gga-miR-130b-3p对鸡MDCC-MSB1细胞中肿瘤相关基因表达的影响

为鉴定MD淋巴瘤转化细胞中gga-miR-130b-3p调控的肿瘤相关基因,本研究在MDV转化的鸡淋巴细胞系MDCC-MSB1中过表达该miRNA,转染48 h后收集并提取RNA,利用高通量测序获得过表达gga-miR-130b-3p组和阴性对照组(Negative control,NC)的转录组数据,筛选这些数据中的差异表达基因(Differential expressed genes,DEGs),对DEGs进行基因本体GO功能富集分析、信号通路分析以及基因集富集分析,筛选过表达ggamiR-130b-3p前后基因表达变化可能参与的信号通路,并对两组中的差异可变剪切进行分析。结果表明:1)与NC组相比,过表达gga-miR-130b-3p组中共鉴定出117个DEGs,其中83个DEGs显著上调,34个DEGs显著下调。其中MCM10、KCNA3、PTK2、FGL2、GPAM、BMP4、LOXL3、DDO和KRAS等基因可能影响MD肿瘤转化。2)DEGs注释到46个GO条目中,其中生物过程包含免疫系统过程等在内的22个条目,分子功能包括10个条目,细胞组分包括14个条目。3)mimics NC和mimics转染组中的DEGs以及微效基因富集到7个与肿瘤发生相关的通路,其中主要是通过甲状腺激素信号途径、胆碱代谢等通路发挥抑癌作用。4)过表达gga-miR-130b-3p后差异可变剪切类型最多的是外显子跳跃(Exon skipped,ES),其次是内含子滞留(Intron retained,IR),最少的是外显子互斥(Mutually exclusive exon,MXE)。综上,gga-miR-130b-3p高表达会引起MSB1细胞中的部分基因差异表达,这些DEGs通过抑癌信号通路抑制MD的肿瘤发展进程,该研究可为解析miRNA在MD肿瘤转化过程中的作用机制提供理论依据。

妊娠糖尿病患者血清miR130b-3-p、miR181a-5-p表达与妊娠结局的关系

目的 探究妊娠糖尿病患者血清微小RNA(miRNA)miR-130b-3p、miR-181a-5p表达与妊娠结局的关系。方法 选取2020年6月至2022年8月在北京航天总医院及北京妇产医院诊治的124例妊娠糖尿病患者作为研究组,根据妊娠结局分为良好组和不良组;采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-130b-3p、miR-181a-5p表达;采用Pearson法分析血清miR-130b-3p、miR-181a-5p及二者与血脂和血糖的相关性;采用Logistic回归分析妊娠糖尿病患者不良妊娠结局的影响因素。结果 研究组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、miR-130b-3p相对表达水平高于对照组(P<0.05),miR-181a-5p相对表达水平低于对照组(P<0.05)。不良组TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR、miR-130b-3p相对表达水平高于良好组(P<0.05),miR-181a-5p相对表达水平低于良好组(P<0.05)。根据Pearson相关性分析可知,血清miR-130b-3p与miR-181a-5p相对表达水平呈负相关(P<0.05),血清miR-130b-3p与TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR均呈正相关(P<0.05),miR-181a-5p与TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR均呈负相关(P<0.05)。根据Logistic回归分析得知,miR-130b-3p、TC、TG、LDL-C、FBG、FINS高水平,miR-181a-5p低相对表达水平均为妊娠糖尿病不良妊娠结局的危险因素(P<0.05)。结论 妊娠糖尿病患者血清miR-130b-3p相对表达水平升高,miR-181a-5p相对表达水平降低,二者与妊娠结局密切相关。

