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芝麻热胁迫响应基因SiHsfB-2b的克隆及表达特性分析
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作者 田媛 苏小雨 +7 位作者 王东勇 李丰 张鹏钰 付锦州 戎亚思 王龙 高桐梅 吴寅 《山东农业科学》 北大核心 2024年第7期8-15,共8页
为探究B类热激转录因子(HSFs)在芝麻耐热性中的分子功能,基于前期转录组分析鉴定到的编码B类HSF家族蛋白HsfB2b的基因序列,以郑太芝3号耐热白芝麻品种为材料,采用同源克隆方法克隆了芝麻SiHsfB-2b基因,对其进行生物信息学分析,同时分析... 为探究B类热激转录因子(HSFs)在芝麻耐热性中的分子功能,基于前期转录组分析鉴定到的编码B类HSF家族蛋白HsfB2b的基因序列,以郑太芝3号耐热白芝麻品种为材料,采用同源克隆方法克隆了芝麻SiHsfB-2b基因,对其进行生物信息学分析,同时分析其在芝麻不同器官和热胁迫下的表达特性,并对其进行亚细胞定位。结果表明:SiHsfB-2b基因CDS序列全长为936 bp,编码311个氨基酸;系统进化树分析表明SiHsfB-2b与松蒿、独脚金和锈鳞木樨榄的同源蛋白关系较近,含保守DNA结合结构域;亚细胞定位于细胞核内;SiHsfB-2b基因启动子区域含有13类顺式作用元件,其中与胁迫响应和激素响应相关的各有3类。RT-qPCR分析结果显示,热胁迫可诱导SiHsfB-2b在芝麻根、茎和叶中上调表达,叶中相对表达量最高;在持续高温胁迫下,SiHsfB-2b在芝麻茎和叶中的表达量呈上升趋势,且在胁迫后期的叶中表现出显著上调,而根中的表达量呈现出先上升后下降趋势。综上推测,SiHsfB-2b基因可能通过介导胁迫和激素信号等通路积极响应热胁迫,这可为后期深入研究芝麻耐热性的分子机制奠定理论基础。 展开更多
关键词 芝麻 耐热性 SiHsfB-2b基因 基因克隆 定量表达分析 亚细胞定位
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我国不同CMV分离物2b基因片段的RT-PCR扩增及其序列比较 被引量:11
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作者 庄木 王晓武 +3 位作者 谢丙炎 郑文光 冯兰香 方智远 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期146-150,共5页
本研究根据黄瓜花叶病毒2b基因的保守序列设计引物,利用一步RT-PCR技术对多个不同寄主和不同地理来源的黄瓜花叶病毒分离物的2b基因片段进行扩增,获得了含该基因全长约90%的cDNA片段(300bp)。序列测定与比较分析结果表明,国内不同CMV... 本研究根据黄瓜花叶病毒2b基因的保守序列设计引物,利用一步RT-PCR技术对多个不同寄主和不同地理来源的黄瓜花叶病毒分离物的2b基因片段进行扩增,获得了含该基因全长约90%的cDNA片段(300bp)。序列测定与比较分析结果表明,国内不同CMV分离物2b基因片段核酸序列同源性达93%以上,推测的氨基酸序列同源性超过90%,且均属于亚组Ⅰ。 展开更多
关键词 CMV分离物 2b基因 基因片段 RT-PCR扩增 黄瓜 花叶病毒 氨基酸 序列同源性
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侵染广东辣椒的黄瓜花叶病毒的CP及2b基因序列分析 被引量:3
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作者 许东林 周国辉 宋晓兵 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期51-54,共4页
对侵染广东省阳西县田间辣椒的黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic wirus,CMV)的CP及2b基因进行序列分析,结果表明其CP基因与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ各株系之间的核苷酸同源率分别为90.9%~93.8%和76.1%~76.9%。氨基酸同源率分别为92.... 对侵染广东省阳西县田间辣椒的黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic wirus,CMV)的CP及2b基因进行序列分析,结果表明其CP基因与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ各株系之间的核苷酸同源率分别为90.9%~93.8%和76.1%~76.9%。氨基酸同源率分别为92.7%~97.7%和72.4%~78.1%;其2b基因与CMV亚组Ⅰ、亚组Ⅱ之间的核苷酸同源率分别为83.9%~90.2%和64.0%~67.7%,氨基酸同源率分别为79.3%~85.7%和50.5%~53.5%,由此确认该CMV分离物属于亚组Ⅰ成员.此外,CMV亚组Ⅰ成员的CP及2b基因中分别具有一段长为102bp及54bp的高度保守序列,这为转基因诱导寄主转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS)CMV育种研究提供了参考. 展开更多
