激酶活性突变体真核表达载体,并为进一步进行该突变体的结构和功能研究奠定了基础。

猪APOA2启动子与转录因子GATA1作用的研究

对猪APOA2潜在启动子区进行克隆及活性分析,确定核心启动子区域,并进一步分析转录因子GATA1对APOA2基因转录活性的影响。结果表明,APOA2基因主要在猪的肝脏及脂肪组织中表达。双荧光素酶活性显示,猪APOA2基因5′端侧翼-813^-565 bp区域为核心启动子区,且-659^-565 bp区域内更可能存在一些促进APOA2转录的顺式作用元件。过表达GATA1基因结果显示,转录因子GATA1显著促进APOA2基因的转录;定点突变试验确认,转录因子GATA1可直接与APOA2基因启动子区的GATA1结合位点(-608^-599 bp)相结合。转录因子GATA1可直接靶向APOA2基因启动子区并促进APOA2的转录。

利用DNA免疫技术制备GATA1蛋白多克隆抗体

转录因子GATA1对正常红系细胞的分化起着关键作用,其缺失导致原成红细胞的凋亡,其过表达则能抑制红系细胞晚期的分化。本研究为了进一步利用斑马鱼研究gata1基因在血液血管发育过程中的功能,通过反转录PCR(RT-PCR)扩增了斑马鱼gata1基因编码区序列,构建了真核表达质粒pCAGGS-P7/gata1,采用质粒DNA免疫技术的方法免疫了BALB/c小鼠,制备了斑马鱼GATA1蛋白多克隆抗体。实验结果表明:构建的真核表达重组质粒pCAGGS-P7/gata1 DNA具有良好的免疫原性,在免疫小鼠后所获得的抗血清抗体效价达1∶500。Western blot和免疫荧光检测表明,抗血清能特异型地识别GATA1蛋白。斑马鱼GATA1抗体成功制备为进一步的功能研究奠定了重要基础。

GATA1在造血系统中的作用

GATA1也称为红系转录因子1(erythroid transcription factor 1,Eryf-1)、NF-E1(nuclear factor erythroid 1)或GF-1(globin transcription factor),是GATA转录因子家族中的一员,通过两个特征性锌指结构结合于WGATAR共有序列,在多谱系造血细胞中表达,如红系细胞、巨核细胞、嗜酸性粒细胞和肥大细包[1].GATA1的结合位点广泛分布于珠蛋白基因和其他红系特异基因的启动子和增强子上,可转录激活所有已知的红系特异基因,因此,被认为是红细胞生成的关键调控因子[2].GATA1不仅调控正常血液系统的细胞分化和增殖,而且在一些血液系统疾病的发生中也发挥重要作用.现就GATA1的生理作用及其基因异常的致病性作一综述.

GATA1通过上调NANOG促进胰腺癌肿瘤干细胞形成

目的:探究GATA1在胰腺癌肿瘤干细胞形成中的功能和作用机制。方法:通过流式细胞术检测GATA1对胰腺癌肿瘤干细胞形成的影响;通过实时荧光定量PCR和Western印迹筛选和验证GATA1下游的干性基因;通过双萤光素酶报告基因实验和染色质免疫共沉淀明确GATA1的调控机制。结果:GATA1过表达细胞株中肿瘤干细胞含量增加;GATA1上调NANOG的mRNA和蛋白表达水平;GATA1可以增强NANOG启动子的活性;GATA1结合在NANOG启动子-527^-524bp处的GATA序列。结论:GATA1可以通过结合在NANOG启动子上激活其转录,促进胰腺癌肿瘤干细胞的形成。

伴GATA1变异的非唐氏综合征急性巨核细胞白血病2例并文献复习

目的探讨GATA1基因变异致急性巨核细胞白血病(AMKL)的临床特征。方法分析2例GATA1基因变异致AMKL的非唐氏综合征患儿的临床资料,并复习相关文献。结果例1为2岁女性AMKL患儿,无特殊面容及发育迟缓;病初骨髓染色体核型示50,XX,+8,+10,+21,+21[7]/46,XX[13];基因检测示GATA1基因变异c.52dupT;经诱导化疗骨髓缓解后复查外周血染色体示46,XX;目前无病生存。例2为1岁男性AMKL患儿,无特殊面容;病初骨髓染色体核型示47,XY,+21[10]/46,XY[10];基因检测示GATA 1变异;经化疗骨髓缓解后复查染色体示46,XY;目前持续缓解中。结论提示在非唐氏综合征儿童罹患AMKL时需重视GATA1基因变异的检测。

