采用定点基因缺失突变技术在大肠杆菌中分泌鲑鱼生长激素

目的：为获得与天然鲑鱼生长激素一致的基因工程产物，对已构建的鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒ｐＯｓＧＨ１５３进行改造，删除所编码表达产物氨基端多余的９个碱基。方法：采用ＰＡＬＴＥＲ系统进行寡聚核苷酸指导下的基因定点缺失突变。突变质粒ｐＯｓＧＨ１５８经限制性酶切图谱及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析加以证实。结果：含有表达质粒ｐＯｓＧＨ１５８的大肠杆菌株经ＩＰＴＧ诱导后提取周质蛋白。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫印迹分析表明：周质表达产物具有与天然ｓＧＨ免疫活性和分子量一致的特性，其分子质量约为２３ｋｕ。结论：应用ＰＩＮ－Ⅲ－ｏｍｐＡ ２分泌型载体系统和ＰＡＬＴＥＲ突变系统构建鲑鱼生长激素基因在大肠杆菌表达载体的方法，可作为原核系统分泌型高效表达的模型。