关键词 辣椒 黄瓜花叶病毒 CP基因 2b基因 序列分析
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短发夹结构RNA对口蹄疫病毒2B基因瞬时表达的抑制 被引量:8
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作者 崔丽瑾 王兴龙 +6 位作者 任林柱 伍晓慧 郎需龙 张辉 梅英武 李晓燕 卜朝阳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期532-535,共4页
为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对口蹄疫病毒(FMDV)2B基因的抑制作用,针对WFL株FMDV的2B基因,设计了4个siRNA,并将shRNA表达模板插入pSilencer1.0-U6载体,构建shRNA表达质粒,将其与含绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP+2B融合表达质粒瞬时共转... 为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对口蹄疫病毒(FMDV)2B基因的抑制作用,针对WFL株FMDV的2B基因,设计了4个siRNA,并将shRNA表达模板插入pSilencer1.0-U6载体,构建shRNA表达质粒,将其与含绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP+2B融合表达质粒瞬时共转染BHK-21细胞,以荧光显微镜和流式细胞仪检测荧光表达量的变化,以实时定量RT-PCR法检测对2B基因mRNA的抑制作用。结果表明,本试验所构建的针对2B基因的shRNA表达载体可以在BHK-21细胞中抑制2B基因的瞬时表达。 展开更多
关键词 FMDV RNA干扰 2b基因
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p16基因与干扰素α-2b对黑色素瘤细胞A375生长的影响 被引量:6
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作者 金宛宛 马新华 +2 位作者 赵明 陈仕胜 高宇 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第19期3122-3124,共3页
目的:探讨p16基因与干扰素(IFN)-α-2b对黑色素瘤A375细胞生长的影响。方法 :将pDC312CMV-p16质粒转染进黑色素瘤A375细胞;检测细胞内源性和外源性p16基因mRNA表达差异;予转染组与非转染组A375细胞不同浓度IFN-α-2b,光镜下观察细胞形... 目的:探讨p16基因与干扰素(IFN)-α-2b对黑色素瘤A375细胞生长的影响。方法 :将pDC312CMV-p16质粒转染进黑色素瘤A375细胞;检测细胞内源性和外源性p16基因mRNA表达差异;予转染组与非转染组A375细胞不同浓度IFN-α-2b,光镜下观察细胞形态变化;MTT检测IFN-α-2b对细胞生长的抑制作用。结果:未转染组无p16基因表达,转染组表达p16基因;转染组较非转染组细胞抑制率高,且差异有显著性(P<0.05)。光镜下,转染组及IFN-α-2b处理后A375细胞均呈凋亡状态。IFN-α-2b可抑制A375细胞增殖,抑制作用随浓度增加而增强(P<0.05);转染与给药存在交互效应(P<0.05)。结论:p16基因和IFN-α-2b均能抑制黑色素瘤A375细胞增殖,且存在交互作用。 展开更多
关键词 黑色素瘤 P16 干扰素Α-2b 转染
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黄瓜花叶病毒反义2b基因构建及其转基因初步研究 被引量:3
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作者 庄木 王晓武 +4 位作者 谢丙炎 杨宝军 方智远 黄和艳 郭淑华 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期811-813,共3页
研究构建了CMV反义2b基因的植物表达载体pZM6.2,通过农杆菌侵染的叶盘转化法导入烟草,分子检测证实获得了转反义2b基因的SR1烟草转基因植株,初步的CMV攻毒试验表明反义2b基因可介导对CMV的抗性。在此基础上,将pZM6.2转化番茄品种‘红玛... 研究构建了CMV反义2b基因的植物表达载体pZM6.2,通过农杆菌侵染的叶盘转化法导入烟草,分子检测证实获得了转反义2b基因的SR1烟草转基因植株,初步的CMV攻毒试验表明反义2b基因可介导对CMV的抗性。在此基础上,将pZM6.2转化番茄品种‘红玛瑙213’,获得了卡那霉素抗性苗,PCR检测表明得到了PCR阳性转化株。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 反义2b基因 转基因番茄
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人乳头瘤病毒E7与人干扰素α-2b融合基因在中国仓鼠卵巢细胞中的表达 被引量:1
