鸡gga-miR-31-5p启动子真核表达载体的构建及其转录因子结合位点预测

为确定鸡gga-miR-31-5p启动子基本活性区域,并分析调控其转录的重要转录因子,初步探究影响鸡gga-miR-31-5p的表达调控机制,采用PCR法扩增鸡gga-miR-31-5p启动子,插入到pEGFP-N1载体,构建重组载体。利用菌液PCR及测序鉴定阳性重组质粒。将重组载体转染DF-1细胞系,观察其启动活性。利用在线预测网站预测gga-miR-31-5p启动子区域的转录因子结合位点。结果显示,成功克隆出gga-miR-31-5p启动子片段,并成功构建其pEGFP重组载体。体外转染结果表明,该区域具有启动活性,并发现鸡gga-miR-31-5p启动子区域存在RARα、ER、c-Jun、GR等重要转录因子结合位点。研究初步确定了鸡gga-miR-31-5p启动子区域,同时发现该区域存在重要转录因子结合位点,该结果为后续探讨进一步研究gga-miR-31-5p启动子的生物学功能奠定基础。

lncRNA TUG1靶向调节miR-31-5p对急性胰腺炎小鼠炎症反应的影响

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)在急性胰腺炎(AP)中的作用机制。方法:体外培养小鼠胰腺腺泡细胞系(MPC-83),用脂多糖(LPS,10μg/ml)和雨蛙素(Caerulein,100 nmol/L)处理3 h,建立AP模型。实验分为对照组(control组)、AP组、AP+sh-NC组、AP+sh-TUG1组、AP+sh-TUG1+inhibitor-NC组、AP+sh-TUG1+miR-31-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中lncRNA TUG1和miR-31-5p表达水平;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测细胞上清液中IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA TUG1和miR-31-5p之间的靶向关系。构建AP小鼠模型,给予相应的干预后,qRT-PCR检测胰腺组织中lncRNA TUG1和miR-31-5p表达水平;试剂盒检测血清中炎症因子IL-1β、TNF-α含量和淀粉酶(AMY)和脂肪酶(Lipase)活性;HE染色观察胰腺组织病理学变化;TUNEL检测胰腺组织中细胞凋亡。结果:在Caerulein和LPS共同处理的MPC-83细胞中lncRNA TUG1水平、细胞凋亡率、IL-1β和TNF-α水平升高,miR-31-5p水平、细胞活力降低(均P<0.05);敲低lncRNA TUG1可上调miR-31-5p,增加细胞活力,降低IL-1β和TNF-α水平,抑制细胞凋亡(均P<0.05);下调miR-31-5p表达可减弱敲低lncRNA TUG1对细胞炎症反应的抑制作用。miR-31-5p是lncRNA TUG1的直接靶标。在体内敲低lncRNA TUG1表达可上调AP小鼠胰腺组织中miR-31-5p表达,降低IL-1β、TNF-α水平,减少细胞凋亡,改善胰腺组织损伤。结论:敲低lncRNA TUG1可能通过上调miR-31-5p表达水平,抑制炎症反应,改善AP。

circLRP6调节miR-31-5p/HMGA1轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的分析circLRP6调节miR-31-5p/高迁移率族蛋白A1(HMGA1)轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-circLRP6组、高糖+si-circLRP6+miR-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组,对照组置于含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,其余各组置于含25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,并通过Lipofectamine 2000将相应质粒转染至HK-2细胞内,实时定量PCR测定细胞circLRP6、miR-31-5p、HMGA1 mRNA水平,试剂盒测定细胞上清液白细胞介素-6(IL-6)水平、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪观察细胞凋亡;Western blotting测定细胞HMGA1、Bax、Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验分析miR-31-5p与circLRP6、HMGA1的靶向关系。结果与对照组相比,高糖组HK-2细胞circLRP6水平升高,细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖组相比,高糖+si-circLRP6组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05)。miR-31-5p与circLRP6、HMGA1均具有靶向关系。结论沉默circLRP6可能通过上调miR-31-5p,抑制HMGA1表达,对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用。

