The detailed anti-tumor mechanisms of daphnanetype diterpenoids from Genkwa flos

Genkwa flos is a well-known traditional Chinese medicine, which exhibits abundant biological activities such as antiinflammatory, analgesic, immunoregulatory activities and anti-rheumatic arthritis activity. Recent pharmacological studies showed that Genkwa flos might also have the antitumor effect. Daphnane-type diterpenoids (DDs) are one of the main anti-tumor constitutions in Genkwa flos. However, the underlying anticancer molecular mechanisms of this type of compounds are still unclear. This review aims to give a systematic summary of DDs from Genkwa flos to better understand the anti-tumor activitiy by focusing on cell arrest, apoptosis, topoisomerase inhibition, melanin inhibition and the reverse of multi-drug-resistance (MDR). In addition, we are also going to make an overview of the mechanisms identified up to now. The significant findings may provide that DDs in Genkwa flos is a promising targeted-cancer agent.

基于HPLC法及UPLC-MS法测定芫花饮片炮制前后7种成分的含量变化

目的:建立HPLC法及UPLC-MS法测定芫花中银椴苷、木犀草素、芹菜素、绿原酸、羟基芫花素、芫花素及芫花酯甲7种化学成分含量的方法,分析芫花炮制前后化学成分的变化。方法:采用HPLC法,测定银椴苷、木犀草素、芹菜素、绿原酸、羟基芫花素和芫花素6种成分的含量,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸(B)梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),进样量10μL。同时采用UPLC-MS方法测定芫花酯甲的含量,色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3 C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸(B)梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,柱温35℃,进样量1μL。结果:7种成分的含量由高到低依次为芫花素>绿原酸>银椴苷>芹菜素>羟基芫花素>木犀草素>芫花酯甲。芫花炮制后7种成分的含量均发生一定程度的变化,其中绿原酸成分在炮制后含量有升高有降低,变化不明显;对于银椴苷和芹菜素成分,炮制后含量降低;对于木犀草素、羟基芫花素和芫花素3个成分,炮制后含量升高;对于芫花酯甲成分,炮制后含量降低。结论:该方法简便、灵敏、高效,为考察芫花饮片炮制前后的质量变化提供了技术支持。

基于网络药理学和分子对接探讨中药芫花治疗原发性痛经的作用机制

通过网络药理学和分子对接技术预测芫花治疗原发性痛经的功效物质基础及其潜在的作用机制。基于TCMSP数据库预测获得芫花的活性成分和作用靶点,同时借助DisGeNET等数据库获得与原发性痛经相关的靶点,基于获得的芫花与原发性痛经的交集靶点,使用STRING数据库构建交集靶点蛋白互作网络,并采用Cytoscape3.7.2构建芫花–活性成分–靶点–原发性痛经网络。采用DAVID数据库进行基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,利用Autodock tools将核心靶点与对应的活性成分进行分子对接。结果表明,中药芫花治疗原发性痛经的核心活性成分为芫花素、柚皮素、7-羟基-6-甲氧基-3,7’-双香豆素、龙胆山酮酚、羟基芫花素、山奈酚、木犀草素、谷甾醇、羟光刺苞菊内酯;关键靶点包括ESR1、PTGS1、PTGS2、GSTM1、CYP1A1、OPRM1、NTRK2和NR1H2;涉及的生物学过程主要与老化、一氧化氮生物合成过程的正向调节、细胞质和ATP酶结合等有关;KEGG通路主要富集在癌症的发病途径、化学致癌作用–受体激活、化学致癌作用-DNA加合物等。此外,分子对接显示核心活性成分芫花素与关键靶点蛋白之间的对接能量值均小于–7.0kcal·mol–1,具有强烈的结合活性,能形成稳定的结构构象。运用网络药理学和分子对接方法从“中药–成分–靶点–疾病”的思路初步探究芫花治疗原发性痛经的活性物质基础,为深入研究该类成分治疗痛经的作用机制奠定基础。

芫花花蕾中一个新的瑞香烷二萜类化合物

为了研究中药芫花(Daphne genkwa)的干燥花蕾化学成分及其抑制皮肤病原真菌活性,采用正相硅胶及半制备HPLC等多种色谱技术对芫花花蕾95%乙醇提取物进行分离纯化得到2个瑞香烷型二萜类化合物,并通过MS、NMR和ECD等波谱技术和文献数据比对鉴定化合物结构,分别为daphgenin A(1)和yuanhuakine B(2),其中化合物1为新的瑞香烷型二萜类化合物。同时,结合MIC法测定该化合物对皮肤真菌犬小孢子菌、红色毛癣菌、须癣毛癣菌和马拉色菌的抑制活性,结果表明化合物1和2对皮肤病原真菌有一定的抑制活性,化合物1对红色毛癣菌和须癣毛癣菌的抑制活性与阳性对照组相当(MIC值4.0μg/mL),化合物2对红色毛癣菌显示显著的抑制活性,其MIC值为2.0μg/mL。