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作者 相文忠 王飞 +4 位作者 王群 刘丰 张兆松 苏川 毕志刚 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期430-432,共3页
目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)11-E7及人干扰素(IFN)α-2b的真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达。方法:同时用KpnⅠ、EcoRⅠ酶切pET-32a-IFNα-2b-linker-HPV11-E7及pcDNA3.1,将酶切产物纯化回收,两者的回收产物进行连接反应... 目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)11-E7及人干扰素(IFN)α-2b的真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达。方法:同时用KpnⅠ、EcoRⅠ酶切pET-32a-IFNα-2b-linker-HPV11-E7及pcDNA3.1,将酶切产物纯化回收,两者的回收产物进行连接反应。连接产物转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定;用脂质体法转染CHO细胞,用免疫荧光法检测融合基因的表达。结果:DNA测序结果显示,成功地将IFN-α-2b-linker-HPV11-E7装入pcDNA3.1的KpnⅠ、EcoRⅠ酶切位点之间,且其序列与设计完全一致;激光扫描共聚焦显微镜观察可见目的蛋白的表达。结论:成功地构建了HPV11-E7及IFNα-2b的真核表达载体,并在CHO细胞中表达,为提高DNA疫苗免疫效果的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 E7基因 干扰素Α-2b 融合基因
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Construction of Recombinant Adenovirus Vector Containing CEVB2L Gene 被引量:2
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作者 邵洪泽 毛文智 +4 位作者 宋阳 李琳 程荣华 孙健 孙强 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第3期94-97,共4页
[Objective] Sheep contagious ecthyma virus B2L gene recombinant adenovirus was built by adenovirus vector system.[Method] Genome DNA extracted from sheep contagious ecthyma virus strain JLSY04 as a template,Gene fragm... [Objective] Sheep contagious ecthyma virus B2L gene recombinant adenovirus was built by adenovirus vector system.[Method] Genome DNA extracted from sheep contagious ecthyma virus strain JLSY04 as a template,Gene fragments obtained from B2L by PCR amplification;B2L gene cloning was cloned into PDNR-CMD vector,screening positive clones and plasmid CTC572-6 was obtained;CTC572-6 plasmid for homologous was recombined with the adenoviral vector.Screening positive clones and bacilli PCR,digestion and sequencing and so on were identified.[Result] After identified by enzyme digestion and gene sequencing,recombinant adenovirus vector CTC572Ade-30 of carrying sheep contagious ecthyma virus B2L gene was constructed successfully.[Conclusion] Which laid the foundation for sheep contagious ecthyma genetically engineered vaccine. 展开更多
关键词 CEV B2L gene Adenovirus vector
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妊娠糖尿病患者血糖、血脂水平与CDKN2A/2B基因多态性的相关性 被引量:7