癫痫患者脑电图异常与血液miR-130b-3p和miR-7及FGL2表达特征的关系

目的探讨癫痫患者脑电图异常与血液miR-130b-3p、miR-7及纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)表达特征的关系。方法选取接受治疗的癫痫患者124例作为观察组(癫痫发作轻度患者36例、中度患者51例及重度患者37例,脑电图轻度异常患者65例、中度异常35例及重度异常24例),同时选取体检健康者120例作为对照组;比较观察组和对照组、不同程度癫痫发作患者、不同程度脑电图异常的癫痫患者血液miR-130b-3p、miR-7及FGL2表达差异,分析癫痫患者血液miR-130b-3p、miR-7及FGL2与疾病程度和脑电图异常的相关性。结果观察组miR-130b-3p、FGL2高于对照组(P<0.05),miR-7低于对照组(P<0.05);癫痫发作重度患者miR-130b-3p、FGL2高于轻度和中度患者(P<0.05),miR-7低于轻度和中度患者(P<0.05);全面性癫痫发作患者miR-130b-3p、FGL2高于部分性发作患者(P<0.05);脑电图重度异常癫痫患者miR-130b-3p、FGL2高于脑电图轻度和中度异常患者(P<0.05),miR-7低于轻度和中度异常患者(P<0.05);脑电图中度异常癫痫患者miR-130b-3p、FGL2高于脑电图轻度异常患者(P<0.05),miR-7低于轻度异常患者(P<0.05);癫痫患者miR-130b-3p及FGL2与疾病严重程度、脑电图异常程度呈正相关(P<0.05),miR-7与疾病严重程度、脑电图异常程度呈负相关(P<0.05)。结论癫痫患者血液miR-130b-3p及FGL2表达上调,而miR-7下调,3项指标均与与癫痫患者疾病严重程度、脑电图异常程度存在相关关系。

血清微RNA-130b-3p、果蝇母系DPP同源物4对多囊卵巢综合征不孕病人人工授精妊娠结局的预测价值

目的探究血清微RNA(miR)-130b-3p、果蝇母系DPP同源物4(SMAD4)对多囊卵巢综合征(PCOS)不孕病人人工授精妊娠结局的预测价值。方法选取2018年1月至2022年1月在平顶山市妇幼保健院就诊的PCOS不孕病人172例为PCOS组,另取同期体检的180例月经周期正常且已婚已育女性作为对照组。实时荧光定量PCR法检测血清中miR-130b-3p的水平;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清SMAD4水平。判断PCOS病人人工授精结局并分为临床妊娠组(n=146)和未临床妊娠组(n=26)。Pearson法对PCOS病人血清SMAD4、miR-130b-3p、抗苗勒氏管激素(AMH)的相关性进行分析;logistic回归分析影响PCOS不孕病人人工授精后未临床妊娠的危险因素,采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评估miR-130b-3p、SMAD4水平预测PCOS病人人工授精未临床妊娠的价值。结果与对照组相比,PCOS组血清miR-130b-3p(1.02±0.24比2.16±0.34)水平较高(t=36.47,P<0.05),血清SMAD4[(71.15±11.62)ng/L比(36.05±6.37)ng/L]水平较低(t=34.92,P<0.05),与临床妊娠组相比,未临床妊娠组血清miR-130b-3p(2.04±0.31比2.85±0.51)水平较高(P<0.05),优势卵泡数≥2个比例(78.08%比50.00%)及血清AMH[(8.27±1.85)pg/L比(6.16±1.01)pg/L]、SMAD4[(38.27±6.99)ng/L比(23.60±2.91)ng/L]水平较低(P<0.05)。Pearson分析显示,PCOS病人血清中SMAD4与miR-130b-3p呈负相关(r=−0.56,P<0.05),PCOS病人血清中miR-130b-3p与AMH呈负相关(r=−0.46,P<0.05),血清中SMAD4与AMH呈正相关(r=0.46,P<0.05)。logistic分析显示,miR-130b-3p水平升高是PCOS不孕病人人工授精后未临床妊娠的危险因素(P<0.05),AMH和SMAD4水平降低是PCOS不孕病人人工授精后未临床妊娠的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-130b-3p、SMAD4联合预测PCOS病人人工授精未临床妊娠的曲线下面积(AUC)为0.95,其灵敏度为96.20%,特异度76.70%。结论PCOS病人血清miR-130b-3p水平升高,SMAD4水平下降,二者对PCOS病人人工授精未临床妊娠有预测价值。

