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大片段DNA遗传转化的研究进展 被引量:1
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作者 石玉 蒋世翠 +3 位作者 张美萍 孙春玉 王康宇 王义 《北方园艺》 CAS 北大核心 2013年第15期208-211,共4页
DNA克隆技术是分子生物学研究中一项重要的技术手段。随着分子生物学技术的发展及植物基因组计划的进行,产生了既能够克隆大片段DNA又能够将候选基因利用农杆菌介导法进行遗传转化试验的载体。现对大片段克隆载体的发展及大片段DNA遗传... DNA克隆技术是分子生物学研究中一项重要的技术手段。随着分子生物学技术的发展及植物基因组计划的进行,产生了既能够克隆大片段DNA又能够将候选基因利用农杆菌介导法进行遗传转化试验的载体。现对大片段克隆载体的发展及大片段DNA遗传转化的影响因素进行综述,并对大片段DNA遗传转化的发展作了展望。 展开更多
关键词 克隆载体 大片段 遗传转化
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稻瘟病菌大片段DNA转化载体的构建
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作者 陈亚平 施文骁 王洪凯 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期91-96,共6页
构建能够转化大片段DNA的载体是进行基因簇功能分析的重要手段。利用cosmid载体和pBHt2载体构建了一个可以在稻瘟病菌中转化大片段DNA的载体,通过农杆菌介导的转化方法,成功地将超过30kb的大片段DNA转化到稻瘟病菌中。研究结果将促进稻... 构建能够转化大片段DNA的载体是进行基因簇功能分析的重要手段。利用cosmid载体和pBHt2载体构建了一个可以在稻瘟病菌中转化大片段DNA的载体,通过农杆菌介导的转化方法,成功地将超过30kb的大片段DNA转化到稻瘟病菌中。研究结果将促进稻瘟病菌基因簇的功能分析。 展开更多
关键词 载体 转化 大片段dna 稻瘟病菌
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The involvement of p38 MAPK in transforming growth factor β1-induced apoptosis in murine hepatocytes 被引量:15
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作者 LiaoJH ChenJS 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2001年第2期89-94,共6页
We reported in this manuscript that TGF-beta1 induces apoptosis in AML12 murine hepatocytes, which is associated with the activation of p38 MAPK signaling pathway. SB202190, a specific inhibitor of p38 MAPK, strongly ... We reported in this manuscript that TGF-beta1 induces apoptosis in AML12 murine hepatocytes, which is associated with the activation of p38 MAPK signaling pathway. SB202190, a specific inhibitor of p38 MAPK, strongly inhibited the TGF-beta1-induced apoptosis and PAI-1 promoter activity. Treatment of cells with TGF-beta1 activates p38. Furthermore, over-expression of dominant negative mutant p38 also reduced the TGF-beta1-induced apoptosis. The data indicate that the activation of p38 is involved in TGF-beta1-mediated gene expression and apoptosis. 展开更多
关键词 Animals Apoptosis Cells Cultured dna Fragmentation Enzyme Inhibitors Gene Expression Regulation Enzymologic Genes Reporter genetic Vectors HEPATOCYTES IMIDAZOLES MAP Kinase Signaling System Mice Mitogen-Activated Protein Kinases Mutation Phosphorylation Plasminogen Activator Inhibitor 1 PYRIDINES Research Support Non-U.S. Gov't TRANSFECTION Transforming Growth Factor beta p38 Mitogen-Activated Protein Kinases
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水稻双元细菌人工染色体载体系统转化体系的建立(英文) 被引量:6
