The metabolism of constituents of Huangqin- Tang decoction,a traditional Chinese medicinal preparation,in conventional, germ-free and gnotobiote mice

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＩｎｔｅｓｔｉｎａｌｂａｃｔｅｒｉａｐｌａｙａｎｅｓｓｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｉｎｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｍａｎｙｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｉｎｖａｒｉｏｕｓｍｅｄｉｃｉｎａｌｈｅｒｂｓｔｏｔｈｅｉｒａｇｌｙｃｏｎｅｓ[1] .Ｓｏｍｅｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｏｆｈｅｒｂｓａｒｅｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄｔｏｂｅｍａｉｎｃｏｍｐｏ ｎｅｎｔｓｉｎｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｒｍｅｄｉｃｉｎｅｅｆｆｅｃｔｓ[2 ] .Ｉｎｐｒｅｖｉｏｕｓｐａｐｅｒ ,ｕｓｉｎｇａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｅｓ ｔａｂｌｉｓｈｅｄｉｎｏｕｒｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ,1 5ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌｃｏｍｐｏｕｎｄｓｉｎｔｈｅｔｒａ ｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎＨｕａｎｇｑｉｎ ＴａｎｇａｎｄｔｈｅｉｒｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｂｙＨＩＢｗｅｒｅｓｉ ｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ .ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｏｆＨｕａｎｇｑｉｎ ＴａｎｇＢＧ ,ＷＧ...

共生微生物对仔猪肠道发育、代谢和线粒体功能的影响

【目的】以猪为动物模型研究共生微生物对宿主肠道发育代谢的调控作用。【方法】经无菌剖腹产、无菌饲养等技术培育无菌(germ-free,GF)仔猪和无特定病原(specific pathogen-free,SPF)仔猪,通过形态学观察、液相色谱分析、RNA-seq等方法研究共生微生物对仔猪肠道形态、代谢、基因表达及线粒体功能的影响。【结果】共生微生物对仔猪肠道的形态结构、短链脂肪酸含量、氨基酸代谢和肠道细胞线粒体含量等方面产生不同程度的影响;共生微生物影响仔猪肝脏、回肠和结肠组织的整体基因表达,调控线粒体氧化磷酸化、氨基酸代谢、脂质代谢等生物学过程相关基因表达,导致线粒体功能发生改变,从而影响仔猪肠道营养物质的吸收与代谢。【结论】共生微生物通过调控肠道细胞线粒体从而影响仔猪肠道发育和代谢,为“微生物-宿主互作”调控仔猪肠道健康相关研究奠定理论基础。

乳酸菌混合发酵对脱脂麦胚的理化性质及抗氧化活性的影响

为探究植物乳杆菌及戊糖乳杆菌发酵对脱脂麦胚发酵过程中理化性质的影响,将2种乳酸菌单独发酵及以1∶1体积比混合发酵,测定发酵过程中酸面团pH及可滴定酸度、植酸含量和膳食纤维含量的变化。分析发酵对脱脂麦胚游离氨基酸及蛋白质结构的影响,并对发酵条件进行优化。结果表明:在发酵过程中(20~28 h),混合发酵脱脂麦胚中的菌体数量高于单独菌株发酵。当脱脂麦胚发酵24 h时,混合发酵组与单独发酵组相比具有更低的pH、植酸含量及更高的可滴定酸度;可溶性膳食纤维含量为(4.43±0.01)g/100 g,较单独发酵组分别提高21%、11%;混合发酵的脱脂麦胚中游离氨基酸含量最高,达到(16.25±0.23) mg/g,是未发酵组的1.85倍。傅里叶红外光谱表明,发酵能降低脱脂麦胚中蛋白质的α-螺旋和β-折叠总含量,增加β-转角和无规则卷曲总含量。最佳发酵条件为发酵时间35 h、发酵剂量2.8×10^(8) CFU/mL(以质量分数为0.85%无菌生理盐水体积计)、发酵温度37℃。在此条件下脱脂麦胚总酚含量达到(5.27±0.23) mg/g, DPPH·清除率达到44.61%±0.37%,ABTS+·清除率达到46.83%±0.17%。