RNA XIST、mir-130b-3p在乳腺癌组织中的表达及与其预后相关性

目的 探讨RNA XIST、mir-130b-3p在乳腺癌组织中的表达及与其临床病理特征及预后的相关性。方法选择120例乳腺癌患者,收集其癌组织和癌旁正常组织,采用免疫组化染色法测定RNA XIST、mir-130b-3p水平及其与乳腺癌临床病理学特征的关系;从治疗起对所有患者随访60个月,记录总生存率,并建立Logistic多元回归方程分析乳腺癌患者死亡高危因素。结果 RNA XIST在乳腺癌组织中表达量高于癌旁正常组织(P<0.05),mir-130b-3p在乳腺癌组织的表达量低于癌旁正常组织(P<0.05);RNA XIST与mir-130b-3p在乳腺癌组织中表达呈显著负相关关系(P<0.05);RNA XIST、mir-130b-3p表达量与患者年龄、肿瘤直径、肿瘤分期、淋巴结转移、分化程度显著相关(P<0.05);所有患者均从治疗起随访60个月,6例于治疗后24~36个月复发,8例全身转移,54例死亡,存活患者RNA XIST表达量低于死亡患者(P<0.05)、mir-130b-3p表达量高于死亡患者(P<0.05);年龄≥55岁、肿瘤直径>5 cm、肿瘤Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、RNA XIST高表达、mir-130b-3p低表达为乳腺癌患者死亡危险因素(P<0.05)。结论 RNA XIST、mir-130b-3p与乳腺癌患者预后显著相关,且两者在癌细胞中的表达量呈负相关关系,可对其进行监测作为早期筛查乳腺癌生物标志物和治疗靶点。

miR-130b-3p在肾癌中表达及PI3K/AKT途径参与的机制研究

目的探究miR-130b-3p调节PI3K/AKT途径对肾癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法临床收集肾癌患者78例,检测肿瘤组织和癌旁组织中miR-130b-3p和PTEN蛋白水平,分析miR-130b-3p与肾癌病理特征的关系。通过相关性分析探究肾癌组织中miR-130b-3p与PTEN蛋白的相关性。786-O细胞分为NC、miR-130b-3p、PTEN和miR-130b-3p+PTEN组,分别转染NC、miR-130b-3p mimic和/或pcDNA 3.1 PTEN来过表达miR-130b-3p和/或PTEN。分别检测各组细胞活力、凋亡率、侵袭能力以及PI3K/AKT通路水平。结果肾癌组织中miR-130b-3p水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。miR-130b-3p表达水平与性别、年龄、肿瘤直径无关,高水平的miR-130b-3p与高临床分期和淋巴转移有关(P<0.05)。miR-130b-3p与PTEN靶向结合(P<0.05)。与NC组比较,miR-130b-3p组的PTEN蛋白和凋亡率显著降低,增殖活力、侵袭能力和PI3K/AKT通路显著升高(P<0.05);PTEN组的PTEN蛋白和凋亡率显著升高,增殖活力、侵袭能力和PI3K/AKT通路显著抑制(P<0.05)。miR-130b-3p+PTEN组的PTEN蛋白和凋亡率显著高于miR-130b-3p组且显著低于PTEN组,而增殖活力、侵袭能力和PI3K/AKT通路显著低于miR-130b-3p组且显著高于PTEN组(P<0.05)。结论miR-130b-3p在肾癌组织中上调,高水平的miR-130b-3p与肾癌患者的高临床分期和转移有关,miR-130b-3p可调控PI3K/AKT途径,抑制PTEN蛋白表达,促进肾癌细胞的侵袭并抑制凋亡。