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作者 刘杰 王淑贞 +2 位作者 王巧莲 杜建国 王贝贝 《标记免疫分析与临床》 CAS 2018年第9期1360-1363,共4页
目的探讨妊娠糖尿病患者血糖、血脂水平与CDKN2A/2B基因多态性的相关性。方法选取2015年1月至2017年1月我院内分泌科、产科收治的妊娠期糖尿病患者120例(GDM组),同时选取同期在我院产科门诊检查糖耐量试验正常的孕妇120例作为对照。检... 目的探讨妊娠糖尿病患者血糖、血脂水平与CDKN2A/2B基因多态性的相关性。方法选取2015年1月至2017年1月我院内分泌科、产科收治的妊娠期糖尿病患者120例(GDM组),同时选取同期在我院产科门诊检查糖耐量试验正常的孕妇120例作为对照。检测两组孕妇CDKN2A/2B基因多态性,并对妊娠期糖尿病患者血糖、血脂水平与CDKN2A/2B基因多态性的相关性进行分析。结果妊娠期糖尿病患者TT、TC基因型的总胆固醇(TC)、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)高于CC基因型,差异有统计学意义(P<0.05);TT、TC基因型的高密度脂蛋白(HDL)低于CC基因型,差异有统计学意义(P<0.05);两组孕妇CDKN2A/2B基因TT、TC、CC 3种基因型分布差异有统计学意义(P<0.05);GDM组危险等位基因T分布频率显著高于健康对照组(P <0.05)。结论 CDKN2A/2B基因可能是妊娠糖尿病的易感基因之一,TC、TG、LDL、HDL、FBG与CDKN2A/2B基因多态性具有相关性。 展开更多
关键词 妊娠糖尿病 CDKN2A/2b基因多态性 血糖 血脂
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赫赛汀联合IFNα-2b对肾癌细胞耐药性的影响 被引量:1
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作者 王家菁 胡志全 叶章群 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第15期23-25,共3页
目的了解赫赛汀联合干扰能α-2b(IFNα-2b)对肾癌细胞系在体外的杀伤抑制作用,同时检测肾癌细胞在药物作用前后人类表皮生长因子受体2(HER2)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达情况。方法肾癌细胞系通过细胞培养技术进行培养,用... 目的了解赫赛汀联合干扰能α-2b(IFNα-2b)对肾癌细胞系在体外的杀伤抑制作用,同时检测肾癌细胞在药物作用前后人类表皮生长因子受体2(HER2)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达情况。方法肾癌细胞系通过细胞培养技术进行培养,用四唑比色法观察赫赛汀联合干扰能对该细胞系的抑制杀伤效果,应用链霉抗生物素—过氧化物酶免疫组织化学(SP)法测定HER2、γ-GCS表达情况。结果赫赛汀联合IFNα-2b对肾癌细胞的生长抑制及耐药性呈时间和剂量依赖性。经药物处理后,HER2、γ-GCS表达明显下降(P<0.05)。结论赫赛汀能有效抑制肾癌细胞的生长,对瘤细胞的耐药性也有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 肾细胞癌 赫赛汀 干扰能α-2b 基因表达 耐药性 肿瘤细胞
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重组黄瓜花叶病毒2b基因PVX侵染性载体的稳定性分析 被引量:1
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作者 庄木 王晓武 +1 位作者 方智远 谢丙炎 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期420-425,共6页
本研究利用北京甘蓝CMV分离物(CMV-BG)全长2b基因,构建了含其正义和反义序列的PVX侵染性载体pVX2bS和pVX2bAS,并进行了它们与PVX侵染性载体间的共侵染稳定性实验。结果表明:pVX2bS和pVX2bAS能侵染本氏烟、SR1、Sam sun NN烟草、Shepody... 本研究利用北京甘蓝CMV分离物(CMV-BG)全长2b基因,构建了含其正义和反义序列的PVX侵染性载体pVX2bS和pVX2bAS,并进行了它们与PVX侵染性载体间的共侵染稳定性实验。结果表明:pVX2bS和pVX2bAS能侵染本氏烟、SR1、Sam sun NN烟草、Shepody马铃薯和中蔬5号番茄,与pSfinx相比,表现不同程度的症状延迟效应;pVX2bS和pVX2bAS在22℃/16℃(昼/夜温度)条件下,接种SR1烟草45d仍可检测到重组载体的存在;pVX2bS和pVX2bAS菌液混合接种15d后只能检测到正义或反义一种载体的随机表达,二者交互接种,后接种的一方不能表达。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 2b基因 PVX侵染性载体 侵染稳定性
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口蹄疫病毒2B基因绿色荧光蛋白融合表达质粒的构建及表达 被引量:1
