人Sox2和Nanog基因的克隆及其对胎肺成纤维细胞分化的影响

目的克隆人Sox2、Nanog基因编码序列,构建pSG5-Sox2及pSG5-Nanog真核表达重组质粒,转染胎肺间质成纤维细胞,观察Sox2、Nanog基因表达并鉴定其功能。方法应用RT-PCR方法分别从4～6周龄流产胎儿脑组织和膀胱癌细胞中扩增出Sox2及Nanog基因编码全序列,将其连接至pSG5表达载体。经测序比对后,将重组质粒pSG5-Sox2及pSG5-Nanog转染胎肺成纤维细胞,采用免疫细胞化学法检测Sox2及Nanog基因表达情况,倒置显微镜观察转染前后细胞的形态学变化。结果人Sox2基因和Nanog基因编码序列全长957bp和934bp,重组质粒pSG5-Sox2、pSG5-Nanog测序成功,BLAST比对成功,转染胎肺成纤维细胞后,免疫细胞化学检测到Sox2、Nanog阳性表达。转染后胎肺成纤维细胞形态学先呈现干细胞样变化,进而分化为上皮样细胞,CK(广谱)染色阳性,并有向神经细胞分化的趋势,巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶染色阳性。结论克隆了人Sox2、Nanog基因,成功转染胎肺成纤维细胞并检测到基因阳性表达,胎肺间质成纤维细胞呈干细胞样生长并有向上皮及神经样细胞分化的趋势,为进一步研究Sox2和Nanog基因功能及重编程细胞分化奠定了基础。