癫痫患者外周血CD69、miR-130b-3p表达水平及其临床意义

目的探讨CD69、miR-130b-3p在癫痫患者外周血中的表达水平及其临床意义。方法选取2018年2月至2019年2月该院神经内科收治的95例癫痫患者作为癫痫组,根据病情严重程度分为轻度31例,中度22例,重度42例。另选取同期来该院进行健康体检的健康者60例作为对照组。采用流式细胞仪检测两组外周血CD69表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测两组外周血miR-130b-3p表达水平;采用Pearson相关分析癫痫患者外周血CD69与miR-130b-3p表达水平的相关性;采用Logistic回归分析影响癫痫发生的影响因素。结果与对照组比较,癫痫组外周血CD69、miR-130b-3p表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。外周血CD69、miR-130b-3p表达水平在轻度、中度、重度癫痫患者中依次升高,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。癫痫患者外周血CD69与miR-130b-3p表达水平呈正相关(r=0.546,P<0.05)。外周血CD69、miR-130b-3p表达水平升高是癫痫发生的危险因素(P<0.05)。结论癫痫患者外周血CD69、miR-130b-3p呈高表达,二者均与患者病情严重程度有关。

糖尿病肾病相关miR-130b-3p靶点的生物信息学预测

目的:预测miR-130b-3p靶基因,并对靶基因的分子功能、生物学进程和信号通路进行富集分析,为深入研究糖尿病肾病相关miR-130b-3p的靶基因功能提供理论基础。方法:通过NCBI和miRbase数据库检索基因。应用Vector NTI软件进行miR-130b-3p序列分析,应用Target Scan,pic Tar,RNA22,PITA和miRanda软件预测靶基因,通过DAVID和KEGG数据库进行靶基因功能与信号通路富集分析。结果:已知成熟的不同物种miR-130b-3p核酸序列高度保守。靶基因主要富集在核质和细胞溶质,分子功能主要富集在蛋白绑定和转录因子激活。经典的miR-130b-3p靶基因集合明显富集于KEGG数据库中的TGF-β、AMPK和内吞作用等7个信号转导通路。疾病富集分析与糖尿病高度相关。结论:成功预测miR-130b-3p靶基因,部分靶基因参与的功能及信号通路与糖尿病肾病发生发展过程密切相关。

miR-130b-3p通过靶向作用于INTS6促进肝细胞癌生长和转移

目的探讨miR-130b-3p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平、临床意义及生物学功能,并初步探讨整合因子复合体亚基6(integrator complex subunit 6,INTS6)是否是其潜在的作用靶点。方法收集65例HCC组织和对应的癌旁组织标本,用real-time PCR检测miR-130b-3p在HCC组织和癌旁组织中的表达;用real-time PCR检测miR-130b-3p在人正常肝细胞(LO2)与肝癌细胞系中的表达; GEO数据库(GSE36915)分析miR-130b-3p在HCC和癌旁组织中的表达;分析miR-130b-3p的表达水平与HCC临床病理特征的相关性;分别应用miR-130b-3p类似物(miR-130b-3p mimics)和miR-130b-3p抑制剂(miR-130b-3p inhibitors)上调和下调MHCC-97L细胞中miR-130b-3p的表达,实验分组包括miR-130b-3p类似物组和相应的对照组以及miR-130b-3p抑制剂组和相应的阴性对照组。Transwell迁移和侵袭实验检测miR-130b-3p对HCC细胞迁移与侵袭能力的影响; MTT实验检测miR-130b-3p对HCC细胞增殖能力的影响;生物信息学工具预测INTS6是否是miR-130b-3p的下游靶点,用荧光素酶报告基因实验以及Western blot分析miR-130b-3p对潜在靶点INTS6的调节作用。结果与癌旁组织相比,miR-130b-3p在HCC组织中的表达明显升高(P <0. 001);与正常肝细胞相比,miR-130b-3p在HCC细胞系中的表达明显升高; GEO数据库(GSE36915)数据显示与癌旁组织相比,miR-130b-3p在HCC组织中表达显著上调(P=0. 035 6); miR-130b-3p的表达水平与肿瘤大小(P=0. 015)、静脉侵犯(P=0. 028)以及TNM分期(P=0. 045)显著相关;下调或者上调MHCC-97L细胞的miR-130b-3p表达后,细胞的迁移、侵袭和增殖能力显著被抑制或者增强;生物信息学分析发现,INTS6可能是miR-130b-3p的作用靶点;荧光素酶报告基因实验显示,miR-130b-3p能够负向调节INTS6-3'UTR的荧光素酶活性;此外,miR-130b-3p抑制剂(miR-130b-3p inhibitors)和miR-130b-3p类似物(miR-130b-3pmimics)分别能上调或者下调MHCC-97L细胞中INTS6的表达水平。结论 miR-130b-3p通过靶向作用于INTS6增强HCC细胞的迁移、侵袭及增殖能力,进而促进HCC的发生发展。

