p53基因突变对非小细胞肺癌TSG101/MDM2信号通路的影响

目的探讨p53基因突变在肺癌中对TSG101/MDM2信号通路影响的临床病理学意义。方法采用免疫组织化学方法检测185例肺癌组织标本中TSG101、MDM2及p53的表达,用聚合酶链反应单链构象多态性(Polymerase Chain Reaction,single-strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)分析法检测p53突变情况,以及Western blot检测TSG101在肺癌组织和正常肺组织中的表达。结果 (1)肺癌组中p53蛋白的总阳性率为80.54%(149/185),PCR-SSCP检测结果显示总突变率为56.67%(17/30),p53蛋白表达与病理分期、淋巴结转移有相关性(P<0.05);TSG101蛋白的低表达率为58.92%(109/185),Western blot结果显示TSG101在癌组织中的表达明显低于对照组(P<0.05),TSG101蛋白表达与病理分期、分化、淋巴结转移有相关性(P<0.05);MDM2蛋白的过表达率为77.84%(144/185),MDM2蛋白表达与病理分期、淋巴结转移有相关性(P<0.05)。(2)在p53阳性的149例中TSG101阳性76例,MDM2阳性139例,在p53阴性的36例中TSG101阳性33例,MDM2阳性5例。p53与TSG101两者共表达率为41.08%,一致性为42.70%。p53与MDM2两者共表达率为75.14%,一致性为91.89%。结论 (1)p53/MDM2上调与TSG101表达下调肺癌的发生及生物学行为有关。(2)当p53突变时,TSG101与MDM2的表达呈负相关关系。

TSG101在肺癌组织和细胞系中的表达及意义

背景和目的在小鼠NIH3T3成纤维细胞中通过随机纯合子敲除法证实,破坏肿瘤易感基因TSG101(Tumor Susceptibility Gene101)导致裸鼠的自发性肺转移性肿瘤,从而TSG101作为侯选的肿瘤抑制基因被认识。随后,越来越多的研究证实TSG101并非是严格意义上的肿瘤抑制基因,在原发乳腺癌并没有检测到基因内部的序列的丢失或异常,相反发现存在异常的TSG101选择性剪接体。本研究目的旨在研究肺癌细胞系和组织中TSG101的表达情况,分析TSG101及异常的TSG101选择性剪接体在肺癌的发生发展过程中可能所起的作用。方法采用免疫组织化学方法(SP法)检测79例肺鳞癌和肺腺癌组织及相应癌旁正常肺组织中TSG101的表达情况。采用RT-PCR实验分析,检测出在7种肺癌细胞系中野生型和异常剪接转录产物表达情况。采用WesternBlot方法检测肺癌细胞系中蛋白质表达情况。结果TSG101在肺鳞癌和肺腺癌中的蛋白水平显著低于其在相应正常肺组织中的表达。七种细胞系中普遍存在由于异常的选择性剪接而缩短的TSG101转录产物,和野生性转录产物同时表达。通过统计学分析发现在小细胞肺癌细胞系中存在更多的异常的转录产物。通过WesternBlot分析同样发现小细胞肺癌细胞系同样与其他非小细胞肺癌细胞系在蛋白水平上存在差异。结论尽管在非小细胞肺癌中作为侯选的肿瘤抑制因子,但是普遍存在的TSG101异常转录产物也许和肺癌的类型相关,可作为肺癌恶性进展的生物学标志。

肺癌中TSG101蛋白与Notch3受体表达的相关性

背景与目的TSG101蛋白是内吞分选通路的重要因子,该通路的异常会减少果蝇中Notch受体的降解,导致此受体信号对细胞分化、发育调节的紊乱。在哺乳动物中,Notch受体家族中的3亚型与肺组织发育及肺癌发生密切相关。本实验的目的是初步探讨在人类肺癌中,TSG101蛋白与Notch3受体之间的表达是否也存在关联。方法分别采用Western blot和免疫组化SP法检测TSG101蛋白与Notch3受体在肺癌组织、细胞系中的表达,并应用抗体封闭TSG101蛋白功能后观察Notch3受体的表达变化。结果TSG101蛋白在肺癌中比正常肺组织表达减少,而Notch3受体在肺癌中比正常肺组织表达则增多,此变化均与肺癌的分化及淋巴结转移相关。当用抗体封闭肺癌细胞系中TSG101蛋白功能时,Notch3受体检测水平呈上升变化。结论肺癌中TSG101蛋白表达下调,与Notch3受体检测水平上升有相关性。

