肿瘤转移相关蛋白ST14的表达、纯化及活性鉴定

ST14 is one of the type II transmembrane serine proteases that correlates with the process of tumor metastasis. The C-terminal catalytic region (900 bp) of ST14 was cloned into the expression vector pGEX-4T-2 and the positive plasmid pGEX-4T-2-ST14 was transformed into E. coli BL21, then cultured and induced with IPTG. The chaperonin GroEL was found to be tightly associated with the fusion protein and co-purified with it by regular GST affinity chromatography. A method for the removal of contaminating GroEL from GST-ST14 fusion protein was described, the purity of product was 96.2%. Enzyme activity assay indicated that this fusion protein had serine protease activity.

联合运用St14(DXS52)位点VNTR和FⅧ基因内的(CA)n重复多态性诊断甲型血友病

目的 提高甲型血友病 (hemophilia A,HA)家系成员基因诊断及产前基因诊断的准确性和可诊断率。方法 采用 St14 (DXS5 2 )位点的可变串联重复序列和 F 基因第 13内含子的 (CA) n重复多态性连锁分析对 HA家系进行间接基因诊断。结果 单用上述 2个多态位点中的 1个对 9个 HA家系进行连锁分析 ,可诊断率均为 6 6 .7% ,联合 2个多态位点 ,可诊断率则提高到 88.9% ,完成了 4个家系的产前基因诊断 ,并监测到 1例单用 St14位点的可变串联重复序列多态连锁分析可能发生的产前诊断的误诊。结论联合采用上述 2个多态位点可以对近 90 %的 HA家系作出快速、准确的基因诊断和产前基因诊断。

两个大肠癌负相关新基因的研究

目的]在分子水平寻找与人大肠癌的发生发展相关的新的因素 ,研究两个大肠癌负相关基因的结构与功能。[方法]采用强化荧光原位杂交 (FISH) ,进行两个新大肠癌基因染色体定位。通过Dotblot、Northernblot、RT_PCR_ELISA,免疫组化及体内外转染实验进行新基因功能研究。[结果]已完成两个新基因的全长cDNA序列分析及染色体定位等结构研究 ,并进行了两基因的核酸与蛋白表达研究及功能研究。SNC6基因全长3168bp ,定位于染色体22q13区带 ,共有12个外显子及11个内含子。SNC19全长3152bp,定位于染色体11q24区带。两个基因于1998年被国际命名委员会分别命名为ST13、ST14基因 ,并被列入人类基因组图谱中。对比两个新基因在正常大肠粘膜及癌组织核酸水平表达情况 ,癌组织低于正常粘膜 ,在不同肿瘤细胞系及组织中表达不一。两基因均已获得了表达蛋白。SNC6已制备了单抗 ,经免疫组化检测表达与核酸表达结果相似 ,经体内外研究SNC6基因有抑制大肠癌细胞系生长的作用。SNC19已明确为丝氨酸蛋白酶家族成员。[结论]SNC6与SNC19基因可作为新的大肠癌相关基因加以研究、利用。