狼疮肾炎患者循环miRNA表达谱研究及循环miR-130b-3p的临床意义

目的研究探讨狼疮肾炎患者外周循环miRNA表达变化及其可能存在的临床意义,为狼疮肾炎的临床治疗提供更多的客观依据。方法方便选取2013年9月—2015年9月于该院诊治的50例狼疮肾炎患者,同时另选同期于该院体检的50名健康者作为对照组。在100例研究对象中随机选取15例患者做循环miRNA的表达谱检测筛选(检测组),85例患者做循环miRNA的表达谱验证筛选(验证组),同时应用循环miR-130b-3p为验证对象,观察与比较狼疮肾炎患者与对照组患者的血清总RNA水平及检测组中两组患者的血清miRNA水平、验证组中miR-130b-3p的水平,并进行数据统计学分析及相关性分析。结果在验证组中,与对照组相比较(3.7±1.6)ng/μL,狼疮肾炎组患者的循环血清中miR-130b-3p的表达水平(9.8±1.4)ng/μL显著上升,其差异有统计学意义(P<0.05);在检测组中,与对照组相比较(28.6±2.4)ng/μL,狼疮肾炎组患者循环表达的miRNA水平(46.8±5.6)ng/μL明显上升,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论狼疮肾炎患者循环miRNA表达水平可能随着肾功能的进一步下降而出现表达下调,其循环miR-130b-3p的表达与肾脏功能、血脂水平呈现明显的相关性,这在狼疮肾炎的疾病发生发展中可能起着重要的作用。

miR-130b-3p靶定AMPK基因抑制糖饥饿诱导的宫颈癌细胞自噬性死亡

目的探究miR-130b-3p对糖饥饿诱导宫颈癌细胞自噬性死亡的影响及机制。方法将宫颈癌细胞分别置于低糖(0.1 mmol/L)和正常糖含量(5 mmol/L)、低糖+DMSO和低糖+雷帕霉素的培养液中培养,利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色实验、GFP-LC3B自噬泡形成检测实验、实时荧光半定量PCR(RT-qPCR)实验和Western blot实验,依次检测细胞死亡、自噬水平,细胞内miR-130b-3p、腺苷单磷酸激活激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)mRNA和AMPK蛋白水平;分别转染miR-130b-3p抑制物及AMPK过表达质粒,再利用自噬抑制剂SBI-0206965(SBI)检测miR-130b-3p、ampk对细胞死亡和自噬的影响;生物信息学工具预测miR-130b-3p的靶基因并利用荧光报告基因实验进行验证。结果低糖诱导宫颈癌细胞发生自噬、miR-130b-3p水平升高,AMPK表达水平降低(均P<0.05),死亡率无显著变化(均P>0.05);与低糖+DMSO组相比,低糖+雷帕霉素使得宫颈癌细胞死亡率显著增加(均P<0.05);转染miR-130b-3p抑制物后,低糖条件下宫颈癌细胞自噬水平和自噬性死亡率显著增加(均P<0.05);过表达AMPK能促进宫颈癌细胞自噬和自噬性死亡率显著升高(均P<0.05);荧光报告基因表达水平检测结果证实,AMPK是miR-130b-3p的直接靶基因(P<0.05)。结论低糖条件下,miR-130b-3p靶定AMPK基因抑制宫颈癌细胞自噬性死亡。