子痫前期孕妇血清miR-424、miR-31-5p水平与胎儿生长受限的相关性分析

目的探究子痫前期孕妇血清微小RNA-424(miR-424)、微小RNA-31-5p(miR-31-5p)水平与胎儿生长受限(FGR)的相关性。方法选取2019年9月至2022年9月该院收治的122例子痫前期孕妇作为研究对象,根据是否发生FGR分为FGR组(62例)与非FGR组(60例)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-424、miR-31-5p的相对表达水平。采用Pearson相关分析子痫前期患者血清miR-424、miR-31-5p表达水平与尿酸、胎儿双顶径、胎儿股骨长度的关系。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-424、miR-31-5p单独及联合检测对子痫前期孕妇发生FGR的诊断价值。采用多因素Logistic回归分析子痫前期孕妇发生FGR的影响因素。结果FGR组尿酸水平明显高于非FGR组,胎儿双顶径、胎儿股骨长度均明显低于非FGR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。FGR组血清miR-424、miR-31-5p表达水平均明显高于非FGR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,子痫前期患者血清miR-424、miR-31-5p表达水平与尿酸水平均呈正相关(P<0.05),与胎儿双顶径、胎儿股骨长度均呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-424、miR-31-5p联合诊断FGR的曲线下面积(AUC)高于各指标单独诊断的AUC(Z_(miR-424 vs.miR-424+miR-31-5p)=2.500,P=0.012;Z_(miR-31-5p vs.miR-424+miR-31-5p)=3.521,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清miR-424高表达、miR-31-5p高表达是子痫前期孕妇发生FGR的危险因素(P<0.05)。结论子痫前期发生FGR孕妇血清miR-424、miR-31-5p表达水平明显升高,二者联合诊断FGR发生的效能较单一指标高。

MiR-31-5p在癌症中的研究进展

MicroRNAs(mi RNAs)是一类长度约22个碱基的非编码RNA,通过与mRNA 3'-非翻译区域(3'-UTR)的特定靶位点结合,导致mRNA的降解或翻译抑制参与关键的生物学过程^([1])。大量研究表明,miRNAs在肿瘤组织或细胞中异常表达,可作为癌症诊断、治疗效果和预后评估的分子标志物。人类mi R-31基因位于9p21.3染色体上^([2])。miR-31基因转录后,形成的初级转录本(pri-miR-31)被Drosha复合物加工成具有茎环结构的前体RNA(pre-miR-31),pre-miR-31在Dicer的作用下,进一步裂解为miR-31-5p和miR-31-3p。

慢性乙型病毒性肝炎病人血浆中LncRNA PVT1、微RNA-31-5p表达水平与炎症损伤程度的相关性分析

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)人浆细胞瘤转化迁移基因1()、微RNA-31-5p(miR-31-5p)在慢性乙型病毒性肝炎(CHB)病人血浆中的表达情况,并分析其与炎症损伤程度的关系。方法选取东莞市人民医院2019年12月至2020年12月确诊的180例CHB病人为CHB组,所有病人均行肝穿刺活检,根据CHB病人炎症损伤程度分为G1组(66例),G2组(58例),G3组(41例),G4组(15例),根据肝纤维化程度进行分组,无明显肝纤维化(S0,S1)组(64例),明显肝纤维化组(S2,S3)(78例),早期肝硬化(S4)组(38例)。同时选取55例健康者为对照组。收集CHB组和对照组的一般资料,分别检测两组血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-10、超敏C反应蛋白(Hs-CRP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、谷氨酰基转移酶(GGT)等指标水平;采用实时荧光定量PCR法对血清中LncRNA PVT1、miR-31-5p表达水平进行检测,Pearson法分析LncRNA PVT1、miR-31-5p表达的相关性。结果CHB病人血清中LncRNA PVT1(1.52±0.31、1.93±0.47、2.57±0.63、3.42±1.03)表达水平高于对照组0.68±0.23,且LncRNA PVT1表达水平随着炎症损伤程度加重而升高,miR-31-5p表达水平(0.85±0.22、0.79±0.18、0.63±0.14、0.50±0.11)低于对照组0.96±0.24,且miR-31-5p表达水平随着炎症损伤程度加重而降低,差异有统计学意义(P<0.05);CHB组病人TNF-α(108.13±30.32)ng/L、IL-6(68.50±22.59)ng/L、IL-1β(358.92±36.80)ng/L、IL-10(75.25±18.99)ng/L、Hs-CRP(11.22±3.15)mg/L、ALT(57.13±9.34)U/L、AST(37.86±5.56)U/L、GGT水平(33.21±10.62)U/L均显著高于对照组[(38.49±19.88)ng/L、(19.12±3.21)ng/L、(169.05±5.24)ng/L、(16.56±2.34)ng/L、(1.68±0.56)mg/L、(24.62±7.95)U/L、(22.32±4.26)U/L、(26.94±8.32)U/L](P<0.05);CHB组病人血清中LncRNA PVT1表达与TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、Hs-CRP、ALT、AST、GGT均呈正相关(P<0.05),miR-31-5p与TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、Hs-CRP、ALT、AST、GGT均呈负相关(P<0.05);CHB病人血清中LncRNA PVT1、miR-31-5p的表达呈明显负相关(r=−0.36,P<0.05)。结论CHB病人血清中LncRNA PVT1表达升高,miR-31-5p表达降低,且二者均与炎症损伤程度有关。