乳腺癌中TSG101与MAPK/ERK信号通路的关系

目的研究乳腺癌中TSG101与MAPK/ERK信号通路的关系。方法应用脂质体法将靶向TSG101的siRNA转染入乳腺癌细胞株MCF-7中。分别使用免疫荧光和Western blot方法检测siRNA干扰后MCF-7中p-ERK蛋白表达的改变。使用免疫组织化学方法检测TSG101、p-ERK蛋白在54例人乳腺癌组织中的表达。结果 TSG101 siRNA转染后的MCF-7中p-ERK蛋白表达明显减少。TSG101和p-ERK蛋白在乳腺癌组织中的阳性率分别为74.07%、81.48%。TSG101和p-ERK在乳腺癌组织中的蛋白表达存在正相关(r=0.371,P<0.05)。结论 TSG101在乳腺癌中可能通过MAPK/ERK信号通路发挥生物学作用。

TSG101-siRNA对肝癌耐药细胞株QGY／CDDP的逆转作用

目的构建TSG101(tumor susceptibility gene101)小干扰RNA(TSG101-siRNA)的真核表达载体,观察RNA干扰沉默TSG101基因后化疗药物顺铂(CDDP)对肝癌耐药细胞株QGY/CDDP增殖的影响。方法根据小干扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101的靶序列,应用DNA重组技术将目的序列克隆入小干扰RNA的表达载体;RT-PCR检测TSG101-siRNA对QGY/CDDP细胞tsg101mRNA表达的影响;Western blot检测TSG101-siRNA对TSG101基因表达蛋白的抑制效率;采用MTT法测定TSG101-siRNA联合化疗药物CDDP对QGY/CDDP的增殖抑制作用。结果测序显示干扰载体构建成功,TSG101-siRNA能抑制tsg101mRNA表达,使QGY/CDDP细胞TSG101蛋白的表达下降,抑制QGY/CDDP细胞的增殖,明显增强CDDP对QGY/CDDP的增殖抑制。结论TSG101-siRNA的真核表达载体能有效地抑制QGY/CDDP细胞的增殖,提高化疗药物CDDP对QGY/CDDP的抑制率,能逆转肝癌耐药细胞株QGY/CDDP对CDDP的耐药性。

围着床期小鼠胚胎表达肿瘤易感基因101(TSG101)

揭示肿瘤易感基因101(TSG101)在围着床期胚胎中的时空表达型。方法:收集囊胚、培养获得着床前、着床后以及长开的小鼠胚胎。利用全胚原位杂交以及全胚免疫染色方法检测围着床期小鼠胚胎中TSG101的时空表达型。结果:TSG101表达于围着床期胚胎的內细胞块和滋养层细胞中,其中内细胞块细胞中的表达更强。结论:围着床期胚胎表达TSG101,暗示TSG101在胚胎着床过程中发挥作用。

