稳定表达nucleostemin-siRNA的肿瘤细胞克隆的筛选和鉴定

目的:用脂质体法建立nucleostemin(NS)基因特异性siRNA阳性细胞克隆,为深入研究NS基因在胃癌细胞增殖调控中的作用和机制提供理想的生物学模型。方法:试剂盒法将真核表达载体PCDNA4/C-NS-silencer质粒大量扩增,然后以限制性切酶PVUI酶切线性化处理,用LipofectamineTM2000 Reagent将PCDNA4/C-NS-silencer及其对照空载体转染胃癌SGC-7901细胞,经Zeocin抗生素压力筛选后用PCR方法鉴定细胞克隆外源基因整合阳性。结果:经Zeocin抗生素压力筛选后两组细胞均收获多个细胞克隆;PCR结果表明两组细胞克隆外源基因整合阳性。结论:成功建立表达NS-siRNA的胃癌SGC-7901细胞克隆。