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作者 何瑞锋 王媛媛 +4 位作者 杜波 唐明 游艾青 祝莉莉 何光存 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期269-276,共8页
普通双元载体已被广泛应用于农杆菌介导的植物转化,但这类载体通常只能转移5-20 kb的外源DNA片段;而双元细菌人工染色体(BIBAC)载体可以弥补普通双元载体的不足,通过它已在烟草、番茄等双子叶植物中实现了大片段 DNA(150 kb)的转移。BI... 普通双元载体已被广泛应用于农杆菌介导的植物转化,但这类载体通常只能转移5-20 kb的外源DNA片段;而双元细菌人工染色体(BIBAC)载体可以弥补普通双元载体的不足,通过它已在烟草、番茄等双子叶植物中实现了大片段 DNA(150 kb)的转移。BIBAC载体在单子叶植物转化中的应用尚未见报道。由于单、双子叶植物间以及大、小片段转化间的转化体系存在明显差异,常规的农杆菌介导的水稻转化体系不能适应BIBAC系统转化的要求。因此,建立适于BIBAC 系统的水稻转化体系是十分必要的。通过比较不同的受体材料,不同的预培养、共培养条件,不同的去除农杆菌及选择阳性愈伤的方式等对转化效率的影响,建立了适合水稻BIBAC系统的转化体系。该体系的技术要点包括:以水稻品种H1493 为转化受体;以含毒性辅助质粒pCH32的LBA4404菌株(HP4404)为侵染菌株;预培养的培养基pH5.6;以N6A代替AAM 悬浮农杆菌:侵染菌液浓度为OD600=1.0;共培养温度为24℃;采用过渡(Resting)培养除去农杆菌;采用二步法进行选择等。基于PCR检测、Southern印迹分析的结果表明,BIBAC载体所携带的插入片段及标记基因已整合到转化植株的基因组中。这个体系的建立为在水稻中利用BIBAC系统进行大片段DNA转化奠定基础。 展开更多
关键词 水稻 农杆菌 双元细菌人染色体 植物大片段dna转化
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Agrobacterium-mediated transformation: state of the art and future prospect 被引量:1
5
作者 Wei Li Guangqin Guo Guochang Zheng 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2000年第17期1537-1546,共10页
Great progress has been made in recent years in studies on the mechanism of Agrobacterium-mediated transformation and its application. Many details of the key molecular events within the bacterial cells involved in T-... Great progress has been made in recent years in studies on the mechanism of Agrobacterium-mediated transformation and its application. Many details of the key molecular events within the bacterial cells involved in T-DNA transfer have been elucidated, and it is notable that some plant factors which were elusive before are purified and characterized. Vast kinds of species, which were either recalcitrant to or not included in the host range of Agrobacterium, can' now be transformed by this bacterium, and they include the very important cereal species, gymnosperms, yeast and many filamentous fungi. The simple in vivo transformation of tissue in intact plants and the 'agrolistic' methods to transform recalcitrant plants are the two novel technical achievements. Combined with other powerful techniques such as bacterial artificial chromosome, very large DNA fragment can be transformed into the plant genome by Agrobacterium. Further studies will elucidate more plant-encoded factors involved in T-DNA 展开更多
关键词 AGROBACTERIUM -mediated transformation FUNGI MONOCOTS large dna fragment.
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耐盐芦苇大片段BIBAC载体构建及水稻遗传转化 被引量:2
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作者 高鸿 马启林 +2 位作者 吴孚桂 刘慧芳 聂佳俊 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2021年第3期660-666,共7页