无菌鼠细菌检测方法的选择与探讨

目的 比较培养法、革兰染色镜检法和16S rRNA PCR方法对无菌小鼠粪便样品细菌检测的检测性能,为无菌鼠细菌检测方法的选择提供依据。方法 利用培养法、革兰染色镜检法、16S rRNA PCR方法,分别检测GF小鼠粪便、SPF小鼠粪便以及已知含菌量的测试样品(无菌小鼠粪便与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌混合,人为制作而成),验证3种方法对无菌小鼠粪便中细菌的检测限度;并同时使用3种方法检测临床样品,对比3种检测方法的优缺点,分析3种方法在实际检测中的可行性。结果 培养法、革兰染色镜检法和16S rRNA PCR方法检测灵敏度分别为102CFU/g、108CFU/g和106CFU/g,临床样品检测中阳性率均为1.36%(6/441)。结论 培养法、革兰染色镜检法、16S rRNA PCR法3种检测方法各有优缺点,需要联合使用,取长补短,确保检测结果的可靠。

术前中性粒细胞与淋巴细胞比值对睾丸生殖细胞肿瘤预后的预测价值

目的:探讨术前中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)对睾丸生殖细胞肿瘤(testicular germ cell tumors,TGCT)患者预后的预测价值。方法:收集2016年01月至2023年10月于潍坊市人民医院行睾丸根治术的TGCT患者的临床及随访资料。通过受试者工作特征曲线(ROC)确定NLR的最佳截断值,用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,比较高、低NLR组间的癌症特异性生存率(CSS)和无进展生存率(PFS)差异。采用Cox比例风险模型筛选影响CSS和PFS的独立危险因素。结果:共纳入33例患者,包括21例(63.6%)精原细胞瘤和12例(36.4%)非精原细胞瘤。Kaplan-Meier分析结果表明:高NLR预示着更差的CSS(P<0.001)和PFS(P<0.001)。Cox多因素分析显示:高NLR(HR=18.225,95%CI:1.806~183.859,P=0.014)是CSS的独立预后危险因素;高NLR(HR=11.371,95%CI:1.751~73.847,P=0.011)也是PFS的独立预后危险因素。结论:术前NLR高值是影响TGCT患者预后的独立预后危险因素,NLR越高患者的CSS和PFS越差。

几种活菌的定植性研究

由无菌动物和普通动物的实验证明，喂服双歧杆菌、乳杆菌及肠球菌可以在体内定植，双歧杆菌在构成膜菌群中起重要作用，其定植数为１０８～１０８ＣＦＵ／ｍｌ，在盲肠内容物中其定植数为１０８～１０９ＣＦＵ／ｍｌ，乳杆菌的定植数为１０８ＣＦＵ／ｍｌ，肠球菌的定植数为１０６～１０７ＣＲＦＵ／ｍｌ。

4种处理方法对月季种子萌发的影响

【目的】分析不同处理方法对月季种子萌发的影响,为有效提高月季种子发芽率及育种效率提供理论和技术支持。【方法】以月季种子为材料,开展低温层积处理、不同激素及浓度、不同播种基质及无菌播种对其萌发影响的研究。【结果】低温层积处理的月季种子发芽率为42.22%,发芽势为24.44%;100.0mg/LGA_3和100.0mg/LNAA处理可显著提高月季种子萌发率和发芽势(P<0.05),发芽率分别为55.56%和48.89%,发芽势分别为42.22%和30.00%;月季种子在河沙中发芽率为42.22%,发芽势为24.44%,优于泥炭:珍珠岩(体积比为2:1)及菜园土基质;在MS培养基中添加GA_3更有利于月季种子萌发,当GA_3浓度为0.5 mg/L时,其发芽率为55.56%,发芽势为34.44%。【结论】低温层积处理、100.0 mg/LGA_3和100.0 mg/LNAA浸泡月季种子可有效提高其萌发率;适宜的播种基质及培养基对月季种子的萌发有促进作用。