TSG101与MDM2蛋白在胃腺癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤易感基因TSG101(tumor susceptibilityg gene 101)及MDM2蛋白在胃腺癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测75例胃腺癌及对应的癌旁2cm胃黏膜组织中TSG101和MDM2蛋白的表达情况,结合临床病例资料分析其临床病理意义;应用Western Blot方法检测TSG101蛋白在40例新鲜胃腺癌组织及对应的癌旁2cm胃黏膜组织的表达情况。结果 (1)在胃腺癌组织及对应的癌旁2cm胃黏膜组织中,TSG101蛋白的阳性表达率分别为26.7%(20/75)和69.3%(52/75),MDM2蛋白阳性表达率分别为57.3%(43/75)和16%(12/75),两组间差异均有显著性(P<0.05);(2)TSG101蛋白阳性表达率在胃腺癌的高中分化组为41.9%,高于低分化组的6.3%;在不伴淋巴结转移组为39.5%,高于淋巴结转移组的13.5%(P<0.05);而在不同TNM分期之间,差异无显著性(P>0.05);(3)MDM2蛋白阳性表达率在高中分化组为69.8%,明显高于低分化组的40.6%,在有无淋巴结转移组,不同TNM分期组,MDM2蛋白表达差异无显著性;(4)TSG101与MDM2蛋白之间未见相关性;(5)TSG101蛋白在胃腺癌的表达水平(0.0467±0.0098;0.1976±0.0214)低于相应癌旁2cm胃黏膜组织(0.2903±0.0279)(P<0.05),其在胃腺癌中的表达水平不同,与分化程度及有无淋巴结转移有关(P<0.05),而与TNM分期无关(P>0.05)。结论 TSG101可能作为一个新的候选抑癌基因在胃腺癌的发生、发展中发挥着一定作用,检测TSG101和MDM2蛋白的表达有助于判定胃腺癌的生物学行为。

TSG101与P21及P300/CBP在肺鳞癌和肺腺癌中的表达及意义

背景与目的在成纤维细胞3T3随机突变试验中证实肿瘤易感基因TSG101(tumor suscepti-bility gene101)是一个潜在的肿瘤抑制基因。本研究的目的旨在探讨TSG101在肺鳞癌和肺腺癌组织中的表达,以及与性别、年龄、肿瘤大小、组织类型、肿瘤分化、分期、淋巴结转移的关系,分析其与P21及P300/CBP是否存在相关性。方法采用免疫组织化学方法(SP法)检测79例肺鳞癌和肺腺癌组织及相应癌旁正常肺组织中TSG101、P21及P300/CBP的表达情况,并结合临床病理资料进行分析。采用Western blot方法检测TSG101在26例肺癌及其在相应正常肺组织中蛋白的表达情况。结果TSG101、P21及P300/CBP在肺鳞癌和肺腺癌组织中的表达率分别为59.49%、60.76%及56.96%,TSG101的表达与P21、P300/CBP的表达呈显著正相关。TSG101、P21及P300/CBP在中高分化肺癌中的表达显著高于低分化肺癌(P均<0.05);不伴有淋巴结转移的肺癌组织中TSG101、P21及P300/CBP的表达显著高于伴有淋巴结转移者(P<0.05)。TSG101在肺鳞癌和肺腺癌中的蛋白水平显著低于其在相应正常肺组织中的表达。结论TSG101、P21及P300/CBP的表达与肺鳞癌和肺腺癌组织的分化、转移密切相关,且三者在肺癌中的表达呈显著正相关,可作为评价肺癌浸润、转移的生物学标志。

TSG101在胰腺癌组织的表达及临床意义

目的:检测肿瘤易感基因101(TSG101)在胰腺癌组织中表达水平及其与癌患者临床病理特征的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测TSG101蛋白在胰腺癌及其对应正常胰腺组织的表达情况,并分析其在肿瘤中表达水平与患者性别、分化、临床分期及转移等临床病理资料之间的相关性。结果:TSG101在胰腺肿瘤组织中表达率为47/58(81.0%)明显高于正常胰腺组织表达率7/58(12.1%)(P<0.05),统计学分析提示TSG101在胰腺癌组织表达率明显高于正常胰腺组织(P<0.05),在高分化胰腺癌组织中表达明显强于中、低分化肿瘤组织,在转移性胰腺癌中表达率高于非转移性肿瘤组织(P<0.05),而与患者性别及临床分期间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TSG101在胰腺癌组织中表达与其分化程度及转移呈正相关。

鼻咽癌中TSG101基因的突变研究

应用PCR SSCP方法对鼻咽癌中TSG101基因的编码区进行突变检测,以探讨该基因在鼻咽癌变过程中的作用.16例鼻咽癌标本中未发现TSG101基因编码区存在突变.以上结果可以初步排除TSG101基因在鼻咽癌中突变的可能.