基于物质基础探析十八反中“藻戟遂芫俱战草”配伍禁忌

目的基于物质基础探析十八反中“藻戟遂芫俱战草”配伍禁忌,为完善中药配伍禁忌理论和指导临床应用提供依据。方法通过检索近年来国内外文献,从物质基础角度分析“藻戟遂芫俱战草”甘草组反药组合配伍前后物质基础变化和其对毒效作用的影响。结果海藻、大戟、甘遂、芫花与甘草配伍对反药组合的毒、效成分溶出有影响,配伍后,可能通过促进毒性成分溶出、抑制毒性成分代谢、抑制有效成分溶出、产生新的物质、破坏物质结构等途径产生增毒减效的“毒”或增效减毒的“效”作用。结论甘草组反药组合并非绝对的配伍禁忌,还需继续基于物质基础,结合药物毒理基因组学和代谢组学等方法及高效技术进行研究。

芫花种子胚根细胞的超微结构观察

利用透射电镜观察了4～7周芫花(Daphne genkwa)种子的胚根细胞超微结构。结果表明,芫花种子的胚根细胞呈不规则长方形或多边形;整个发育期内,内质网数量无明显变化,线粒体先增加后减少,细胞核变小,淀粉和脂肪含量增加;胚根发育为具有贮藏功能的组织。

炮制对芫花毒性和药效的影响

芫花为毒性较强的中药，为保证临床用药安全有效，须炮制后供用。本文探讨炮制对芫花毒性和药效的影响。结果表明：醋炙品毒性较小，利尿作用较强。芫花素及其模拟醋炙品均有镇咳祛痰作用，作用强度二者无显著差异。芫花酯甲及其模拟醋炙品１∶１×１０－５～１×１０－６浓度均可引起离体子宫及肠管收缩，但二者作用强度未见明显差异。对未孕大鼠及妊娠子宫作用比较。

芫花条中抗炎活性成分

目的:对芫花条的抗炎活性成分进行研究。方法:采用药理活性追踪下的化学成分分离手段,从芫花条中发现抗炎活性成分。药理实验采用二甲苯致小鼠耳肿胀药理模型。运用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱等方法对芫花乙醇提取物的石油醚及氯仿萃取部分进行化学成分研究,并利用UV、IR、1HNMR、13CNMR、MS等光谱技术鉴定其化学结构。结果:从芫花条中分离得到了19个化合物,分别鉴定为十六烷酸1-甘油酯(1)、β-谷甾醇(2)、咖啡酸正二十烷酯(3)、咖啡酸正二十二烷酯(4)、咖啡酸正十八烷酯(5)、胡萝卜苷(6)、芫花素(7)、木犀草素(8)、(+)落叶松脂醇(9)、芹菜素(10)、山柰酚(11)、瑞香黄烷素B(12)、染料木素(13)、二氢山柰酚(14)、对羟基苯甲酸(15)、槲皮素(16)、丁香苷(17)、丁香醛(18)、对羟基苯甲酸乙酯(19)。结论:化合物1、3～5、7、15、17～19为首次从芫花条中分离得到。芫花条乙醇提物的石油醚萃取部位高剂量组(400mg/kg)、氯仿萃取部位高剂量组(200mg/kg)及咖啡酸正二十二烷酯对二甲苯致小鼠耳肿胀有显著的抑制作用。

甘草与芫花对P-糖蛋白底物罗丹明123经空肠黏膜透过性的影响

目的:观察甘草与芫花合用前后对P-糖蛋白(P-gp)的调控作用,探讨甘草、芫花及其合用影响药物经胃肠道渗透的可能作用机制。方法:将25只Wistar大鼠分为5组,分别给大鼠口服甘草液、芫花液、甘草芫花合煎液、合并液以及生理盐水,1周后用体外扩散池法(ussing chamber)评价各种药液对罗丹明123(R123)和荧光素钠(CF)经空肠黏膜透过性的影响,用荧光分光光度法测定R123和CF的浓度,并分析各组表观渗透系数(Papp)差异。结果:4种药液均具有增加R123经吸收方向的透过性,与生理盐水组比较,P<0.05,且芫花液、合煎液以及合并液还可减少分泌方向的透过(P<0.05,与生理盐水组比较),甘草对分泌方向透过影响无统计学意义。甘草对CF透过无影响,而其他3组药液则可减少CF吸收和分泌方向的透过性。结论:甘草和芫花对P-gp均有抑制作用,但后者作用较强。芫花某些化学成分抑制P-gp,而另一些成分可能使细胞之间紧密连接加强,引起旁细胞途径药物CF渗透的降低。甘草与芫花合用后对P-gp抑制作用增强,可能是甘草对芫花有协同作用,使一些毒性成分吸收增加,这可能是两者配伍产生毒性的机制之一。