肿瘤坏死因子致伤无菌大鼠多器官功能损害的初步研究

本研究应用重组人的肿瘤坏死因子a型(rh-TNF-a)腹腔注射致伤无菌大鼠观察其症状。致伤72h后处死,观察血液、胸水、腹水肿瘤坏死因子(TNF)水平,脑、肝组织膜磷脂酶A_2及β-受体变化,对肺、肝、回肠巯基的影响以及部分致伤无菌大鼠腹腔液培养上清白细胞介素-1(IL-1)的水平。结果致伤组动物症状酷似实验动物的内毒素血症;大体解剖肝、脾、肺、脑、肠均有明显变化;膜磷脂酶A_2及β-受体均明显上升。肝、肺、回肠组织中巯基下降;IL-1水平上升。血液胸水、腹水TNF水平均显著上升。表明TNF对机体影响甚大,可影响多个脏器。

无菌动物的生物学特性及其在人类疾病研究中的应用

微生物学已开始从致病性研究为主转向了生理功能研究为主。正常菌群可促进机体代谢与肠道免疫系统的发育和成熟,也具有保护宿主对抗病原微生物入侵的作用。而研究肠道菌群的生理病理功能对动物模型提出了更高的要求。无菌(germ free,GF)动物的微生物背景清晰,且在解剖与形态学、代谢生理及免疫系统方面与常规实验动物相比有明显的特点,现已成为研究肠道菌群的生理病理功能的最佳动物模型。本文就GF动物在肠道微生态、免疫系统发育、代谢性疾病、药物代谢及肿瘤学等方面的研究进展作一综述。

无菌豚鼠与普通豚鼠血液学参数的比较

目的对普通级豚鼠进行剖宫产,培育无菌豚鼠模型,并比较无菌豚鼠和普通级豚鼠的血液学参数。方法行子宫摘除术摘除子宫,在无菌隔离器中将子宫剥离取仔,用人工哺乳的方法将仔豚鼠培育成无菌豚鼠,并在固定的周期检测豚鼠的无菌情况。采用全血细胞计数分析仪、全自动血液生化分析仪测定无菌豚鼠、普通豚鼠的血常规和血生化参数。用SPSS12.0进行统计分析。结果无菌豚鼠和普通豚鼠在白细胞(WBC)、嗜碱性粒细胞数(BA#)、单核细胞百分比(MO)、血红蛋白浓度(MCHC)、中性粒细胞数(NE#)、嗜酸性粒细胞数(EO#)、淋巴细胞数(LY#)七个血常规指标上有差异显著性,其他指标没有显著性差异;谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)、总胆固醇(CHO)、总胆红素(TBIL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、球蛋白(GLO)、A/G、K、Na、谷酰转肽酶(GGT)15个指标上差异有显著性,其他指标差异无显著性。结论通过规范的子宫摘除术和人工喂养的方法获得符合标准的无菌豚鼠,与普通豚鼠在多项血液学指标上差异有显著性。

思茅松成熟胚无菌萌发及农杆菌介导的遗传转化

以思茅松成熟胚为外植体,研究其适宜的萌发培养基,并对其根癌农杆菌介导的遗传转化进行初步研究。结果表明:适宜成熟胚萌发的培养基为1/2MS培养基;卡那霉素的质量浓度为40mg·L-1,抑菌剂羧苄青霉素的质量浓度为800mg·L-1;遗传转化的适宜条件为:菌液比色浓度的OD600为0.8,浸染时间15～30min,共培养时间1～2d;组织化学染色检测到了GUS瞬时表达。

挤压膨化对小麦胚芽储藏稳定性的影响

采用不同的挤压膨化工艺条件 ,研究其对小麦胚芽储藏稳定性的影响。结果表明 :小麦胚芽经挤压膨化后 ,可明显提高其储藏稳定性 ;当原料水分为 1 2 %、挤压机螺杆转速为 5 0 0 r·min- 1时 ,挤压膨化的小麦胚芽经 1 2 d烘箱快速储藏 ,其储藏稳定性表现最佳 ,脂肪酸值仅为 1 .0 6g· kg- 1 。