基于生物信息学分析miR-130b-3p在肾透明细胞癌中的表达、靶基因及预后价值

目的:采用生物信息学方法分析miR-130b-3p在肾透明细胞癌(KIRC)组织中的表达,预测其靶基因,并探究其预后价值,为进一步研究miR-130b-3p在KIRC中的调控机制和临床应用提供理论依据。方法:采用miRBase分析miR-130b-3p的保守性;dbDEMC2.0数据库评估miR-130b-3p在人肿瘤组织和正常组织中的表达,采用UCSC数据库的RNA-seq数据分析miR-130b-3p在KIRC组织中的表达;Stabase3.0和UALCAN数据库预测和确定miR-130b-3p在KIRC的靶基因,并采用Metascape对miR-130b-3p靶基因进行GO功能及KEGG通路富集分析;Kaplan-Meier Plotter分析miR-130b-3p表达与患者总生存期的关系,评估其在KIRC患者的预后意义。结果:miR-130b-3p序列在物种间高度保守,在肾癌(KDCA)等多种肿瘤中表达上调,且在KDCA高分级中较低分级明显上调;进一步分析其在KDCA最常见类型,即KIRC组织中的表达,结果显示,miR-130b-3p在KIRC组织中明显上调;预测获得miR-130b-3p在KIRC中的靶基因集包含87个靶基因;富集分析结果显示,靶基因主要富集于细胞自噬、顶树突发育、磷脂酰肌醇生物合成过程、肌动蛋白细胞骨架形成等生物过程和甲状腺激素合成、肌动蛋白细胞骨架调节及Ras等信号通路;生存分析显示,miR-130b-3p与KIRC患者不良预后显著相关。结论:miR-130b-3p在KIRC中表达异常,且涉及多个生物学过程和信号转导通路,可作为KIRC潜在的预后生物标志物。

miR-130b-3p有望作为人膀胱癌的标志物

目的进一步了解miRNA在膀胱癌中的潜在机制。方法芯片分析4对人膀胱癌组织和相邻正常组织中的miRNA的表达。并用RT-q PCR来验证两个最上调的miRNA及其靶基因的表达是否符合miRNA/mRNA芯片结果。通过相关性分析和双荧光素酶报告实验推断并验证miR-130b-3p可以靶向PTEN。应用CCK8、EDU、流式细胞术、划痕、Transwell和细胞骨架等实验证明miR-130b可以影响膀胱癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。用Western blot检测PI3K/AKT和整合素β1/FAK信号通路的关键靶蛋白。结果人膀胱癌中miR-130b-3p表达高于癌旁且与PTEN表达呈负相关。miR-130b-3p可下调PTEN表达,导致PI3K/AKT和整合素β1/FAK信号通路的激活,且与膀胱癌EJ细胞的增殖、迁移和侵袭相关。细胞转染miR-130b-3p抑制剂时,可以重排细胞骨架。结论本结果揭示miR-130b/PTEN有望用于人膀胱癌诊断和治疗的标志物。