鼻咽癌患者外周血中循环miR-31-5p表达及临床意义

目的探讨miR-31-5p在鼻咽癌患者外周血中的表达及临床意义。方法应用荧光定量PCR检测55例鼻咽癌患者和55例健康人外周血miR-31-5p相对表达量,分析两者之间的表达差异,探讨其与鼻咽癌患者临床病理特征以及放疗的关系。结果 miR-31-5p在鼻咽癌患者外周血中的表达水平明显低于健康人(P <0.01);鼻咽癌患者外周血miR-31-5p的表达水平与肿瘤T分期、局部有无淋巴转移、临床分期相关,但与性别、年龄及是否发生远处转移不相关。同时,放疗抵抗组miR-31-5p表达水平较放疗敏感组下降(P <0.01)。结论 miR-31-5p的低表达与鼻咽癌的发展及放疗有关,它可能成为鼻咽癌新的肿瘤标志物和治疗靶点。

gga-miR-142-5p负调控chMDA5抗传染性法氏囊病病毒感染的分子机制

传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种高度危害养鸡业的传染病。chMDA5在识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMPs)及激活宿主的天然免疫应答中具有重要的作用,但chMDA5识别IBDV的分子机制仍然不清楚。本研究用IBDV感染DT40细胞,在IBDV感染的DT40细胞中,chMDA5的表达水平显著升高。chMDA5过表达可以抑制IBDV的复制,并激活IFN-β promoter和Mx promoter活性,chMDA5抑制表达则得到相反的结果;chMDA5激活IFN-β promoter活性主要是通过IRF7通路。用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析发现gga-miR-142-5p可作用于chMDA5的3'UTR;qRT-PCR和免疫印迹分析表明gga-miR-142-5p可以使chMDA5的蛋白水平表达降低,但mRNA水平没有变化;gga-miR-142-5p可依赖IRF7通路使IFN-β promoter和Mx promoter活性降低,IBDV复制水平升高。本研究表明,gga-miR-142-5p可以作用于chMDA5的3'UTR负调控chMDA5的表达从而影响其下游IFN-β promoter和Mx promoter活性来发挥抗IBDV感染的作用。

miR-30a-5p靶向调控TRIM31表达对结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药的逆转作用及其机制

