HPLC-ELSD法联合UPLC-MS/MS法检测鱼腥草注射液中非法添加的庆大霉素

为检测鱼腥草注射液中非法添加的庆大霉素,建立了以HPLC-ELSD进行初筛,UPLCMS/MS进行确证并定量的系统方法。十八烷基键合硅胶为填充剂,0.2mol/L三氟醋酸-甲醇(92∶8)流动相作为HPLC-ELSD初筛条件。以0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液(10∶90)为流动相,流速0.3mL/min,在电喷雾离子化电离源上以多反应监测方式进行正离子检测,建立UPLC-MS/MS检测方法,用于定量分析的离子对为m/z478.6→157.1(庆大霉素C_1)。结果表明,庆大霉素C_1在0.15~1.35μg/mL浓度范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,线性方程为y=5519.3x+879.24,R=0.9965。庆大霉素C_1在鱼腥草注射液中检测限为0.15g/L。

荧光素二聚体荧光探针测定硫酸庆大霉素的同步荧光光谱研究

基于荧光素二聚体与硫酸庆大霉素通过电荷作用而产生荧光信号变化,建立了以荧光素二聚体为荧光探针,用固定波长同步荧光光谱技术测定硫酸庆大霉素的新方法。结果表明,在△λ=30nm,最优条件下,测定硫酸庆大霉素的线性范围为0.5～25.0μg/mL,检测限(3σ/K)为6.0×10-8g/mL。用于实际样品分析,测定回收率为100.2%～101.0%,相对标准偏差为1.3%～2.1%。

牛奶中庆大霉素半定量胶体金试纸条的研制

先将庆大霉素与载体蛋白偶联形成完全抗原,再与庆大霉素单克隆抗体反应制备试剂条。通过抗原抗体之间的免疫反应,采用胶体金检测方法,将抗原按不同浓度喷制两条检测线,使牛奶中庆大霉素检测灵敏度分别为20μg/kg和100μg/kg,该检测限满足我国及欧盟对庆大霉素检测的要求,并且能够实现牛奶样品中庆大霉素现场快速检测。

荷移-紫外分光光度法测定硫酸庆大霉素含量

利用硫酸庆大霉素与四氯苯醌在水溶液中发生电荷转移反应,建立了简单快速测定硫酸庆大霉素含量的荷移紫外分光光度法。荷移络合物在波长342 nm处有最大吸收,该荷移衍生物的吸光度与硫酸庆大霉素浓度在0.1~3 mg/m 范围内吸光度和浓度呈现良好线性关系y=0.1652x+0.3054,R^2=0.9996,平均加样回收率为100.81%,RSD为2.55%。该方法简便、准确、重现性好,适用于硫酸庆大霉素的快速测定。

庆大霉素通过调节大鼠慢性炎症控制高脂饮食对高血压的影响

目的探讨高脂喂食对大鼠内毒素、炎症因子和血压水平的影响及硫酸庆大霉素对其干预结果的观察。方法给予8周龄雄性SD大鼠适应性喂养1周后,分为对照组(普通饲料喂养)11只,高脂组(高脂饲料喂养)13只和庆大霉素组(高脂饲料喂养)13只,测得三组大鼠血压值作为基线水平,饲养4周,第5周开始每周监测大鼠血压,第9周开始,庆大霉素组给予硫酸庆大霉素灌胃干预,对照组和高脂组给予等量生理盐水灌胃。第13周结束,处死各组大鼠,检测大鼠血浆内毒素、IL-1β(白介素1β)浓度,检测大鼠血浆葡萄糖浓度、胰岛素浓度,用稳态模型评估胰岛素抵抗指数。结果实验初始收缩压对照组为(96.09±3.51)mmHg;高脂组为(93.28±4.12)mmHg;庆大霉素组为(92.30±6.26)mmHg,三组大鼠收缩压基线水平一致(P>0.05)。实验结束时高脂组大鼠收缩压(140.89±11.42)mmHg显著高于对照组(99.62±11.27)mmHg和庆大霉素组(94.64±9.59)mmHg,差异均有统计学意义(P<0.05),而对照组和庆大霉素组收缩压水平一致(P>0.05)。从实验初始至结束各组大鼠体质量每周行横向比较(P<0.05)。实验结束时庆大霉素组中的血浆内毒素浓度(0.10±0.02)EU/mL显著低于高脂组(0.14±0.02)EU/mL、显著高于对照组(0.07±0.01)EU/mL(P<0.05)。庆大霉素组中的IL-1β浓度(106.6±34.84)ng/mL显著低于高脂组(265.63±71.53)ng/mL(P<0.05),与对照组(90.90±26.67)ng/mL相比(P>0.05)。高脂组(1.24±0.19)mmol/L和庆大霉素组(1.27±0.30)mmol/l血浆总胆固醇水平均高于对照组(0.88±0.09)mmol/L(P<0.05),而高脂组和庆大霉素组胆固醇水平一致(P>0.05),庆大霉素组(0.43±0.13)mmol/L血浆低密度脂蛋白显著高于对照组(0.30±0.07)mmol/L(P<0.05)。庆大霉素组中的胰岛素抵抗(1.77±0.33)显著低于对照组(3.50±0.73)和高脂组(3.44±1.61)(P<0.05),而对照组和高脂组胰岛素抵抗水平一致(P>0.05)。结论高脂(高甘油三酯)喂食可导致大鼠收缩压升高、血浆内毒素和IL-1β水平增加,硫酸庆大霉素灌胃干预可能通过缓解机体低度炎症改善血压异常。高脂饲料喂养法建立的动物模型适合应用于建立单纯性高胆固醇血症,并不能建立肥胖大鼠模型。