无菌猪的制备与微生物质量控制

菌群与宿主相互关系等热点研究促进了对无菌动物需求的迅猛发展。无菌猪作为一种特殊的模式动物,其在科学研究中不仅排除了背景微生物因素的影响,而且与常用的无菌小鼠相比,其在解剖、生理、代谢等方面与人更为相似,因此在生命科学研究领域具有重要的应用价值。本文结合现有国外无菌猪研究进展和本实验室在无菌猪研究积累,就无菌猪的制备与微生物质量控制进行简要探讨。

无菌猪生长、血液以及脏器相关指标的测定

目的建立无菌太湖猪多项生理数据背景资料。方法对4头25 d无菌猪和4头同窝普通级群体,雌雄比3∶1,测定并比较血液常规、生化、免疫球蛋白和主要脏器发育指标。运用异速生长建模,对主要脏器重量相对体重的异速生长进行了分析。结果 (1)无菌猪与普通级猪的12项血常规和8项血生化指标差异有显著性(P<0.05);(2)无菌猪与普通级猪的平均体重、血清中Ig M表达量差异达到显著性水平(P<0.05),且无菌猪缺少肠系膜淋巴结;(3)无菌猪的心脏、脾和胃与体重呈负异速生长(异速生长指数b<1),肠道与体重的异速生长指数为1.78,为正异速生长;而普通级猪的心脏、胃和肠道与体重呈负异速生长(b<1),肾与体重的异速生长指数最大,为1.20,呈正异速生长。结论微生物学等级差异影响了猪体重、血液及脏器、免疫系统的发育。

无菌大鼠血液学及血液生化指标正常参考值的测定

目的人工培育Wistar无菌大鼠,观测F1和F2代无菌大鼠血液学及血液生化指标差异。方法对清洁级Wistar大鼠进行子宫摘除,隔离器内剥离子宫壁获得大鼠胎仔,人工哺育为无菌大鼠。待其繁殖后,采用全自动血液生化分析仪、全血细胞计数仪测定F1和F2代无菌大鼠的血液学及血液生化指标。结果不同代数无菌大鼠的血液学和血液生化指标存在显著差异,其中有差异的血液学指标包括RBC、HGB、HCT、MCV、MCHC、RDW、MPV、NE%、LYM%、EO%、BA%、NE#、LYM#、EO#、BA#(P<0.05);有差异的血液生化指标包括ALT、ALB、LDH、CHO、TBIL、HDL-C、LDL-C、GLO、GLU、ALP、A/G、UA、P(P<0.05)。同时这些差异又因性别和年龄而不同。结论代数、性别、年龄对无菌大鼠的血液学及血液生化指标有较大影响。

无籽西瓜成熟胚无菌萌发条件研究

对无籽西瓜成熟胚的无菌萌发条件进行了系统研究 ,结果表明 :无籽西瓜成熟胚消毒的最佳方案是先用 75 %酒精预消毒 30s ,用无菌水冲洗 3次 ,然后用 10 %漂白粉加 0 .5 %NaClO消毒 30min ,再用无菌水冲洗 4～ 5次。无籽西瓜成熟胚消毒后平放于蛭石培养基或琼脂培养基中 ,先暗培养 3d后转到光下培养 ,生长效果较佳。无籽西瓜成熟胚在无菌条件下萌发生长与品种基因型没有必然的联系 ,只要成熟胚在适宜的光、温、水、气条件下 ,均可正常萌发。

