金雀根对类风湿性关节炎动物模型免疫调节作用的研究

目的探讨金雀根药物在治疗类风湿关节炎中的免疫作用。方法用昆明小鼠建立Ⅱ型胶原诱导关节炎模型,设正常组、模型组、金雀根高、中、低剂量组、雷公藤多甙片组,进行对CIA小鼠T淋巴细胞增殖和黏附能力、原代滑膜细胞增殖能力,培养上清液细胞因子对CIA小鼠脾细胞MMP2、TIMP-2表达的影响的观察。结果金雀根高、中剂量组在RPMI-1640培养液中及ConA刺激下,脾细胞刺激指数、脾细胞粘附Ⅱ型胶原水平、致敏脾T淋巴细胞黏附能力黏附百分数、原代滑膜细胞增殖能力、滑膜细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α水平明显低于模型组,与模型组相比,有显著性差异;并且可降低小鼠脾细胞MMP-2表达,升高小鼠脾细胞TIMP-2表达。结论金雀根具有免疫调节治疗类风湿性关节炎的作用。作为传统药物,金雀根临床效果较好,副作用小。

微波辅助提取木豆根中染料木素工艺

以木豆根为原料,利用微波辅助提取技术进行提取,在单因素实验的基础上对提取条件进行了考察,根据BBD(Box-Behnken design)实验设计原理,采用3因素3水平的响应面分析法,以木豆根中主要异黄酮染料木素(genistein)为指标,对提取过程进行优化,得到最佳工艺参数为:提取温度为68℃,固液比为32∶1 mL.g-1,乙醇浓度为78%,提取功率700 W,提取时间15 min。在最佳提取条件下染料木素的提取率可达到0.465±0.032 mg.g-1。本研究对于微波提取技术的应用及木豆根的开发和利用都具有显著的意义。

金雀异黄素通过下调HDAC6减轻LPS诱导的大鼠背根神经节神经元炎性损伤

目的:神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)是一种由躯体感觉神经病变或疾病引起的慢性疼痛,金雀异黄素(genistein,Gen)可能是治疗NP的潜在药物。因此,本研究旨在探讨Gen对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠背根神经节神经元(dorsal root ganglion neuron,DRGn)炎性损伤的作用及其可能的分子机制。方法:取出生1 d的幼年大鼠进行DRGn的分离和培养。取对数生长期的DRGn,分为8组:对照组、LPS组、Tubastatin A盐酸盐(tubastatin A hydrochloride,TSA)+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组、Gen2+TSA+LPS组、Gen2+pcDNA-组蛋白脱乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)+LPS组、Gen2+pcDNA3.1+LPS组。LPS组给予1μg/mL LPS处理24 h;TSA+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组给予5μmol/L TSA、5μmol/L Gen、10μmol/L Gen预处理0.5 h后加入1μg/mL LPS处理24 h;Gen2+TSA+LPS组给予10μmol/L Gen和5μmol/L TSA共同预处理0.5 h后加入1μg/mL LPS处理24 h;Gen2+pcDNA-HDAC6+LPS组、Gen2+pcDNA3.1+LPS组将100 nmol/L pcDNA-HDAC6、pcDNA3.1质粒分别转染至DRGn,转染24 h后,给予10μmol/L Gen预处理0.5 h,再加入1μg/mL LPS处理24 h。采用real-time RT-PCR检测DRGn中HDAC6 mRNA的表达水平,CCK-8法检测DRGn活力,流式细胞术检测DRGn凋亡情况,ELISA检测DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平;蛋白质印迹法检测DRGn中HDAC6、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、NF-κB p65的蛋白质表达水平。结果:与对照组相比,LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平,TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著上调,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著增加,DRGn活性显著降低且凋亡率显著升高,DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(均P<0.05)。与LPS组相比,TSA+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组和Gen2+TSA+LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平,TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著下调,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著降低,DRGn活性显著升高且凋亡率显著降低,DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(均P<0.05),且Gen2+TSA+LPS组上述变化最明显。与Gen2+LPS组相比,Gen2+pcDNA-HDAC6+LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平,TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著上调,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著增加,DRGn活性显著降低且凋亡率显著升高,DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(均P<0.05)。结论:Gen可减轻LPS诱导的大鼠DRGn炎性损伤,其作用机制可能与下调HDAC6的表达,进一步抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活有关。