目的:探讨miR-30a-5p靶向三结构域蛋白31(TRIM31)基因对结直肠癌(CRC)细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响,并阐明其作用机制。方法:收集27例5-FU化疗敏感(5-FU/S组)CRC患者和23例5-FU化疗耐药(5-FU/R组)CRC癌患者的CRC组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测癌组织中miR-30a-5p和TRIM31 mRNA表达水平,Pearson相关分析法分析miR-30a-5p和TRIM31 mRNA表达的相关性。体外培养人CRC 5-FU耐药细胞HT-29/5-FU细胞及其亲本HT-29细胞,MTT法检测2种细胞增殖活性并计算半数抑制浓度(IC50)和耐药指数(RI),RT-qPCR法检测2种细胞中miR-30a-5p和TRIM31 mRNA表达水平,Western blotting法检测2种细胞中TRIM31蛋白表达水平。将HT-29/5-FU细胞分为空白对照组、mimics NC组(转染miR-30a-5p阴性对照mimics NC)、miR-30a-5p mimics组(转染miR-30a-5p mimics)、miR-30a-5p mimics+vector组(转染miR-30a-5p mimics和阴性对照空载体)和miR-30a-5p mimics+TRIM31组(转染miR-30a-5p mimics和TRIM31过表达载体)。RT-qPCR法检测各组HT-29/5-FU细胞中miR-30a-5p和RTIM31 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组HT-29/5-FU细胞中TRIM31蛋白表达水平,MTT法检测各组HT-29/5-FU细胞增殖活性,流式细胞术检测各组HT-29/5-FU细胞凋亡率,双荧光素酶报告基因系统验证miR-30a-5p与TRIM31的靶向关系。结果:与5-FU/S组比较,5-FU/R组患者CRC组织中miR-30a-5p表达水平降低(P<0.01),TRIM31 mRNA表达水平升高(P<0.01),miR-30a-5p和TRIM31 mRNA表达水平呈负相关关系(R2=0.885,P<0.01)。与HT-29细胞比较,HT-29/5-FU细胞中miR-30a-5p表达水平降低(P<0.01),TRIM31 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01)。HT-29/5-FU细胞和HT-29细胞的IC50值分别为(104.41±0.22)和(9.82±0.31)mg·L^(-1),RI值为12.42。与空白对照组和mimics NC组比较,miR-30a-5p mimics组HT-29/5-FU细胞中miR-30a-5p表达水平升高(P<0.01),TRIM31蛋白表达水平降低(P<0.01),HT-29/5-FU细胞增殖活性明显降低(P<0.01),HT-29/5-FU细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。与miR-30a-5p mimics组比较,miR-30a-5p mimics+TRIM31组HT-29/5-FU细胞中TRIM31蛋白表达水平升高(P<0.01),HT-29/5-FU细胞增殖活性明显升高(P<0.01),HT-29/5-FU细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因系统证实TRIM31是miR-30a-5p的靶基因。结论:miR-30a-5p通过靶向TRIM31基因表达增强CRC耐药细胞对5-FU的敏感性。

miR-31-5p通过调控TNS1抑制乳腺癌细胞生物学行为及放疗抵抗的分子机制

目的:探讨miR-31-5p/张力蛋白1基因(tension protein 1,TNS1)分子轴对乳腺癌细胞生物学行为的影响及其放疗抵抗的分子机制。方法:收集2017年7月至2017年12月南阳市中心医院肿瘤放疗科收治的、经手术切除的21例乳腺癌患者癌及癌旁组织标本,以及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和SKBR-3,采用qPCR法检测癌组织和癌细胞系中miR-31-5p的表达水平。通过6 MV-X射线照射MCF-7细胞,构建放疗抵抗细胞株MCF-7R。随后,采用克隆形成实验、Transwell小室法和Annexin V/PI染色流式细胞术检测过表达/敲降miR-31-5p对MCF-7和MCF-7R细胞放疗敏感性的影响;用双荧光素酶报告基因验证miR-31-5p与TNS1的靶向关系。结果:乳腺癌组织、细胞系和MCF-7R细胞中miR-31-5p表达水平显著低于癌旁组织、人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和MCF-7细胞(均P<0.01)。过表达miR-31-5p显著抑制MCF-7R细胞的侵袭并促进细胞凋亡(均P<0.01),沉默miR-31-5p在MCF-7细胞中结果相反。双荧光素酶报告基因法证实TNS1是miR-31-5p靶基因。过表达miR-31-5p通过靶向下调TNS1显著抑制MCF-7R细胞侵袭能力并促进细胞凋亡(均P<0.01),沉默miR-31-5p通过上调TNS1显著促进MCF-7细胞侵袭和抑制细胞凋亡(均P<0.01),从而上调MCF-7R对放射治疗的敏感性。结论:miR-31-5p/TNS1分子轴与乳腺癌放疗抵抗存在调控关系,且过表达miR-31-5p可逆转MCF-7R细胞对放疗抵抗作用。