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作者 崔丽瑾 王兴龙 +6 位作者 梅英武 任林柱 闫广谋 张辉 郎需龙 段小宇 路浩 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第9期756-758,共3页
目的构建口蹄疫病毒(FMDV)2B基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。方法RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2B基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光... 目的构建口蹄疫病毒(FMDV)2B基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。方法RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2B基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和2B基因转录水平。结果经双酶切及PCR鉴定,目的基因片段大小与预期相符,测序结果与WFL株相应序列一致。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有2B基因的转录。结论已成功构建了FMDV2B基因GFP融合表达质粒,并在BHK-21细胞中获得了表达。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 2b基因 绿色荧光蛋白 融合表达
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沉默抑制子CMV 2b基因的克隆及其反向重复植物表达载体的构建 被引量:1
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作者 宋培培 李爽 +3 位作者 檀根甲 贾琳 丁菲 江彤 《激光生物学报》 CAS CSCD 2010年第3期347-352,共6页
从安徽亳州采集表现明显CMV症状的烟草样本,取ELISA检测阳性反应最强的样本提取总RNA。设计特异性引物扩增CMV RNA2部分片段,克隆并测序。其中包含的2b基因全长336个核苷酸,编码111个氨基酸。将来源于安徽烟草的CMV 2b基因与其它CMV 2b... 从安徽亳州采集表现明显CMV症状的烟草样本,取ELISA检测阳性反应最强的样本提取总RNA。设计特异性引物扩增CMV RNA2部分片段,克隆并测序。其中包含的2b基因全长336个核苷酸,编码111个氨基酸。将来源于安徽烟草的CMV 2b基因与其它CMV 2b基因进行序列比对,结果表明,来源于安徽烟草的CMV2b基因与来源于韩国的2b基因AF033667的核苷酸序列相似性最高,达98.8%。构建2b基因系统关系树,也表明来源于安徽烟草的CMV 2b基因与AF033667亲缘关系最近。以安徽CMV 2b为模板,分别扩增大小约为300 bp的正向片段CMV 2b(r)和反向片段CMV 2b(i)。先后将反向片段CMV 2b(i)和正向片段CMV 2b(r)分别插入载体pSK-In所含intron两侧,获得重组质粒pSK-2b(r)-In-2b(i)。再将含intron的正反向片段插入pBIN438,最终得到含CMV 2b部分序列反向重复的植物表达载体pBIN-2b(r)-In-2b(i)。 展开更多
关键词 CMV 2b基因 沉默抑制子 反向重复表达载体 构建
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胸腺素α1/干扰素α-2b融合基因表达载体的构建与表达 被引量:1
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作者 王景林 侯世勇 康琳 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第3期242-244,共3页
通过PCR人工合成模板的方法获得牛Tα1基因,与含IFNα-2b基因的pAG-IFN重组质粒,构建Tα1/IFNα-2b融合基因重组质粒pUC18-Tα1/IFN,经序列分析证实,融合基因Tα1和IFNα-2b与GenBank登录基因的序列一致性分别为100%和98.5%,仅IFNα-2b... 通过PCR人工合成模板的方法获得牛Tα1基因,与含IFNα-2b基因的pAG-IFN重组质粒,构建Tα1/IFNα-2b融合基因重组质粒pUC18-Tα1/IFN,经序列分析证实,融合基因Tα1和IFNα-2b与GenBank登录基因的序列一致性分别为100%和98.5%,仅IFNα-2b有两处碱基发生无义突变.再将融合基因亚克隆入pBV220,构建融合表达载体pBV220-Tα1/IFN,转化到E.coliM15经IPTG诱导,实现了Tα1-IFNα-2b融合蛋白的高表达,约占菌体总蛋白的24.5%,为包涵体形式.这为研制Tα1-IFNα-2b双重活性的融合蛋白奠定了基础. 展开更多
关键词 胸腺素a1 干扰素A-2b 融合基因 表达
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CDKN2A/2B基因单核苷酸多态性与妊娠期糖尿病的相关性 被引量:2