GC法同时测定芫花中棕榈酸与亚油酸的含量

目的建立同时测定芫花药材中棕榈酸和亚油酸含量的气相色谱分析方法。方法采用毛细管气相色谱法,甲酯化后测定芫花中棕榈酸与亚油酸的含量。采用DB-17石英毛细管柱（30 m×0.25 mm,0.25μm）;氢火焰离子化检测器（FID）;程序升温：起始温度180℃,以5℃.min-1升至230℃;进样口温度：250℃;检测器温度：270℃;载气为氮气,流速：1.2 mL·min^-1;分流比为20∶1。结果棕榈酸甲酯和亚油酸甲酯的质量浓度分别在0.079-1.578 g.L-1（r=0.999 6）和0.029~0.590 g.L-1（r=0.999 7）内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率（n=9）分别为98.1%（RSD=2.7%）和99.7%（RSD=2.8%）。结论本方法简便、快速、准确,为芫花的质量控制方法提供依据。

芫花的化学成分及药理作用研究进展

目的对芫花的化学成分及其药理作用的研究进展作一综述,提供有关芫花研究的相对较为全面的借鉴资料。方法查阅国内外公开发表的文献28篇,对从芫花中得到的多种化学成分及其药理作用进行论述。结果芫花中主要含有黄酮、香豆素等酚苷类成分及二萜原酸酯类、绿原酸类成分。在镇痛抗炎、抗白血病、抗肿瘤、妊娠中期引产、杀虫等方面有较好疗效。结论为芜花的进一步研究提供了依据。

芫花药材质量标准研究

目的:对17批芫花药材样品进行定性定量试验研究,提高芫花药材质量标准。方法:采用薄层色谱法鉴别芫花药材中芫花素成分;以高效液相色谱法测定其含量并制定限度要求,色谱柱为 Kromasil C_(18)(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(65:35:0.5),流速为0.8 mL·min^(-1),柱温为40℃,检测波长为338 nm。结果:芫花药材中芫花素的薄层色谱鉴别特征明显,专属性强;芫花药材中芫花素的含量测定线性范围为0.086～0.432 μg(r=0.9998),平均回收率(n=5)为100.4%(RSD=2.4%),测得芫花药材中芫花素含量不低于0.2%。结论:本方法简单准确地对芫化药材的有效成分芜花素进行定性定量测定,为提高芫花药材的质控方法提供了实验数据,对于保证其质量和临床疗效具有重要的意义。

芫花乙醇粗提物对菜粉蝶幼虫消化酶系的影响

菜粉蝶 (Pierisrapae)幼虫取食芫花粗提物 2 4h后 ,中肠淀粉酶、蛋白酶、酯酶、转化酶的活力增强 ,其中肠组织中淀粉酶及肠腔中蛋白酶活力增强的程度达显著水平 ;粗提物使海藻糖酶活力下降 ,差异达显著水平。石蜡切片表明 ,芫花引起细胞核向肠腔内侧移动 ,围食膜逐渐消失 ,肠壁细胞中的空泡显著增多、增大 ,肠组织结构变得没有层次性。电镜观察表明 ,芫花粗提物处理 2 4h后 ,引起细胞内粗糙内质网上的核糖体数量明显增多 ,线粒体内嵴开始模糊、肿胀。因而认为 ,粗提物刺激肠组织超量分泌消化酶 ,加之抑食作用使取食量减少 ,导致体重减轻 。

甘草与大戟、甘遂、芫花的反药组合对大鼠离体回肠运动的影响

目的从离体回肠运动的角度,探讨中药"十八反"中甘草与大戟、甘遂、芫花存在配伍禁忌的科学依据。方法制作大鼠离体回肠模型,以回肠收缩张力为指标,观察不同浓度的甘草与大戟、甘遂、芫花的单煎液、合并液、合煎液对大鼠离体回肠运动的影响。结果甘草单煎液呈现抑制回肠收缩作用,而大戟、甘遂、芫花各单煎液则表现为不同程度促进回肠收缩作用;甘草分别与大戟、甘遂、芫花合并给药后,可减弱后者促进回肠收缩的作用;各合煎液促进回肠收缩的作用均弱于其单煎液,其中甘草-甘遂合煎液的作用弱于其合并液,而甘草-大戟合煎液与甘草-芫花合煎液强于其合并液。结论甘草与大戟、甘遂、芫花合用后能显著抑制后者促进回肠收缩作用,从该角度探讨和揭示了甘草与具有峻下逐水功效的各药物存在配伍禁忌的作用特点与机制。