miR-31-5p通过靶向抑制胰岛素降解酶发挥促进动脉粥样硬化作用

目的探讨miR-31-5p是否通过靶向抑制胰岛素降解酶(IDE)发挥促进动脉粥样硬化作用。方法应用生物信息学和双荧光素酶技术筛选并验证miR-31-5p与IDE 3’UTR靶向结合情况。miR-31-5p mimic和inhibitor转染THP-1巨噬细胞及THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞;采用miR-31-5p agomir处理高脂饮食的ApoE^(-/-)小鼠;Western blot检测IDE蛋白表达;ELISA检测ApoE^(-/-)小鼠血浆脂质水平;油红O染色检测小鼠肝脏脂质蓄积及主动脉粥样硬化斑块病变。结果 miR-31-5p靶向结合IDE 3’UTR并引起转录抑制;miR-31-5p可下调THP-1细胞、小鼠肝脏和主动脉组织中IDE蛋白表达(P<0.05),同时引起泡沫细胞和小鼠血清中脂质含量增加(P<0.05),小鼠主动脉窦和主动脉树病变面积明显增加(P<0.05)。结论 miR-31-5p可通过靶向抑制IDE发挥促进动脉粥样硬化作用。

miR-31-5p对牙髓干细胞HIF-1α/BNIP3信号通路及成骨相关因子表达的影响

目的 :探讨微小RNA-31-5p(miR-31-5p)对牙髓干细胞(DPSCs)低氧诱导因子1α(HIF-1α)/Bcl-2/腺病毒E1B 19-kDa相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路及成骨相关因子表达的影响。方法 :体外培养人DPSCs,分为对照组(不转染)、mimic NC组(转染negative control-miR-31-5p)、miR-31-5p mimic组(转染hsa-miR-31-5p mimic)、si RNA NC组(转染nonsense siRNA)和miR-31-5p siRNA组(转染miR-31-5p siRNA)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组DPSCs细胞中miR-31-5p、HIF-1α、BNIP3、碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录子2(Runx2)mRNA的表达情况,MTT法检测各组DPSCs细胞增殖情况,ALP活性测定试剂盒检测各组DPSCs细胞ALP活性,蛋白印迹(WB)法检测各组DPSCs细胞中HIF-1α、BNIP3、Runx2蛋白的表达情况。采用SPSS 24.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与对照组、mimic NC组相比,miR-31-5p mimic组DPSCs细胞A值、ALP mRNA表达水平及活性、Runx2 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),ALP染色明显减弱,miR-31-5p mRNA、HIF-1α、BNIP3 mRNA及HIF-1α、BNIP3、Beclin1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与对照组、siRNA NC组相比,miR-31-5p siRNA组DPSCs细胞A值、ALP mRNA表达水平及活性、Runx2 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05),ALP染色明显增强,miR-31-5p mRNA、HIF-1α、BNIP3 mRNA及HIF-1α、BNIP3、Beclin1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论 :miR-31-5p可以激活HIF-1α/BNIP3信号通路,抑制DPSCs细胞的成骨相关因子表达。

miR-31-5p在急性髓系白血病中的表达下调

目的探讨miR-31-5p在急性髓系白血病中的表达变化,及其对白血病细胞功能的影响。方法用real-time PCR方法检测miR-31-5p在白血病患者及正常人外周血单个核细胞中的表达;用miR-31-5p模拟物转染人急性髓系白血病细胞系THP-1细胞,通过CCK-8试验和流式细胞术检测细胞增殖和单核系分化;用荧光报告基因和Western blot方法检测靶基因HuR的表达;用RNAi方法干扰内源性HuR的表达,并检测THP-1细胞的增殖和单核系分化。结果 miR-31-5p在急性髓系白血病患者外周血单个核细胞中的表达显著低于正常对照(P<0.05);在THP-1细胞中过表达miR-31-5p可以抑制细胞增殖,并促进细胞向单核方向分化成熟;HuR为miR-31-5p的靶基因;干扰THP-1内源的HuR表达也会对THP-1的增殖和单核分化产生调控作用。结论 miR-31-5p在急性髓系白血病发生中可通过靶向抑制HuR发挥抑癌基因功能。