Mosaic Trisomy 21 and Trisomy 14 as Acquired Cytogenetic Abnormalities without GATA1 Mutation in A Pediatric Non-Down Syndrome Acute Megakaryoblastic Leukemia

One case of acute megakaryoblastic leukemia （AMKL） with trisomy 21,trisomy 14 and unmutated GATA1 gene in a phenotypically normal girl was reported.The patient experienced transient myelodysplasia before the onset of AMKL.The bone marrow blasts manifested typical morphology of megakaryoblast both by the May-Giemsa staining and under the electronic microscopy.Leukemic cells were positive for CD13,CD33,CD117,CD56,CD38,CD41 and CD61 in flow cytometry analysis.Cytogenetic study showed karyotype of 48,XX,＋14,＋21 in 40% metaphases.Known mutations of GATA1 gene in Down syndrome or acquired trisomy 21 were not detected in this case.

GATA1s敲除hPSCs模型构建与造血分化影响初探

本文建立了GATA1s敲除人多能干细胞(human pluripotent stem cells,hPSCs)细胞株,并以此为模型探讨了GATA1s缺失对体外诱导造血分化的影响。本文通过构建含有重组臂-敲入片段(GATA1外显子Ⅱ-Ⅵ序列及BGH polyA序列)-LoxP-潮霉素筛选标记-LoxP-重组臂的打靶质粒和含有gRNA-Cas9的gRNA质粒对hPSCs进行基因编辑以敲除GATA1s。通过第一步电穿孔将以上质粒导入细胞,潮霉素初步筛选7 d后的阳性克隆进行下一步电穿孔环化重组酶(Cre)使LoxP位点特异性重组以去除筛选标记,通过单细胞克隆的方式进一步培养,PCR及测序鉴定出正确基因编辑细胞,最后通过蛋白质免疫印迹验证其GATA1与GATA1s蛋白的表达情况,验证敲除GATA1s后的细胞株进行体外诱导造血分化,发现其CD34^(+)、CD43^(+)及CD45^(+)细胞增多,但GPA^(+)、CD41a^(+)及CD42b^(+)细胞显著减少,通过转座子系统过表达GATA1也不能挽救其减少的GPA^(+)、CD41a^(+)及CD42b^(+)细胞。本研究建立了GATA1s敲除hPSCs细胞株,并发现其在造血分化时有重要作用。

一例伴GATA1基因新突变的唐氏综合征患儿的临床及实验室分析

目的分析1例唐氏综合征(Down syndrome,DS)相关髓系增殖患儿的临床及实验学特征。方法对患儿的临床特点及外周血细胞形态学、荧光原位杂交及免疫学分型等实验室检查结果进行分析,对114种血液肿瘤相关基因进行高通量测序分析。结果患儿肝功能及凝血功能明显异常,贫血,白细胞计数偏高,外周血原始细胞的比例明显增高,形态学染色及免疫学分型支持巨核细胞系增殖的特点,荧光原位杂交显示为21三体。114种白血病相关基因的外显子测序显示,仅GATA1基因的第2外显子存在突变(c.220+2dupT),突变率为95.8%,且为新的突变类型,未见其余所测基因的突变。结论患儿患有DS,并伴有GATA1基因的突变。其外周血出现原始细胞增多,应考虑为一过性骨髓异常增生,有别于先天性白血病。