芫花中芫花素的提取工艺与杀虫试验

The effective insecticide component of natural growth Daphne genkwa Sieb.et Zucc.was extracted.The obtained material was preliminarily proved to have a favorable insecticidal effect by nonstandard insecticidal experiments,which used Chinese blister beetle.The effective component was determined as 5,4’-dihydroxy-7-methoxylflavone by UV,NMR and chemical methods.

中药芫花总黄酮含量测定方法研究

目的建立芫花总黄酮的含量测定方法。方法采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法、AlCl3显色法、盐酸-镁粉显色法等3种不同的显色方法测定芫花总黄酮含量。结果采用盐酸-镁粉显色法,以芹菜素为对照品,线性范围为33.6～201.6μg(r=0.999 8),平均回收率为98.57%,相对标准偏差为0.78%(n=9)。结论 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法和AlCl3法不能用于芫花总黄酮的测定;盐酸-镁粉显色法准确度、精密度高、重复性好,是芫花总黄酮定量分析的合理方法。

HPLC法分析炮制对芫花中芫花素的影响

用HPLC法分析了芫花各种炮制品中芫花素的含量变化。结果表明:芫花经不同方法炮制后芫花素的含量均有所降低,以醋炙降低最少。并对各大区芫花饮片的芫花素含量进行了定量分析,为制订芫花饮片的质量标准提供了实验依据。

荆花胃康胶丸对溃疡大鼠胃黏膜NO,NOS和ET含量的影响

目的:观察荆花胃康胶丸对溃疡大鼠胃黏膜内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)含量的影响。方法:采用Okabe氏法造成大鼠胃溃疡模型,随机将模型动物分为蒸馏水对照组、荆花胃康胶丸30,20, 10 mg·kg^(-1)·d^(-1)组、硫糖铝10 mg·kg^(-1)·d^(-1)及法莫替丁5 mg·kg^(-1)·d^(-1)组,每组8只。各组均灌胃给药,qd,连续10 d。末次给药后次日,测定各组溃疡面积,并测定溃疡周围组织NO,NOS及ET含量。结果:与对照组相比,荆花胃康胶丸30,20,10 mg·kg^(-1)·d^(-1)组的溃疡面积显著降低,溃疡周围组织NO及NOS的含量明显增高,ET的含量明显降低(P＜0．01),且呈现剂量依赖性;荆花胃康胶丸30 mg·kg^(-1)·d^(-1)组的保护作用优于硫糖铝及法莫替丁组(P＜0．05)。结论:荆花胃康胶丸可能通过增加胃溃疡组织NO及NOS的含量及降低ET的含量来发挥胃黏膜修复作用。

芫花花蕾化学成分的分离与鉴定

目的对中药生品芫花(Daphne genkwaSieb.et Zucc.)花蕾中的化学成分进行研究。方法运用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱、ODS柱色谱、制备HPLC、重结晶等分离手段进行化学成分的分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定其结构。结果从芫花花蕾体积分数95%乙醇提取物中分离得到10个化合物。分别鉴定为8-甲氧基山奈酚(8-methoxykaempferol,1)、柚皮素(naringenin,2)、芫花素(genkwanin,3)、5,4′-二羟基-7,3′-二甲氧基黄酮(velutin,4)、芫花素-5-O-β-D-葡萄糖苷(genkwanin-5-O-β-D-glucoside,5)、芫花素-5-O-β-D-茜黄樱草糖苷(genkwanin-O-β-D-pri-meveroside,6)、(-)-松脂素((-)-pinoresinol,7)、(-)-落叶松脂素((-)-lariciresinol,8)、(-)-双氢芝麻脂素((-)-dihydrosesamin,9)、瑞香烷型二萜酯-7(daphnane-type diterpene ester-7,10)。结论化合物1为首次从瑞香属植物中分离得到,化合物2,9,10为首次从芫花中分离得到。

芫花杀虫活性成分的结构鉴定

芫花乙醇粗提物经石油醚及氯仿萃取 ,萃取物经柱层析、薄层层析和生测后分别获得较纯组分 .以这两种组分进行结构鉴定及返回生物测定 (试虫卫矛尺蠖 Abraxes miranda) ,结果证明 ,β-谷甾醇是芫花中具有强烈拒食活性的组分之一 .这两个组分中均有雪松醇 ,其杀虫活性有待于进一步研究证实 .