MiR-130b-3p在非小细胞肺癌患者血液中的表达及潜在意义

目的 探讨miR-130b-3p在NSCLC患者血液中的表达水平及潜在临床意义。方法 本研究使用癌症基因组图谱(TCGA)、基因表达谱数据库(GEO)以及序列片段归档数据库(SRA)下载了NSCLC相关的miRNAs表达谱,并提取miR-130b-3p在各个纳入的数据集中的表达量。计算标准化均数差(SMD)综合展示miR-130b-3p在NSCLC患者血液中的表达水平,进行诊断试验以探讨差异表达的miR-130b-3p对NSCLC患者和健康人的鉴别潜力。通过对miRwalk 2.0中12个数据库的预测结果进行交集,筛选出miR-130b-3p的下游靶基因,并采用富集分析探讨miR-130b-3p下游靶基因调控NSCLC的潜在信号通路。结果 共7项研究的300例NSCLC患者血液样本被纳入。miR-130b-3p在LUAD(SMD=-1.45,95%CI:-2.66~-0.23)以及LUSC(SMD=-0.46,95%CI:-0.84~-0.09)这两种NSCLC患者血液中的表达水平较对照组明显下调。诊断试验提示miR-130b-3p具有良好的区分NSCLC患者和健康人的潜力(AUC=0.85:95%CI:0.82~0.88)。47个基因被鉴定为miR-130b-3p的下游靶基因,这些靶基因显著富集于Renin-angiotensin system通路。结论在NSCLC患者血液中表达下调的miR-130b-3p有望用于NSCLC的筛查。

miRNA-130b-3p促进血管钙化的机制研究

为了确定miRNA-130b-3p在血管钙化中的作用,文章通过使用维生素D_(3)(VD_(3))诱导野生型(WT)雄鼠中膜钙化,收集小鼠全主动脉和肾脏分析钙化进程、miRNA-130b-3p以及成骨转录因子的表达,并在体外向人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMCs)转染miRNA-130b-3p mimic和antagomir,使用高磷酸盐(3.0 mmol/L)诱导钙化,通过Western Blot、实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、免疫荧光来确定相关基因表达变化。从WT小鼠分离主动脉并剪成5 mm小段,转染miRNA-130b-3p分析钙化水平,通过流式细胞荧光分选技术(fluorescence activated cell sorting,FACS)分析钙化时HASMCs凋亡。结果发现,miRNA-130b-3p在钙化时表达显著上升并且miRNA-130b-3p的表达与钙化进程显著相关,当过表达时miRNA-130b-3p促进钙化,相反的抑制miRNA-130b-3p则可以抑制钙化,进一步发现miRNA-130b-3p通过介导重组人骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)通路和Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达来影响钙化,并且通过促进细胞凋亡来进一步影响钙化。结果表明miRNA-130b-3p作为钙化上游信号促进血管钙化。

lncRNA CCAT1靶向miR-130b-3p对人胰腺癌细胞PANC-1放射敏感性的影响

目的探讨lncRNA CCAT1和miR-130b-3p对体外培养的胰腺癌细胞PANC-1放射敏感性的影响。方法采用Real-time PCR检测胰腺癌组织及其细胞系和2 Gy X射线照射后PANC-1细胞中CCAT1和miR-130b-3p的相对表达水平。沉默CCAT1表达、抑制miR-130b-3p表达后,应用流式细胞仪、Caspase 3活性检测试剂盒及克隆形成实验检测细胞凋亡率、Caspase 3活性和细胞存活分数,并绘制单击多靶模型拟合曲线;利用starBase v2.0在线预测、荧光素酶报告基因、RNA结合蛋白免疫沉淀实验(RIP)及Real-time PCR实验,验证CCAT1和miR-130b-3p的靶向关系。结果在放射抵抗的胰腺癌组织、胰腺癌细胞系和2 Gy照射的PANC-1细胞中,CCAT1表达均上调(t=6.322~8.555,P<0.05),miR-130b-3p表达下调(t=3.950~18.795,P<0.05)。2 Gy照射并沉默CCAT1,PANC-1细胞存活分数降低(t=2.929、5.047、5.234、5.125,P<0.05),细胞凋亡率增加(t=6.953, P<0.05),Caspase 3活性升高(t=6.836, P<0.05)。发现CCAT1能靶向调控miR-130b-3p表达,抑制miR-130b-3p表达,PANC-1细胞存活分数增大(t=4.564、6.736、8.656,P<0.05),细胞凋亡减少(t=5.234,P<0.05),Caspase 3活性降低(t=10.440,P<0.05)。结论沉默CCAT1表达能够促进miR-130b-3p表达,从而增加PANC-1细胞放射敏感性。