GATA1相关血小板减少症1例临床特征和基因突变分析

目的探讨1例GATA1突变引起的血小板减少症的临床特征和基因突变,为遗传性血小板减少症的早期诊断和治疗提供依据。方法对2017年5月就诊于湖南省儿童医院的1例临床表现为急性肝衰竭、血小板减少患儿的临床表现、实验室检查、影像学、细胞学检查、肝组织活检及治疗过程进行分析,采用高通量测序技术进行致病基因检测查找病因。结果患儿,男,10个月,因"发热3d,皮肤黄染2d"入院,体格检查发现肝大,实验室检查提示血小板减少(33×10^9/L)、肝衰竭,骨髓片不支持血液系统相关肿瘤疾病,肝组织活检提示肝细胞重度损害、肝纤维化改变(G3S2)。对症治疗后患儿肝功能、凝血功能恢复,但仍有血小板减少(30×10^9/L^58×10^9/L)。高通量测序发现患儿在X连锁GATA1第6号外显子存在c.1121G>A(p.Gly374Glu)半合子突变,该突变在人类基因突变数据库(HGMD)等未见报道。Sanger测序家系验证显示患儿突变遗传自其母亲,哥哥存在相同突变。患儿母亲及哥哥CD41-42基因杂合突变导致其轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血。结论GATA1 c.1121G>A错义突变是该家系血小板减少的致病原因,CD41-42基因杂合突变是轻型地中海贫血的致病原因。GATA1 c.1121G>A突变为未见报道的新突变,丰富了X连锁血小板减少症GATA1基因突变谱。

LncRNA GATA3-AS1通过调控miR-362-3p/FABP5轴抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探究长链非编码RNA GATA3反义RNA 1(lncRNA GATA3-AS1)调控微小RNA-362-3p(miR-362-3p)表达对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测宫颈癌细胞中lncRNA GATA3-AS1、miR-362-3p、FABP5表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA GATA3-AS1和miR-362-3p的靶向关系、miR-362-3p和FABP5的靶向关系;将细胞分为pcDNA-NC组、pcDNA-GATA3-AS1组、si-NC组、si-GATA3-AS1组、si-GATA3-AS1+inhibitor-NC组、si-GATA3-AS1+miR-362-3p inhibitor组、miR-NC组、miR-362-3p mimics组、miR-362-3p mimics+pcDNA-NC组、miR-362-3p mimics+pcDNA FABP5组;Western blot检测蛋白表达;EdU法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移侵袭。结果:在宫颈癌细胞系中,GATA3-AS1、FABP5均为高表达,miR-362-3p均为低表达,选择HeLa细胞进行后续实验;双荧光素酶报告基因实验表明,lncRNA GATA3-AS1和miR-802、miR-362-3p和FABP5具有靶向关系;与pcDNA-NC组比较,pcDNA-GATA3-AS1组Hela细胞EdU阳性率、迁移侵袭及MMP-2、MMP-9表达明显上升(P<0.05);与si-NC组比较,si-GATA3-AS1组HeLa细胞EdU阳性率、迁移侵袭及MMP-2、MMP-9表达明显下降(P<0.05);抑制miR-362-3p表达或过表达FABP5均可以明显逆转沉默GATA3-AS1或过表达miR-362-3p对于HeLa细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:沉默GATA3-AS1可以靶向上调miR-362-3p表达,抑制FABP5表达,抑制宫颈癌HeLa细胞增殖迁移及侵袭。

利用成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白9基因编辑技术快速构建GATA1-mCherry实时追踪人多能干细胞株的研究