利用盐生植物的耐盐基因改良作物耐盐性是保障土壤盐渍化地区粮食生产和改良盐渍化土地的最经济最有效的途径。本研究以生长于西北盐盖上的一种耐盐野生芦苇为材料,制备了Mb级耐盐芦苇基因组DNA,酶切后经脉冲场凝胶电泳将其分离为不同... 利用盐生植物的耐盐基因改良作物耐盐性是保障土壤盐渍化地区粮食生产和改良盐渍化土地的最经济最有效的途径。本研究以生长于西北盐盖上的一种耐盐野生芦苇为材料,制备了Mb级耐盐芦苇基因组DNA,酶切后经脉冲场凝胶电泳将其分离为不同大小的大片段DNA区段,并与酶切回收的BIBAC-S载体进行连接,成功构建了耐盐芦苇不同大小的大片段DNA-BIBAC载体,经根癌农杆菌EHA105介导,成功地转化了粳稻品种‘中花11’成熟胚愈伤组织,获得了转基因水稻植株。研究表明,不同大小的大片段DNA-BIBAC载体在转化同一受体材料时,其所获得的愈伤转化率、植株转化率、转基因植株的阳性率等存在差异,说明插入片段的大小与转化效率之间存在关系。本研究为创制耐盐水稻新种质、克隆盐生植物的耐盐基因提供了理论和技术参考。 展开更多
关键词 水稻 芦苇 耐盐性 BIBAC 大片段dna转化
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基于转化相关重组克隆曲酸合成基因簇及其在黑曲霉中的异源整合表达
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作者 赵宇欣 谭宇洋 +3 位作者 高莹 朱柏松 张明怡 曹威 《微生物学通报》 CAS 2024年第10期4028-4042,共15页
【背景】黑曲霉(Aspergillus niger)是一种重要的丝状真菌底盘细胞,然而对其进行大片段DNA的遗传操作存在工具缺乏、效率低下的问题。海量基因组数据中存在大量未被鉴定的次级代谢产物合成基因簇,因相应DNA分子量大而难以克隆,大部分基... 【背景】黑曲霉(Aspergillus niger)是一种重要的丝状真菌底盘细胞,然而对其进行大片段DNA的遗传操作存在工具缺乏、效率低下的问题。海量基因组数据中存在大量未被鉴定的次级代谢产物合成基因簇,因相应DNA分子量大而难以克隆,大部分基因与产物分子之间的映射关系尚未被解析。【目的】开发一种适配黑曲霉的大片段DNA分子直接克隆的方法。以直接克隆米曲霉(Aspergillus oryzae)来源的曲酸合成基因簇(约30 kb)在黑曲霉底盘细胞中表达,实现曲酸的异源发酵。【方法】基于转化相关重组(transformation-associated recombination,TAR)克隆,构建适配黑曲霉转化的TAR捕获骨架载体pSEA-TAR;将曲酸合成基因簇上下游各1 kb同源DNA序列先后引入pSEA-TAR,中间以唯一的XhoⅠ相隔,得到曲酸合成基因簇捕获载体pSEA-KLR;随后,将NotⅠ/SbfⅠ消化后含有完整曲酸合成基因簇及上下游同源序列的米曲霉基因组与经XhoⅠ线性化的pSEA-KLR共同转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)VL6-48,通过营养缺陷筛选获得成功捕获曲酸合成基因簇的重组子,提取质粒,电转化大肠杆菌(Escherichia coli)扩增重组质粒;借助农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导黑曲霉转化,对获得的含有曲酸合成基因簇的黑曲霉转化子进行曲酸发酵,检测曲酸合成水平。【结果】获得了含有ARSH4/CEN6、TRP1、hph和LB/RB-T-DNA repeat的基于TAR克隆、适配黑曲霉表达的大片段DNA捕获载体pSEA-TAR。借助酿酒酵母高效的同源重组系统,通过同源重组获得含有曲酸合成基因簇的重组质粒pSEA-TAR-KA,捕获成功率为5.9%。对获得的含有曲酸合成基因簇的10株黑曲霉重组菌株KA1–KA10进行发酵分析发现均成功合成了曲酸,其中黑曲霉KA-2发酵7 d后曲酸水平最高,达到5.86 g/L。【结论】构建了适配黑曲霉的TAR克隆体系,用于大片段DNA高效捕获、重构和表达大型生物合成基因簇。以来源于米曲霉的曲酸合成基因簇捕获及在黑曲霉中成功实现曲酸合成验证了其有效性,进一步丰富了黑曲霉作为底盘细胞在重要化合物绿色生物制造中的作用。 展开更多
关键词 转化相关重组克隆 大片段dna 黑曲霉 曲酸合成基因簇
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酵母基因组大尺度遗传操纵工具研究进展 被引量:1
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作者 李杰奕 佟函泽 吴毅 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2465-2484,共20页
基因组大尺度遗传操纵是指对基因组大片段DNA的敲除、整合、易位等遗传改造。相较于小规模基因编辑,基因组大尺度遗传操纵可实现更多遗传信息的同步改造,对于探究多基因相互作用等复杂机制的理解有重要意义。同时,基因组大尺度遗传操纵... 基因组大尺度遗传操纵是指对基因组大片段DNA的敲除、整合、易位等遗传改造。相较于小规模基因编辑,基因组大尺度遗传操纵可实现更多遗传信息的同步改造,对于探究多基因相互作用等复杂机制的理解有重要意义。同时,基因组大尺度遗传操纵技术可对基因组开展更大规模的设计重构,甚至创建全新的基因组,在复杂功能重塑方面具有重要创新潜力。酵母是一种重要的真核模式生物,因其安全性和易于操作而被广泛应用。本文系统总结了酵母基因组大尺度遗传操纵的工具包,包括重组酶介导的大尺度操纵、核酸酶介导的大尺度操纵、从头合成大片段DNA以及其他大尺度操纵工具,介绍了它们的基本工作原理与典型应用案例。最后,对大尺度遗传操纵面临的挑战和发展进行了展望。 展开更多
关键词 遗传操纵 基因组工程 大片段dna 酵母 合成生物学
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