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作者 刘念 于祥远 +2 位作者 秦林原 张军 余红平 《广西医学》 CAS 2019年第13期1673-1677,共5页
目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2A/2B(CDKN2A/2B)基因单核苷酸多态性(SNP)与妊娠期糖尿病(GDM)发生风险的关系。方法选择459例GDM患者为病例组,571例正常妊娠者为对照组。通过相关数据库及文献筛选CDKN2A/2B基因的7个候选SN... 目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2A/2B(CDKN2A/2B)基因单核苷酸多态性(SNP)与妊娠期糖尿病(GDM)发生风险的关系。方法选择459例GDM患者为病例组,571例正常妊娠者为对照组。通过相关数据库及文献筛选CDKN2A/2B基因的7个候选SNP位点,并对其进行基因分型。采用多因素Logistic回归模型评估候选SNP位点与GDM的相关性,采用多因子降维法评估候选SNP位点的单独或联合作用对妊娠期女性发生GDM的影响。结果多因素回归分析结果显示,与携带CDKN2A/2B基因rs10811661位点CC基因型的孕妇比较,携带TC或TT基因型的孕妇GDM患病风险升高(均P<0.05);在显性遗传模型下,与CC基因型携带者比较,携带TC/TT基因型的孕妇发生GDM的风险升高(P<0.05)。多因子降维分析结果显示,最优单位点模型为rs10811661位点(P<0.05);SNP-SNP联合作用与GDM发病存在关联,rs10811661-rs7036656-rs1063192-rs3217986位点的交互作用可增加GDM发病风险(P<0.05)。结论 CDKN2A/2B基因rs10811661位点多态性与GDM发生有关,SNP单独和联合作用均可影响妊娠期女性对GDM的易感性。 展开更多
关键词 妊娠期糖尿病 细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2A/2b基因 单核苷酸多态性 rs10811661位点 发病风险
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人α-干扰素2b基因转化番茄、番木瓜的研究(Ⅰ)──—人α-干扰素2b基因植物表达载体构建方法的研究 被引量:4
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作者 周鹏 赵志英 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1998年第1期52-57,共6页
以PBV889(α-IFN-2b)为基因供体,利用EcoRⅠ/PstⅠ双酶切分离出基因α-IFN-2b,再利用现有的植物表达质粒ROKⅡ(带PRV-CP基因,35Spromoter/NPTⅡ),用XbaⅠ/SacⅠ双酶切分离出大片段(E6)作为基因受体,采用定向连接法... 以PBV889(α-IFN-2b)为基因供体,利用EcoRⅠ/PstⅠ双酶切分离出基因α-IFN-2b,再利用现有的植物表达质粒ROKⅡ(带PRV-CP基因,35Spromoter/NPTⅡ),用XbaⅠ/SacⅠ双酶切分离出大片段(E6)作为基因受体,采用定向连接法将α-IFN-2b拼接在E6上,完成植物表达载体构建。采用DNAdotblot、RNAdotblot对重组子进行筛选验证。 展开更多
关键词 转基因蔬菜 α干扰素2b 表达载体 重组子筛选
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人乳头瘤病毒11型E6基因与人IFN-α2b融合基因原核表达质粒的构建与鉴定
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作者 相文忠 王飞 +5 位作者 李光富 王新军 刘丰 王群 张兆松 毕志刚 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2005年第7期385-387,427,共4页
目的构建HPV11E6与人IFNα2b融合基因表达载体,为进一步原核表达奠定基础。方法在IFNα2b的起始密码子之前加入ccatggct,同时以编码(GGSGS)3的45个碱基序列取代其终止密码子,将改造后的人IFNα2b基因人工合成,然后将其装入质粒pET32a的... 目的构建HPV11E6与人IFNα2b融合基因表达载体,为进一步原核表达奠定基础。方法在IFNα2b的起始密码子之前加入ccatggct,同时以编码(GGSGS)3的45个碱基序列取代其终止密码子,将改造后的人IFNα2b基因人工合成,然后将其装入质粒pET32a的NcoⅠ和BamHⅠ酶切位点之间;PCR扩增HPV11E6基因片段。将含有IFNα2b基因片段的质粒pET32a和含有BamHⅠ,EcoRⅠ酶切位点的HPV11E6同时用BamHⅠ,EcoRⅠ酶切,将酶切产物纯化回收后做连接反应,连接产物常规转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定,同时将挑选的阳性克隆菌液送公司测序。结果测序结果表明成功的将HPV11E6和人IFNα2b通过连接肽(GGSGS)3连接并装入pET32a的NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点之间,且基因序列与设计完全一致。结论HPV11E6与人IFNα2b融合基因表达载体的成功构建,为进一步原核表达奠定了基础。 展开更多