目的探讨利用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白(Cas)9基因编辑技术快速构建GATA1-mCherry实时追踪人多能干细胞(hPSC)株的方法。方法①选择GATA1基因为目的基因,利用CRISPR/Cas9技术构建共表达载体[Cas9和向导RNA(gRNA)]和打靶载体(重组臂),并且以电穿孔的方式将共表达载体、打靶载体及环化重组酶(Cre)导入hPSC的H1细胞系。经电穿孔后的H1细胞培养2 d后,选择24个H1细胞单克隆进行PCR扩增,以验证共表达载体和打靶载体是否被成功导入,以及Cre是否成功去除H1细胞单克隆中的筛选标志物。②挑取经PCR验证的条带大小正确的阳性H1细胞单克隆,进行细胞培养后,提取H1细胞单克隆基因组,并且分别采用引物对1/2(GATA15′端臂外引物/mCherry 3′端引物)和3/5(HygroR 5′端引物/GATA13′端臂外引物)对基因组进行PCR扩增,以验证该H1细胞单克隆是否具有GATA1和mCherry正确序列。③使用构建完成的H1∶GATA1-mCherry细胞进行造血功能验证实验,以确认基因编辑是否改变H1细胞特性,以及造血分化能力。选择未经基因编辑H1细胞和H1∶GATA1-mCherry细胞,置于相同的造血分化培养条件培养14 d后,分别于610 nm激发波长免疫荧光显微镜下观察,并采用流式细胞术(FCM)对细胞表面标志物CD34、CD43、CD45进行检测。选取培养至GATA1大量表达时期的H1∶GATA1-mCherry细胞,进行细胞甩片和免疫荧光染色实验。对经过基因编辑的H1∶GATA1-mCherry细胞,进行GATA1特异抗体染色体,观察其能否准确追踪并指示GATA1。结果①经电穿孔转入打靶载体和共表达载体后,H1细胞单克隆PCR扩增产物的电泳结果显示,H1细胞经电穿孔后,可获得2710和945 bp的PCR扩增产物电泳条带;电泳条带为2710 bp,说明该克隆基因组成功敲入GATA1和mCherry序列,但是Cre没有去除筛选标志物;条带大小为945 bp,说明该克隆基因组成功敲入GATA1和mCherry序列,并且Cre已去除筛选标志物,为目的H1细胞。选取24个H1细胞单克隆进行PCR验证结果显示,打靶载体和共表达载体成功敲入的H1细胞克隆、打靶载体和共表达载体成功敲入且Cre去除筛选标志的H1细胞克隆(目的细胞)及染色体纯合敲入的H1细胞比例分别为80%(20/24)、50%(10/20)和90%(18/20)。②H1∶GATA1-mCherry细胞进行造血诱导培养14 d时,荧光显微镜下GATA1表达时期可见大量红色荧光,FCM检测结果显示,未经基因编辑H1细胞与H1∶GATA1-mCherry细胞相比,造血干/祖细胞群比例相似,二者CD34^(+)CD45^(+)细胞比例分别为12.4%和14.1%,CD34^(+)CD45^(+)细胞比例分别为17.0%和20.2%,表明H1∶GATA1-mCherry细胞的造血分化能力没有改变。③GATA1高表达时期H1∶GATA1-mCherry细胞的免疫荧光染色实验结果显示,荧光显微镜下可见仅GATA1抗体染色阳性细胞有mCherry标志物,表明H1∶GATA1-mCherry细胞通过mCherry荧光蛋白对GATA1基因的标记是准确且特异的。结论本研究以GATA1为目的基因,在hPSC中快速、高效进行基因敲入,成功建立快速、实时示踪目的基因表达的方法。

U937细胞中GATA1调控c-myb基因表达

c-myb是血细胞生成过程中的一个重要转录因子,与造血干细胞的增殖、分化、凋亡有关。在白血病、结肠癌、乳腺癌和黑色素瘤等恶性肿瘤中,c-myb异常表达,但是在白血病细胞中c-myb调控的机制尚不清楚。本研究探究了U937细胞中GATA1与c-myb的调控关系,可能对白血病研究和治疗提供帮助。用12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)诱导U937细胞分化,并检测分化前后GATA1与c-myb蛋白的变化。Western blot结果显示U937细胞经TPA诱导分化后c-myb与GATA1蛋白均明显下降。利用慢病毒包装GATA1 shRNA质粒和GATA1过表达质粒并感染到U937细胞中实现转录因子GATA1的敲降及过表达后,检测c-myb的mRNA和蛋白的表达水平。结果显示:敲降GATA1后,c-myb的mRNA和蛋白质水平明显下降;过表达GATA1后,c-myb的mRNA和蛋白质水平明显上调。本研究揭示了U937细胞中GATA1对c-myb的正向调控关系,为白血病研究和治疗方案提供了新的思路。

人GATA1真核表达载体的构建及对乳腺癌细胞生长的影响

目的构建人GATA1基因的真核表达载体,研究其对乳腺癌细胞生长的影响。方法以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增出GATA1编码序列,将其插入到pc DNA3.0-FLAG载体中;将重组质粒与空载体分别转染293T细胞,Western印迹检测GATA1表达情况,并通过生长曲线研究GATA1对乳腺癌细胞生长的影响,细胞划痕实验检测GATA1对细胞迁移的影响。结果双酶切实验以及测序结果表明,pc DNA3.0-FLAG-GATA1的真核表达载体构建成功;Western印迹发现,GATA1在293T细胞中成功表达;生长曲线实验得出,GATA1可促进乳腺癌细胞的生长,细胞划痕实验表明GATA1促进细胞迁移。结论成功构建了pc DNA3.0-FLAG-GATA1的真核表达载体,并发现GATA1可促进乳腺癌细胞的生长和迁移。