口腔鳞状细胞癌组织miR-31-5p、LATS2表达变化及其临床意义

目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织微小RNA-31-5p(miR-31-5p)、大肿瘤抑制激酶2(LATS2)表达变化及其临床意义。方法选择OSCC患者97例,取术中切除的OSCC组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR法检测miR-31-5p、LATS2 mRNA表达。比较OSCC组织与癌旁正常组织miR-31-5p、LATS2 mRNA表达,通过在线网站预测miR-31-5p与LATS2的靶向结合位点,并分析二者表达的关系及其与患者临床病理特征的关系。分析不同miR-31-5p、LATS2 mRNA表达与OSCC患者预后的关系。采用多因素Cox回归模型分析OSCC患者预后的影响因素。结果OSCC组织miR-31-5p相对表达量高于癌旁正常组织,LATS2 mRNA相对表达量低于癌旁正常组织(t分别为35.314、40.900,P均<0.01)。经在线网站预测,miR-31-5p与LATS2存在靶向结合位点。Pearson相关分析显示,OSCC组织miR-31-5p表达与LATS2 mRNA表达呈负相关关系(r=-0.688,P<0.01)。OSCC组织miR-31-5p、LATS2 mRNA表达与肿瘤组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤直径无关(P均>0.05)。97例OSCC患者中,miR-31-5p表达≥3.258者55例、miR-31-5p表达<3.258者42例,LATS2 mRNA表达≥1.216者40例、LATS2 mRNA表达<1.216者57例。miR-31-5p表达≥3.258者3年累积生存率低于miR-31-5p表达<3.258者,LATS2 mRNA表达≥1.216者3年累积生存率高于LATS2 mRNA表达<1.216者(χ^(2)分别为5.829、6.616,P均<0.05)。所有患者术后随访4~36个月,中位随访时间26个月,随访期间死亡31例。多因素Cox比例风险回归分析显示,TNM分期Ⅲ、Ⅳ期及有淋巴结转移、miR-31-5p表达≥3.258为OSCC患者死亡的独立危险因素,而LATS2 mRNA表达≥1.216则为其独立保护因素(P均<0.05)。结论OSCC组织miR-31-5p高表达、LATS2低表达,二者表达变化与肿瘤组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移以及患者预后有关。

miR-31-5p对胰岛β细胞增殖及2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的影响

目的研究miR-31-5p对胰岛β细胞系MIN6细胞增殖的影响,以及对2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的作用。方法培养胰岛MIN6细胞,将MIN6细胞分为miR-31-5p mimic组、miR-31-5p mimic NC组、miR-31-5p inhibitor组、miR-31-5p inhibitor NC组。采用脂质体介导法转染MIN6细胞,转染48h后RT-PCR检测细胞miR-31-5p表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附法测定检测细胞分泌胰岛素的水平。C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、造模组,正常对照组小鼠基础饲料喂养并腹腔注射等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,造模组小鼠高脂高糖饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素30mg/kg构建2型糖尿病小鼠模型。将建模成功的2型糖尿病小鼠随机分为miR-31-5p NC组(尾静脉注射50mg/kg miR-31-5p NC)与miR-31-5p inhibitor组(尾静脉注射50mg/kg miR-31-5p inhibitor),21天后HE染色观察小鼠胰腺组织病理学形态,免疫组织化学染色观察胰岛素与裂解caspase-3的阳性表达情况。结果转染miR-31-5p mimic和miR-31-5p inhibitor分别增加或抑制了MIN6细胞中miR-31-5p的表达水平;转染miR-31-5p mimic的MIN6细胞增殖能力下降而转染miR-31-5p inhibitor的MIN6细胞增殖能力提高;20mmol/L葡萄糖的KRBH溶液刺激下转染miR-31-5p mimic的MIN6细胞胰岛素的分泌受到抑制,而转染miR-31-5p inhibitor的细胞胰岛素分泌量增加;成功构建2型糖尿病小鼠模型,静脉注射50mg/kg miR-31-5p inhibitor NC的2型糖尿病小鼠出现胰岛萎缩、胰岛细胞细胞核固缩且胞质空泡增多等现象,裂解caspase-3的阳性表达明显,静脉注射50mg/kg miR-31-5p inhibitor的2型糖尿病小鼠胰腺组织病理变化明显改善,裂解caspase-3的阳性表达也减少。结论抑制miR-31-5p的表达可以促进MIN6细胞系的增殖和在高糖刺激下胰岛素的分泌,并且改善2型糖尿病小鼠胰腺病变的现象。