TSG101和ABCG2基因在结肠癌SP细胞增殖及耐药发生和发展中的作用

目的探讨TSG101基因和ABCG2基因在结肠癌SP细胞的表达及对耐药性的影响。方法用流式细胞仪从结肠癌组织标本中分离结肠癌SP细胞,并用裸鼠鉴定,将结肠癌SP细胞置于体外含长春新碱抗癌药物的培养液中进行细胞培养,观察SP细胞对常规抗癌药物的多药耐药现象,应用RT-PCR检测结肠癌SP细胞TSG101基因和ABCG2基因的表达。结果从结肠癌组织中成功分选出结肠癌SP细胞,种植裸鼠皮下长出移植瘤;用MTT法检测发现,0.5μg/mL浓度长春新碱对SP细胞的生长抑制作用不明显,其存活率约为81%,而对非SP细胞的抑制作用明显,其存活率仅为37%,差异有统计学意义;RT-PCR检测SP和非SP细胞TSG101、ABCG2基因表达差异均有显著性(P<0.05)。结论TSG101和ABCG2在结肠癌增殖和耐药的发生和发展中有重要作用。

TSG101在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌中的表达及意义

目的探讨TSG101在人宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌中的表达及意义。方法福尔马林固定,石蜡包埋65例肿瘤标本进行HE和TSG101免疫组织化学染色,观察TSG101的表达情况。结果TSG101蛋白在25例宫颈癌,20例子宫内膜癌,20例卵巢癌中表达的阳性率分别为56.0%(14/25),30.0%(6/20),25.0%(5/20),三组比较差异无显著性;子宫内膜癌及卵巢癌组TSG101蛋白表达率随着肿瘤分级增高而降低。结论TSG101的表达与子宫内膜癌及卵巢癌的分化程度有关,其表达率与肿瘤分级呈负相关。

TSG101蛋白在HIV-1出芽过程中的作用及其抑制剂

tsg101基因是一个抑制肿瘤基因,其翻译产物TSG101蛋白具有多重生物学功能。近年来的研究发现,TSG101蛋白通过与HIV-1 Gag蛋白结合,辅助HIV-1病毒颗粒从被感染细胞中释放出来,这说明TSG101可作为一个新的抗HIV-1靶点。基于TSG101蛋白与HIV Gag的相互作用和结构,研究人员设计合成了几类TSG101蛋白抑制剂,并通过测定这些抑制剂对TSG101蛋白的亲和力,发现其中某些化合物具有比野生型Gag更强的TSG101蛋白亲和力,值得进一步研究。

TSG101基因研究进展

TSG101基因是近年来发现的一个新的抑癌基因候选者，定位于11p15．1-p15．2，其产物TSG101蛋白具有多种重要功能，例如调控蛋白及囊泡运输，与细胞存活增殖有关等，其N端与泛素结合酶（UBC）有一定的同源性。近年来的研究表明，TSG101基因与多种肿瘤密切相关，其转录本在某些肿瘤细胞中发生了异常剪接；TSG101也有可能作为一种显性负调节子参与泛素系统对细胞周期的调节。它还参与艾滋病毒的感染过程。现对该基因的最新研究进展作一综述。

结肠癌组织TSG101表达及意义

目的探讨TSG101因蛋白表达量在结肠癌组织、癌旁组织、正常组织中的表达情况,并分析其意义。方法采用免疫印迹法(Western blotting),检测上述三种组织中的TSG101因蛋白量的表达水平,并进行统计分析。结果结肠癌组织TSG101蛋白量的相对表达水平为0.33±0.28,癌旁组织TSG101蛋白量的相对表达水平为1.67±0.65,正常组织TSG101蛋白量的相对表达水平为4.53±0.87,三者间均有显著差异(P<0.05)。结论TSG101基因可能作为一种抑癌基因,其缺失可能在结肠癌的发生发展中有重要意义。