含GATA锌指结构域1对结肠癌细胞迁移的影响

目的探讨含GATA锌指结构域1(GATAD1)对结肠癌细胞迁移的影响及其机制。方法采用限制性内切酶连接法构建GATAD1干扰质粒SiRNA-GATAD1(Si-GATAD1)。取培养的人正常结肠上皮细胞NCM460及结肠癌细胞Caco-2、HCT-116、HCT-8、HT-29、RKO,应用Western blot法检测细胞中GATAD1蛋白相对表达量,选择其中GATAD1表达水平相对较高的结肠癌细胞HCT-116、RKO用于转染GATAD1干扰质粒Si-GATAD1,另选择其中GATAD1表达水平最低的结肠癌细胞Caco-2用于转染过表达pMZ-GATAD1质粒。取HCT-116、RKO细胞随机分为阴性对照(NC)组和转染Si-GATAD1质粒组(Si-GATAD1组),取Caco-2细胞随机分为NC组、转染过表达pMZ-GATAD1质粒组(pMZ-GATAD1组),Si-GATAD1组HCT-116和RKO细胞分别转染Si-GATAD1质粒,pMZ-GATAD1组Caco-2细转染过表达pMZ-GATAD1质粒,同时将空载体pMZ-MO3质粒转染至NC组HCT-116、RKO和Caco-2细胞。采用细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率;采用Western blot法检测各组细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白PI3K、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、细胞周期蛋白-D1(cyclin D1)的相对表达量。结果结肠癌细胞HCT-8、HCT-116、RKO、HT-29、Caco-2中GATAD1蛋白相对表达量均显著高于人正常结肠上皮细胞NCM460(P<0.05);结肠癌HCT-116、RKO细胞中GATAD1蛋白相对表达量显著高于HCT-8、HCT-29和Caco-2细胞(P<0.05),结肠癌Caco-2细胞中GATAD1蛋白相对表达量显著低于结肠癌HCT-8、HCT-29细胞(P<0.05)。Si-GATAD1组HCT-116、RKO细胞中GATAD1蛋白相对表达量均显著低于NC组(P<0.05),pMZ-GATAD1组Caco-2细胞中GATAD1蛋白相对表达量显著高于NC组(P<0.05)。培养12、24 h,Si-GATAD1组HCT-116、RKO细胞的划痕愈合率均显著低于NC组(P<0.01);pMZ-GATAD1组Caco-2细胞的划痕愈合率均显著高于NC组(P<0.01)。Si-GATAD1组RKO、HCT-116细胞中PI3K、p-Akt、cyclin D1蛋白相对表达量均显著低于其NC组(P<0.05);pMZ-GATAD1组Caco-2细胞中PI3K、p-Akt、cyclin D1蛋白相对表达量均显著高于NC组(P<0.05);Si-GATAD1组RKO、HCT-116细胞及pMZ-GATAD1组Caco-2细胞中Akt蛋白相对表达量与NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论GATAD1高表达于结肠癌细胞中,且通过调控PI3K/Akt信号通路促进结肠癌细胞的迁移。

Long non-coding RNA GATA6-AS1 is mediated by N6-methyladenosine methylation and inhibits the proliferation and metastasis of gastric cancer