微小RNA-31-5p调控蛋白激酶Cε通路在远程缺血预处理保护兔脊髓缺血再灌注损伤中的作用机制

目的探讨微小RNA-31-5p(miR-31-5p)在远程缺血预处理(RIPC)保护兔脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)中的作用及其机制。方法将60只日本大耳白兔分为假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组、RIPC组、RIPC+miR-NC组、RIPC+miR-31-5p mimic组,每组12只。采用夹闭腹主动脉30 min建立SCIRI模型,通过鞘内注射miR-31-5p mimic质粒构建miR-31-5p过表达模型,除sham组和I/R组外,其余各组于闭腹主动脉前1 h实施RIPC。再灌注48 h后,对动物进行后肢运动功能评分和血-脊髓屏障(BSCB)通透性检测;苏木精-伊红(HE)染色观察脊髓组织形态学变化;TUNEL检测脊髓组织神经元凋亡情况;逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测脊髓组织miR-31-5p和蛋白激酶Cε(PKCε)和脑源性神经营养因子(BDNF)的mRNA表达;Western Blot检测脊髓组织PKCε、BDNF蛋白表达。结果与sham组相比,I/R组后肢运动功能评分降低,伊文思蓝(EB)含量、神经元凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05),且脊髓神经元数量减少,空泡化明显,胞核固缩;与I/R组相比,RIPC组后肢运动功能评分、PKCε和BDNF的mRNA和蛋白表达增加,EB含量、神经元凋亡率、miR-31-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),且正常神经元明显增多,少数细胞空泡变性,核仁明显;使用miR-31-5p mimic上调miR-31-5p的表达可显著减弱RIPC对兔SCIRI的保护作用(P<0.05)。结论 miR-31-5p的表达在RIPC后降低,并可通过激活PKCε蛋白,上调脊髓组织中BDNF的表达,减轻SCIRI。

黄芪白术汤下调miR-31-5p/STAT3环路抑制结肠炎相关性结肠癌进程

目的探讨miR-31-5p/STAT3在结肠炎相关性结肠癌(colitis-associated cancer,CAC)发病机制中的作用,以及黄芪白术汤的干预机制。方法采用氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)方法建立C57BL/6小鼠CAC模型,并检测对照组和CAC模型小鼠中microRNA的差异表达。qPCR验证筛选差异microRNA;Western blot检测STAT3、p-STAT3、IL-6Rα的表达水平。结果一次性腹腔注射AOM,结合3%DSS自由饮用3个循环造模,8周后模型小鼠结肠黏膜出现中、重度异型增生,并伴随大量炎细胞浸润,经检测,CAC小鼠结肠组织中miR-31-5p及STAT3、p-STAT3蛋白的表达明显升高;黄芪白术汤干预后,miR-31-5p及STAT3、p-STAT3蛋白的表达下调。体外研究表明,RAW264.7细胞转染miR-31-5p precursor后,STAT3蛋白明显增高;促炎因子IL-6、TNF-α刺激RAW264.7 24 h后,miR-31-5p水平也明显升高,提示炎症因子可引起miR-31-5p/STAT3的正相关上调。同时,白术内酯Ⅱ+黄芪甲苷混合物可明显下调IL-6刺激引起的miR-31-5p、STAT3、IL-6Rα增高。结论miR-31-5p/STAT3在上皮细胞与免疫细胞之间可能形成一个正反馈的环路,在CAC病理微环境中发挥持续放大炎症效应,最终导致结肠上皮的异型增生,甚至肿瘤发生。