miR-130b-3p和其靶基因在PCOS患者颗粒细胞中的表达研究

目的:探讨miR-130b-3p和其靶基因在多囊卵巢综合征(PCOS)患者颗粒细胞中表达的意义。方法:选取2019年10月至2020年6月于我院就诊且行体外受精/卵泡浆内单精子显微注射-胚胎移植(IVF/ICSIET)助孕治疗的35例PCOS患者作为PCOS组。另招募年龄、体质量指数(BMI)等相匹配的卵巢功能正常因男方因素或者单纯输卵管因素接受IVF/ICSI-ET助孕治疗的30例患者作为对照组。采用密度梯度离心法收集纯化颗粒细胞;利用生物信息学技术预测miR-130b-3p的下游靶基因;利用双荧光素酶实验验证miR-130b-3p的靶基因,在转染实验中将细胞分为miR-130b-3p模拟物组、miR-130b-3p抑制物组和各自的对照组;采用CCK8法检测细胞的增殖;采用流式细胞仪检测人卵巢颗粒细胞瘤细胞(KGN细胞)的凋亡指数;采用蛋白印迹法检测Smad4的表达水平。结果:PCOS组miR-130b-3p的表达水平(1.45±0.20)显著高于对照组(0.82±0.17)(P<0.05);KGN细胞miR-130b-3p的表达水平(2.30±0.19)显著高于人正常卵巢上皮细胞(ISOE80细胞)(0.98±0.05)(P<0.05);miR-130b-3p模拟物组的KGN细胞增殖活性显著高于其他3组,而凋亡率显著低于其他3组,均P<0.05。双荧光素酶实验证实,miR-130b-3p与Smad4具有靶向调节关系。PCOS组的Smad4蛋白的表达水平显著低于对照组,KGN细胞Smad4的蛋白表达水平显著低于ISOE80细胞,均P<0.05。结论:miR-130b-3p调节PCOS患者颗粒细胞的增殖和凋亡,参与PCOS的发病。

MiR-130b-3p抑制膀胱癌细胞增殖迁移侵袭的机制研究

【目的】研究miR-130b-3p对膀胱癌细胞EJ增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其机制。【方法】运用Western blotting检测人膀胱癌细胞EJ、人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中富亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域(leucine-rich repeats and immuno globulin-like domains 1,LRIGl)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)的蛋白表达;将anti-miR-130b-3p组(转染anti-miR-130b-3p)、anti-miR-NC组(转染anti-miRNC)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-LRIGl组(转染pcDNA-LRIGl)、anti-miR-130b-3p+si-con组(anti-miR-130b-3p和sicon共转染)、anti-miR-130b-3p+si-LRIGl组(anti-miR-130b-3p和si-LRIGl共转染),均用脂质体法转染至EJ细胞;qRT-PCR检测各组细胞中miR-130b-3p、LRIGl的mRNA表达;MTT法检测各组细胞的细胞增殖;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。Transwell小室实验检测各组细胞的迁移、侵袭。【结果】与人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1细胞相比,人膀胱癌细胞EJ中miR-130b-3p表达显著升高,LRIGl表达显著降低(P<0.05);抑制miR-130b-3p、过表达LRIGl均可抑制EJ细胞增殖、迁移、侵袭;LRIGl是miR-130b-3p的靶标。敲减LRIGl可逆转抑制miR-130b-3p对EJ细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。【结论】MiR-130b-3p可促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向LRIGl有关,该研究将可为膀胱癌的靶向治疗提供新思路。