TSG101在胃癌中的表达及意义

目的:探讨TSG101在胃癌中的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法检测TSG101在胃癌中的表达及与分化程度的关系。结果:TSG101在胃癌的表达率为77/179(43%),其中在高、中、低度分化胃癌的表达率依次为14/62(23%)、20/59(34%)、43/58(74%);在低分化胃癌组织中的表达明显高于高分化和中分化胃癌组织(P<0.05)。结论:TSG101在胃癌中的表达和肿瘤分化程度密切相关,可能在胃癌的发生发展中扮演重要角色。

下调TSG101对乳腺癌细胞系MDA-MB-435S的影响

目的:研究肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)的下调对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞的影响。方法:应用脂质体法将靶向TSG101的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染入乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞中。分别使用MTT法、流式细胞仪检测siRNA干扰后MDA-MB-435S细胞增殖能力、细胞周期的变化。结果:MTT结果显示,TSG101 siRNA转染后的MDA-MB-435S细胞与对照组相比,增殖能力减弱。细胞周期结果显示,TSG101 siRNA转染后的MDA-MB-435S细胞周期与对照组相比,G0/G1期比例增多,S期比例减少,细胞周期阻滞于G1/S期。结论:TSG101的下调能够抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-435S细胞的增殖,并导致细胞周期阻滞。TSG101可能参与乳腺癌的发生、发展过程。

TSG101-siRNA表达载体对结肠癌HT29／L-OHP细胞株耐药的逆转作用

目的构建TSG101(tumour susceptibility gene101,TSG 101)小干扰RNA(TSG101-siRNA)的真核表达载体,观察RNA干扰沉默TSG101基因后化疗药物奥沙利铂(L-OHP)对结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP增殖的影响。方法根据小干扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101的靶序列,应用DNA重组技术将目的序列克隆入小干扰RNA的表达载体;RT-PCR检测TSG101-siRNA对HT29/L-OHP细胞TSG101 mRNA表达的影响;Western blot检测TSG101-siRNA对TSG101基因表达蛋白的抑制效率;采用MTT法测定TSG101-siRNA联合化疗药物L-OHP对HT29/L-OHP的增殖抑制作用;FCM分析TSG101-siRNA转染HT29/L-OHP细胞前后的细胞周期分布情况。结果测序显示干扰载体构建成功,TSG101-siRNA能抑制TSG101mRNA表达,使HT29/L-OHP细胞TSG101蛋白的表达下降,明显增强L-OHP对HT29//L-OHP的增殖抑制,TSG101-siRNA转染HT29/L-OHP细胞后G0/G1期和S期细胞数有增加,而G2/M期细胞数有减少。结论TSG101-siRNA的真核表达载体能有效地抑制HT29/L-OHP细胞的TSG101 mRNA、TSG101蛋白的表达,提高化疗药物奥沙利铂对HT29/L-OHP的抑制率,能逆转结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP对L-OHP的耐药性。

TSG101 siRNA表达载体的构建及其作用研究

目的构建TSG101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)小干扰RNA(TSG101 siRNA)的真核表达载体并鉴定,初步研究其与胃癌多药耐药的相关性。方法根据小干扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101的靶序列,应用DNA重组技术将目的序列克隆入小干扰RNA的表达载体;将TSG101 siRNA的真核表达载体转染胃癌长春新碱(VCR)耐药细胞SGC7901/VCR,通过Western blot鉴定TSG101 siRNA的抑制效率;以MTT实验检测细胞生长曲线和对VCR、阿霉素(ADM)的药物敏感性。结果所构建的载体经酶切后释放出预期大小的片断并经测序证实;TSG101 siRNA真核表达载体瞬时转染胃癌耐药细胞SGC7901/VCR后,发现TSG101的表达被显著抑制;细胞生长减慢,且对VCR、ADR的敏感性增加。结论成功构建了TSG101 siRNA的真核表达载体,并初步提示其参与了胃癌的多药耐药,为下一步工作奠定了基础。