抗环斑病毒转基因番木瓜55-1的PCR检测

目的建立对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定的检测方法。方法采用改良十六烷基-三甲基-溴化铵(CTAB)法及试剂盒方法进行番木瓜基因组DNA提取,根据番木瓜管家Papain基因和抗环斑病毒转基因番木瓜55-1品系的外源结构基因(35S-GUS)和调控基因(NOS-35S)序列设计合成特异性检测引物,采用PCR技术对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定。结果内源Papain基因PCR扩增结果表明,改良CTAB法及试剂盒方法都可用于番木瓜种籽及果肉的DNA提取。实验中合成的引物及建立的PCR反应体系、反应参数能特异性地扩增转基因番木瓜55-1的外源基因35S-GUS序列和NOS-35S序列。该方法的绝对检测低限为8.15×10-2ng,相对检测低限为0.14%。结论本检测方法有较高的稳定性,能有效地对转基因番木瓜55-1进行品系鉴定,该方法的检测灵敏度可完全满足转基因食品标识管理定性检测的需要。

转基因番木瓜55-1的多重PCR鉴定方法研究

目的:建立对转基因番木瓜55-1进行品系鉴定的多重PCR检测方法。方法:根据番木瓜管家Papain基因和转基因番木瓜55-1品系的外源结构基因(35S-GUS)和调控基因(NOS)序列设计合成特异性检测引物。采用多重PCR技术对转基因番木瓜55-1进行品系鉴定。结果:本研究建立的多重PCR反应体系、反应参数能特异性地同时扩增转基因番木瓜55-1的管家基因Papain、外源结构基因35S-GUS和调控基因NOS序列。其中针对管家基因和外源结构基因的双重PCR检测方法的绝对检测低限为0.14 ng,其相对检测低限为0.14%;三重PCR检测方法的绝对检测低限为1.56 ng,其相对检测低限为1.56%。结论:本检测方法有较高稳定性,能快速准确地对转基因番木瓜55-1进行品系鉴定,该方法的检测灵敏度可基本上满足转基因食品标识管理定性检测的需要。

转基因番木瓜55-1品系的环介导等温扩增检测方法的建立

根据55-1的品系特异性序列设计了5套LAMP引物,筛选扩增效率高的引物。对筛选到的LAMP引物的反应温度和反应体系进行了优化,并进行了特异性、灵敏度和稳定性的实验。结果表明,该套LAMP引物的特异性和稳定性良好,灵敏度为0.05%,最快能在30 min内得到检测结果。建立的LAMP检测方法能有效地检测转基因番木瓜55-1品系,既简化了检测步骤,又缩短了检测时间,为转基因番木瓜的快速检测提供了技术支撑。