重组大鼠肝再生增强因子对肾小管上皮细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨重组大鼠肝再生增强因子(rrALR)对体外培养的肾小管上皮细胞增殖 及凋亡的影响。方法 将体外培养的人肾小管上皮细胞株(HK2)分组,分别加入不同浓度的庆 大霉素(GM)或(和)rrALR,3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测HK2细胞的增殖;吖啶橙／溴 乙啶(AO／EB)染色和钙磷脂结合蛋白／碘化丙啶(annexin V／PI)双标记流式细胞术检测上述各 组HK2细胞的凋亡。结果 (1)rrALR对常规培养条件下的HK2细胞有直接的促增殖作用,并 具有量效关系(在25 ng／ml-50μg／ml的浓度范围内逐渐增强,P<0．01)和时效关系(培养12 h 即有该作用,48 h达到高峰,以后逐渐下降,P<0．05);(2)rrALR能够促进GM损伤后的HK2细 胞增殖,有明显剂量依赖性(P<0．05);(3)rrALR呈剂量依赖性抑制GM诱导的HK2细胞凋亡 (P<0．01)。结论 rrALR能够促进体外常规培养和GM损伤后的肾小管上皮细胞增殖,抑制 GM诱导的小管上皮细胞凋亡,提示ALR可能对小管上皮细胞的中毒性损伤有改善作用。

载银与载庆大霉素硅灰石涂层体外抗菌性能的对比研究

目的制备具有长效药物缓释效果的骨科抗菌植入材料表面涂层。方法采用等离子体喷涂技术在钛合金表面沉积硅灰石涂层。一组试样在浓度为重量百分率5％的硝酸银溶液中浸泡24h获得载银硅灰石涂层，另一组试样通过与装载庆大霉素的胶原溶液发生接枝反应制得载庆大霉素硅灰石涂层。两种涂层的性能通过抗菌剂体外溶液释放实验、抗金黄色葡萄球菌的抑菌环实验和成骨细胞接触培养毒性实验进行表征。结果成功制备载银与载庆大霉素硅灰石涂层。载银硅灰石涂层均匀释放银离子达50d；涂层抗金黄色葡萄球菌能力可维持40d以上。载庆大霉素硅灰石涂层呈爆发性释放庆大霉素，涂层抗金黄色葡萄球菌能力可以维持18d。两种涂层均不影响成骨细胞在其表面的黏附、增殖以及碱性磷酸酶活性的表达。结论载银硅灰石涂层与载庆大霉素硅灰石涂层相比，抗菌剂释放较均匀、抗菌时效较长，更具临床应用前景。

微泡超声增强庆大霉素对大肠杆菌抗菌作用的机制研究

【摘要】目的观察微泡超声对庆大霉素抑制大肠杆菌的增强效果，并探讨其可能机制。方法配制1×10CFU／ml大肠杆菌（ATCC25922）悬液，分为空白对照组、微泡（Sonovue）组、超声组和微泡超声组，每组按照庆大霉素浓度进一步分为0、1、2μgCml三个浓度组（n=8）。微泡浓度为体积分数10％。超声辐照强度为300mW／cm2，频率为46．5kHz，占空比为33％，辐照时间为12h。平板计数法比较各组残留活菌密度，取对数（10g10CFU／m1）行统计学分析。每组另取少量菌液行透射电镜扫描，观察残留菌的微观形态。结果未添加庆大霉素时，四组残留菌量的差异无统计学意义；庆大霉素1Ixg／ml时，微泡超声组（5．44±0．49logl0CFU／m1）与空白对照组（7．44±0．64logl0CFU／m1）、微泡组（7．19±0．38logl0CFU／m1）、超声组（6．86±0．29logl0CFU／m1）的差异均有统计学意义；庆大霉素浓度为2μg／ml时，微泡超声组（2．87±0．28logl0CFU／m1）与空白对照组（4．45±0．43loglOCFU／m1）、微泡组（4．33±0．40logl0CFU／m1）、超声组（3．89±0．37log10CFU／m1）的差异仍均有统计学意义。上述药物浓度下超声组与空白对照组菌量的差异均无统计学意义。透射电镜扫描提示，与单纯超声辐照相比，微泡超声辐照可进一步改变细菌胞膜的形态，胞膜皱褶更明显，存在较多不连续。结论与单纯超声辐照相比，微泡超声可以进一步提高庆大霉素对大肠杆菌的抗菌效果，可能与微泡增强超声的“声孔效应”有关。

金匮肾气丸调控豚鼠耳蜗Corti器细胞凋亡基因表达的研究

目的探讨金匮肾气丸对庆大霉素造成药物性耳聋豚鼠耳蜗细胞凋亡调控基因表达的影响。方法豚鼠腹腔注射庆大霉素100mg/(kg·d)制作耳聋动物模型,治疗组在注射庆大霉素后灌服金匮肾气丸药剂,实验结束后豚鼠断头处死,取耳蜗标本,进行免疫组化Bax及Bcl-2表达的定量检测分析和电镜组织学观察。结果模型组Bax蛋白表达比正常组、治疗组表达显著增多(P<0.01);治疗组与正常组比较,Bax蛋白表达没有统计学意义。正常组有一定数量的Bcl-2蛋白表达,模型组、治疗组Bcl-2蛋白表达均明显减少(P<0.01,P<0.05);治疗组Bcl-2蛋白表达高于模型组(P<0.05)。结论金匮肾气丸通过抑制Bax蛋白表达,调节Bcl-2蛋白表达而拮抗庆大霉素导致的豚鼠耳蜗细胞的凋亡。