HPLC法同时测定金鸡虎补丸中的去氢二异丁香酚、五味子甲素、染料木素和芒柄花素

目的建立HPLC法同时测定金鸡虎补丸中去氢二异丁香酚、五味子甲素、染料木素和芒柄花素4种成分。方法金鸡虎补丸70%乙醇提取液的分析采用C18色谱柱（200mm×4.6mm,5μm）;流动相A为乙腈-甲醇（3∶2）,流动相B为0.1%H3PO4溶液,梯度洗脱;体积流量为0.9mL/min;去氢二异丁香酚检测波长为270nm,五味子甲素、染料木素和芒柄花素均为254nm;柱温为35℃;进样量20μL。结果被测定的4组成分色谱峰均有良好的分离度,方法精密度、重复性的RSD均小于2.0%;在室温条件下24h内稳定;各组分线性范围较宽,线性关系良好（r≥0.999 4）;平均加样回收率为96.8%-98.1%,RSD（n=6）≤1.4%。结论金鸡虎补丸的提取方法和流动相保证了分析方法的简单易行、重复性好、准确可靠。

茉莉酸甲酯对木豆不定根染料木素含量及抗氧化系统影响

为探讨茉莉酸甲酯(Methyl Jasmonate,MJ)对木豆不定根影响,研究了茉莉酸甲酯的不同浓度及处理时间对木豆不定根中染料木素的含量及抗氧化系统的影响。研究结果表明,诱导子的浓度和处理时间对不定根中染料木素的含量有重要影响。在MJ浓度为100μmol·L^(-1),处理时间为48 h时,染料木素的含量最高,为1.38 mg·g^(-1),是对照组的4.03倍。在此基础上,研究了100μmol·L^(-1)的MJ处理对木豆不定根抗氧化系统的影响,结果表明,MJ处理的木豆不定根明显发生了氧化胁迫,O_2^-速率、H_2O_2和MDA含量明显升高,同时不定根中SOD和POD活性明显升高,但是抗氧化酶活性的提高并未消除不定根的氧化胁迫,这种氧化胁迫导致了木豆不定根次生代谢产物合成能力提高。

星点设计-效应面法优化壮药千斤拔提取工艺

目的:采用星点设计-效应面法优化千斤拔的回流提取工艺。方法:以乙醇浓度、提取时间和溶媒比为自变量,以染料木苷、染料木素和浸膏等的收率为因变量,通过对自变量的总评归一值进行多元线性回归和二项式拟合,采用效应面优化最佳的工艺条件。结果:各指标的二项式拟合方程均优于多元线性回归方程,确定回流提取工艺条件为乙醇浓度(X1)为60%～80%,溶媒比(X2)为24～26倍,提取时间(X3)为180～240 min,提取次数是2次。工艺验证的总评归一预测值与实际值的偏差为-7.2%,二项式拟合的复相关系数R=0.9343。结论:采用星点设计-效应面法优选方法优化的染料木苷和染料木素提取工艺,方法简便、预测性良好。

大叶千斤拔根、茎的HPLC指纹图谱及成分差异研究

目的:为了研究大叶千斤拔根、茎的化学成分差异,首先建立大叶千斤拔根的HPLC指纹图谱,对根、茎的成分差异进行定性分析;其次,针对二者共有成分染料木苷、6″-O-丙二酰染料木苷、染料木素建立含量测定方法,进行定量评价。方法:采用Agilent Zorbax SB-phenyl(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.5%乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长260 nm;采用中药指纹图谱相似度评价系统(2.0版)进行相似度评价;对3个成分的含量测定结果,采用SPSS(16.0)软件t检验分析,确定区分根、茎的指标成分。结果:11批根的图谱相似度为0.919~0.984,7批茎的图谱相似度为0.638~0.848;染料木苷、6″-O-丙二酰染料木苷、染料木素3个成分的含量在根中分别为0.64~1.30、0.62~1.21、0.13~0.47 mg·g^-1,在茎中分别为0.07~0.31、0.14~1.00、0.10~0.28 mg·g^-1。结论:大叶千斤拔根、茎的化学成分存在一定差异,染料木苷、6″-O-丙二酰染料木苷、染料木素3个成分总量可用于大叶千斤拔根的质量控制,染料木苷含量或染料木苷与染料木素的含量比值可作为区分根、茎的指标。

金雀根二苯乙烯有效部位纯化工艺研究

目的:用两相溶剂萃取法从金雀根提取物中纯化二苯乙烯有效部位,对其工艺条件及参数进行考察,优选出最佳纯化工艺。方法:以二苯乙烯有效成分carasinol B,kobophenol A,(+)-α-viniferin在萃取物中的含量及萃取保留率为指标,对萃取原液的浓度、乙酸乙酯用量、萃取次数、萃取时间进行考察。通过单因素考察结合正交试验优选最佳纯化工艺。结果:最佳纯化工艺为:萃取原液浓度为0.25 g·m L-1,乙酸乙酯用量为1倍原液量,萃取2次,每次20 min。得到的3批萃取物有效成分含量平均为69.18%,保留率为85.21%。结论:该纯化工艺合理可行,可用于金雀根中二苯乙烯有效部位的纯化。