BACKGROUND Through experimental research on the biological function of GATA6-AS1,it was confirmed that GATA6-AS1 can inhibit the proliferation,invasion,and migration of gastric cancer cells,suggesting that GATA6-AS1 plays a role as an anti-oncogene in the occurrence and development of gastric cancer.Further experi-ments confirmed that the overexpression of fat mass and obesity-associated protein(FTO)inhibited the expression of GATA6-AS1,thereby promoting the occurrence and development of gastric cancer.AIM To investigate the effects of GATA6-AS1 on the proliferation,invasion and migration of gastric cancer cells and its mechanism of action.METHODS We used bioinformatics methods to analyze the Cancer Genome Atlas(https://portal.gdc.cancer.gov/.The Cancer Genome Atlas)and download expression data for GATA6-AS1 in gastric cancer tissue and normal tissue.We also constructed a GATA6-AS1 lentivirus overexpression vector which was transfected into gastric cancer cells to investigate its effects on proliferation,migration and invasion,and thereby clarify the expression of GATA6-AS1 in gastric cancer and its biological role in the genesis and development of gastric cancer.Next,we used a database(http://starbase.sysu.edu.cn/starbase2/)to analysis GATA6-AS1 whether by m6A methylation modify regulation and predict the methyltransferases that may methylate GATA6-AS1.Furthermore,RNA immunoprecipitation experiments confirmed that GATA6-AS1 was able to bind to the m6A methylation modification enzyme.These data allowed us to clarify the ability of m6A methylase to influence the action of GATA6-AS1 and its role in the occurrence and development of gastric cancer.RESULTS Low expression levels of GATA6-AS1 were detected in gastric cancer.We also determined the effects of GATA6-AS1 overexpression on the biological function of gastric cancer cells.GATA6-AS1 had strong binding ability with the m6A demethylase FTO,which was expressed at high levels in gastric cancer and negatively correlated with the expression of GATA6-AS1.Following transfection with siRNA to knock down the expression of FTO,the expression levels of GATA6-AS1 were up-regulated.Finally,the proliferation,migration and invasion of gastric cancer cells were all inhibited following the knockdown of FTO expression.CONCLUSION During the occurrence and development of gastric cancer,the overexpression of FTO may inhibit the expression of GATA6-AS1,thus promoting the proliferation and metastasis of gastric cancer.

类风湿关节炎患者血清lncRNA GATA6-AS1和GATA6 mRNA水平与疾病活动度指标、免疫功能及疾病严重程度的关系

目的分析类风湿关节炎患者血清中长链非编码RNA GATA结合蛋白6反义RNA1(lncRNA GATA6-AS1)和GATA结合蛋白6(GATA6)信使RNA(mRNA)水平与疾病活动度指标、免疫功能及疾病严重程度的关系。方法选取2021年4月至2023年3月我院收治的74例类风湿关节炎缓解期患者作为缓解期组,81例类风湿关节炎活动期患者作为活动期组,另选取同期体检健康者80例为对照组。收集受试者一般资料和疾病活动度指标[类风湿因子(RF)、血细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、肿瘤坏死因子(TNF)-α、28处关节疾病活动度(DAS28)评分];荧光定量PCR法检测血清中lncRNA GATA6-AS1和GATA6 mRNA水平;并检测受试者免疫功能指标[免疫球蛋白(Ig)A、IgM、IgG、CD3^(+)T、CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞,计算CD4^(+)/CD8^(+)比值]。分析类风湿关节炎患者血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA、疾病活动度指标、免疫功能指标的相关性,影响类风湿关节炎患者活动期发生的危险因素,血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA对类风湿关节炎患者活动期发生的预测价值。结果对照组、缓解期组、活动期组RF、ESR、CRP、抗CCP抗体、TNF-α、DAS28评分、血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA、IgA、IgM、IgG、外周血CD3^(+)T、CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值水平依次升高(P<0.05);风湿关节炎患者血清lncRNA GATA6-AS1与GATA6 mRNA呈正相关(P<0.05);血清lncRNA GATA6-AS1和GATA6 mRNA水平均与RF、ESR、CRP、抗CCP抗体、TNF-α、DAS28评分、IgA、IgM、IgG、CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞和CD4^(+)/CD8^(+)比值呈正相关(P<0.05);RF、ESR、CRP、抗CCP抗体、TNF-α、DAS28评分、lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA均是影响类风湿关节炎患者活动期发生的独立危险因素(P<0.05);血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA、二者联合预测类风湿关节炎患者活动期发生的曲线下面积(AUC)分别为0.843、0.861、0.928;二者联合预测的AUC高于血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA水平各自单独预测的AUC(P<0.05)。结论类风湿关节炎患者血清中lncRNA GATA6-AS1和GATA6 mRNA呈现高水平,且活动期患者二者水平更高,二者与疾病活动度指标、免疫功能以及疾病严重程度密切相关,可以很好地预测类风湿关节炎患者活动期的发生。