大白菜和油菜真空渗入遗传转化法初报

在携带ＣａＭＶＣａｂｂＢ－ＪＩ株系基因Ⅵ的根癌农杆菌菌种ＧＶ３１０１的介导下，对大白菜、油菜幼苗生理状态、真空渗入时间及不同处理部位和叶面造伤等的处理与遗传转化效果的关系进行了比较研究。结果表明，经自然春化后，大白菜、白菜型油菜植株长至４～５片叶，甘蓝型油菜、芥菜型油菜植株长至７～９片叶，花薹已抽出时，为真空渗入最适苗态。大白菜自然春化植株移栽缓苗（３ｄ），或者黑暗处理（８ｈ）均可显著提高其转化率。在吸力为１４．４ｍ３／ｈ的真空泵下处理１ｍｉｎ后，迅速打开真空泵气阀升压变常压，再关闭阀门抽真空３０ｓ的转化效果较好。仅处理叶片转化率可高达１１．２０％，叶面造伤处理对转化率没有明显影响。

基于真空渗入法的转基因大白菜植株的获得

采用真空渗入法,将萝卜VPE1基因的干扰载体pRNAi-RsVPE1转入大白菜中,共收获2 414粒种子,在质量浓度为30mg/L的卡那霉素筛选下获得抗性株297株,其中9株经PCR检测呈阳性,转化率为0.37%。Real-time PCR检测结果表明,pRNAi-RsVPE1的转入导致转基因大白菜叶片中同源的BraVPE在RNA水平上的表达量下降,验证了转基因植株的可靠性,为进一步深入研究BraVPE基因功能奠定了基础。