子痫前期并发幽门螺旋杆菌感染患者血清miR-31-5p表达与不良妊娠结局的相关性研究

目的探究血清微小核糖核酸-31-5p(miR-31-5p)表达与子痫前期(PE)并发幽门螺旋杆菌(Hp)感染患者不良妊娠结局的相关性。方法选取2019年1月~2020年5月在唐山市妇幼保健院就诊的204例PE并发Hp感染患者作为研究对象,并根据妊娠结局将其分为不良妊娠组(n=121)和正常妊娠组(n=83)。用实时荧光定量PCR法检测PE确诊时(T0)、妊娠28周第1天(T1)和妊娠30周第1天(T2)的血清miR-31-5p表达量。结果不良妊娠组的收缩压、舒张压、24 h尿蛋白和剖宫产率分别为155.64±11.89mmHg,101.25±6.16mmHg,2.69±0.52g/24 h和85.95%,均高于正常妊娠组(151.75±11.34mmHg,97.93±8.79mmHg,2.06±0.29g/24 h和65.06%);分娩孕周为34.79±2.06周,低于正常妊娠组(37.94±0.97周),差异均有统计学意义(t/χ^(2)=2.344~14.631,均P<0.05)。不良妊娠组的血清T0-miR-31-5p,T1-miR-31-5p和T2-miR-31-5p相对表达量分别为2.42±0.39,2.20±0.42和2.10±0.25,均高于正常妊娠组(2.11±0.32,1.76±0.33和1.69±0.20),差异均有统计学意义(t=6.025~12.657,均P=0.000)。T2-miR-31-5p预判PE并发Hp感染患者妊娠结局的受试者工作特征曲线下面积高于T0-miR-31-5p和T1-miR-31-5p,差异均有统计学意义(Z=4.957,P=0.000;Z=3.009,P=0.003)。Logistic回归分析结果显示24 h尿蛋白高(OR=15.250,95CI:2.804~81.781)、剖宫产(OR=7.954,95%CI:1.416~44.675)和T2-miR-31-5p高(OR=24.479,95%CI:6.365~94.148)是PE并发Hp感染患者妊娠结局不良的独立危险因素,分娩孕周长(OR=0.244,95%CI:0.132~0.452)是PE并发Hp感染患者妊娠结局不良的独立保护因素。结论血清T2-miR-31-5p表达量高与PE并发Hp感染患者不良妊娠结局有关。

miRNA-31-5p和SATB2的表达对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响机制

目的:探讨微小RNA-31-5p(microRNA-31-5p,miRNA-31-5p)和核基质结合蛋白质2(special AT-rich sequence-binding protein 2,SATB2)在乳腺癌中的表达,以及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。方法:选取2017年3月至2020年12月于天津医科大学总医院收治行外科切除的80例乳腺癌患者的临床病理资料,定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织标本和各细胞系中miRNA-31-5p和SATB2 mRNA表达。双荧光素酶实验证明miRNA-31-5p和SATB2的关系。细胞实验分为正常组(未行任何干预),miRNA-31-5p-agomir-对照组(细胞转染miRNA-31-5p-agomir-NC),miRNA-31-5p激动剂组(细胞转染miRNA-31-5p-agomir),pcDNA3.1组(细胞转染miRNA-31-5p-agomir+pcDNA3.1-SATB2)。EDU染色、Transwell小室实验检测各组细胞的体外增殖与转移活性;裸鼠皮下种植乳腺癌模型检测细胞的体内生长、转移能力;Western blot检测SATB2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:与癌旁组织和乳腺正常细胞相比,miRNA-31-5p在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中的表达下降,SATB2 mRNA表达升高;miRNA-31-5p能靶向调控SATB2表达;与正常组相比,miRNA-31-5p激动剂组细胞的体外增殖与转移以及体内生长与转移能力均明显下降,SATB2和Vimentin的表达降低,E-cadherin的表达升高,而转染pcDNA3.1-SATB2后可部分逆转这一抑制作用,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论:miRNA-31-5p在乳腺癌中的表达降低,SATB2的表达升高,过表达miRNA-31-5p后能明显抑制MDA-MB-231细胞的体外增殖与转移、体内生长与转移能力,但转染pcDNA3.1-SATB2可部分逆转这一抑制作用。

土木香提取物通过下调miR-31-5p表达调控宫颈癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的:研究土木香提取物(EEIHL)对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法:用0 μg/ml、2 μg/ml、4 μg/ml、6 μg/ml和8 μg/ml的土木香提取物(EEIHL)处理宫颈癌HeLa细胞48 h,MTT法和流式细胞术检测HeLa细胞增殖抑制率和细胞凋亡率,qRT-PCR检测细胞中miR-31-5p的表达,Western blot检测CyclinD1和Cleave-caspase-3蛋白表达水平。结果:EEIHL可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖并促进细胞凋亡,下调细胞中miR-31-5p和CyclinD1的表达,上调Cleave-caspase-3的表达,呈剂量依赖趋势,在6 μg/ml和8 μg/ml时达到最高增殖抑制率;抑制miR-31-5p表达可抑制HeLa增殖并促进细胞凋亡;过表达miR-31-5p可逆转EEIHL对HeLa细胞增殖和凋亡的作用。结论:土木香提取物EEIHL可能通过下调miR-31-5p抑制HeLa细胞增殖和促进细胞凋亡。EEIHL对宫颈癌具有潜在抑制作用。