移植不同饲料利用效率猪的粪便可定向改变伪无菌小鼠的生长性能

目的通过将不同饲料利用效率猪的粪便移植至伪无菌小鼠,探讨其对受体小鼠生长性能的影响规律,并初步揭示其机制。方法使用36头28 kg左右的杜×长×大阉公猪进行42 d单笼饲养(自由采食)并测算其饲料转化效率。实验结束时将36头猪根据饲料转化效率分为高、中、低3组,采集三组猪的新鲜粪便,通过灌胃移植到经广谱抗生素处理过的小鼠中,监测粪便移植后小鼠的生长性能变化。采用全收粪法测定饲料利用效率高、中、低三组猪的营养物质消化率,并采用16S rRNA V3-4可变区扩增测序对猪和小鼠的粪便微生物组成进行分析比较。结果将不同饲料利用效率猪的粪便移植至广谱抗生素处理的伪无菌小鼠后,小鼠重现了猪的生长性能表型;在肠道微生物的组成结构方面,高饲料转化效率猪及其高生长性能的受体鼠,肠道微生物的物种丰富度和微生物多样性相对较高;高饲料利用效率猪的总能消化率(P=0.01)显著增加,产气短杆菌的丰度显著提高,且其粪便移植后受体小鼠的肠球菌和阿克曼氏菌丰度也显著高于低饲料利用效率的受体小鼠,表明肠道微生物在能量的高效利用方面起着重要的作用。结论移植不同饲料利用效率猪的粪便可定向改变伪无菌小鼠肠道微生物的物种丰富度、微生物多样性及其生长性能。高饲料利用效率猪的优势主要在于能量消化利用效率较高,肠道中与能量高效利用相关微生物丰度相对较高。

新疆哈萨克族肥胖儿童菌群人源化动物模型的建立

目的利用无菌小鼠建立新疆哈萨克族肥胖儿童菌群人源化（HFA）动物模型,为深入研究哈萨克族儿童肥胖的病理生理机制提供新的研究方式。方法收集新疆哈萨克族7-13岁肥胖儿童新鲜粪便,男女各10例。20只3周龄无菌级C57BL/6J小鼠（雌雄各半）,按照性别进行分组并编号。小鼠灌胃接种哈萨克族肥胖儿童粪便菌悬液0.1 ml/次,隔日一次,共接种3次,且接种时遵循性别一致原则。于接种后第7天收集小鼠新鲜粪便标本,提取基因组DNA后,采用特异性引物对16S rRNA V3区进行PCR扩增,对扩增产物运用DGGE方法分离并鉴定,以了解HFA动物模型中肠道菌群的定植情况。结果接种哈萨克族肥胖儿童肠道菌群后的无菌小鼠盲肠均减小为正常小鼠大小;HFA动物模型的PCR-DGGE指纹图谱显示各观察标本均形成复杂而多样的菌属条带。结论本实验成功利用无菌C57BL/6J小鼠建立哈萨克族肥胖儿童HFA动物模型,该动物模型是探索哈萨克族儿童特征性肥胖与肠道菌群关系的新的选择方式。

香石竹茎段培养无菌芽及微繁研究

以香石竹茎段为外植体,研究了不同品种、不同激素组合对4个香石竹品种无菌芽发生的影响,并以“玛丽”品种为试验材料,研究了不同激素种类及组合对试管苗增殖和生根的影响。结果表明:香石竹茎段诱导无菌芽的培养基为:MS+6-BA 1 mg/L,诱导率为83.3%;试管苗继代增殖的培养基为:MS+6-BA 0.2 mg/L+IBA 0.05 mg/L,增殖系数可达7.57;试管苗生根的培养基为:1/2 MS+IAA 0.1 mg/L,生根率为93.3%。试管苗移栽到珍珠岩和蛭石等比例配成的基质中,成活率达90%以上。

食品软包装机无菌气室三维流场的有限元分析

分析了无菌包装气室的结构，研究了确保气室无菌的条件，并采用了有限单元法对气室中的三维流场进行了分析。建立了保证气室无菌的流场分布评价指标，分析了影响流场分布的因素，考虑到无菌气室的隔菌性与经济性，得出了进气方式１ 和方式２ 均能满足隔菌性的要求，但方式２又优于方式１。得出了无菌气室的合理结构参数。并通过实验验证了理论分析。