关键词 尖锐湿疣 人乳头瘤病毒 E6基因 IFNΑ-2b 融合基因
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RET原癌基因突变致多发性内分泌腺瘤病2b型临床诊治 被引量:3
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作者 黄培颖 陈宁 +5 位作者 宋海曲 王彩虹 张惠杰 李小英 李学军 林明珠 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期229-232,共4页
多发性内分泌腺瘤病(MEN)2b型是RET基因突变引起的常染色体显性遗传病,常见临床表型为甲状腺髓样癌(MTC)、嗜铬细胞瘤、多发性黏膜神经瘤和类马凡体型,各表型可同时或先后发生,易漏诊。本文分析了1例MEN2b型患者病史、诊断、治疗及随访... 多发性内分泌腺瘤病(MEN)2b型是RET基因突变引起的常染色体显性遗传病,常见临床表型为甲状腺髓样癌(MTC)、嗜铬细胞瘤、多发性黏膜神经瘤和类马凡体型,各表型可同时或先后发生,易漏诊。本文分析了1例MEN2b型患者病史、诊断、治疗及随访资料。本例患者1995年无诱因出现颈部增粗,诊断为"右甲状腺腺瘤";1999年发现"左侧甲状腺占位";2000年发现舌、唇黏膜增厚并突起小肿物,肿物渐增大;2009年及2010年分别行左、右肾上腺肿物切除,术后病理示:嗜铬细胞瘤。本次入院行下唇内侧局部小突起切除和双侧甲状腺次全切除术,术后病理示:舌黏膜神经瘤、MTC。患者基因测序发现RET基因第16号外显子918密码子突变(M918T),患者父母、兄均未出现MEN2b表型特征,基因检测无异常发现。患者MTC术后1年降钙素水平仍高于参考值,结合肺部CT检查结果,考虑MTC肺部转移可能性较大。 展开更多
关键词 多发性内分泌腺瘤病2b 甲状腺肿瘤 嗜铬细胞瘤 RET基因 突变
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消减杂交筛选2BS细胞衰老过程中差异表达基因 被引量:1
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作者 赵亮 童坦君 张宗玉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期311-318,共8页
细胞的复制性衰老最终导致不可逆的G1 期阻滞 ,研究此过程中差异表达基因对于阐明衰老发生机制有重要意义 .分别构建年轻和衰老 2BS细胞高表达基因的消减文库 ,经点杂交筛选后共得5 3个差异表达基因 .对其中部分基因的VirtualNorthern... 细胞的复制性衰老最终导致不可逆的G1 期阻滞 ,研究此过程中差异表达基因对于阐明衰老发生机制有重要意义 .分别构建年轻和衰老 2BS细胞高表达基因的消减文库 ,经点杂交筛选后共得5 3个差异表达基因 .对其中部分基因的VirtualNorthern印迹分析证实差异表达确实存在 .选择Y1 1 4和S1 1 1片段 ,以Northern印迹分析确证其表达变化 ;并通过对新生儿和老年人白细胞中二者的表达分析 ,显示二者在体内也存在与体外衰老过程相一致的随增龄表达变化 .结果在一定程度上体现了 2BS细胞衰老过程中基因表达谱的变化 ;首次报道了TSSC3(tumorsuppressingsubtransferablecandidate 3)、hnRNPK (heterogeneousnuclearribonucleoproteinK)等基因在成纤维细胞衰老时发生差异表达 ;通过对Y1 1 4和S1 1 1在体内衰老时的表达分析 。 展开更多
关键词 复制性衰老 2bS 消减杂交 差异表达基因
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SH3PXD2b基因突变与颅颌面畸形和中耳炎 被引量:1
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作者 杨彬 张志光 《国际口腔医学杂志》 CAS 2013年第6期795-798,共4页
先天性颅颌面畸形作为口腔颌面外科的常见病,多由基因突变引起。先天性颅颌面畸形在影响患者颅颌面形态和功能的同时,多伴随有咽鼓管功能障碍和中耳炎的发生,引起听觉障碍。SH3PXD2b作为新发现的伪足受体蛋白基因,对细胞表面伪足形成、... 先天性颅颌面畸形作为口腔颌面外科的常见病,多由基因突变引起。先天性颅颌面畸形在影响患者颅颌面形态和功能的同时,多伴随有咽鼓管功能障碍和中耳炎的发生,引起听觉障碍。SH3PXD2b作为新发现的伪足受体蛋白基因,对细胞表面伪足形成、细胞外基质改建与重塑、颅颌面器官的发生有重要的意义。本文就SH3PXD2b基因、SH3PXD2b基因突变、颅颌面畸形与咽鼓管功能障碍和中耳炎等研究进展作一综述。 展开更多
关键词 SH3PXD2b基因 基因突变 颅颌面畸形 咽鼓管功能障碍 中耳炎
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