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Activation of endogenous neurogenesis and angiogenesis by basic fibroblast growth factor-chitosan gel in an adult rat model of ischemic stroke 被引量:3
1
作者 Hongmei Duan Shulun Li +11 位作者 Peng Hao Fei Hao Wen Zhao Yudan Gao Hui Qiao Yiming Gu Yang Lv Xinjie Bao Kin Chiu Kwok-Fai So Zhaoyang Yang Xiaoguang Li 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2024年第2期409-415,共7页
Attempts have been made to use cell transplantation and biomaterials to promote cell proliferation,differentiation,migration,and survival,as well as angiogenesis,in the context of brain injury.However,whether bioactiv... Attempts have been made to use cell transplantation and biomaterials to promote cell proliferation,differentiation,migration,and survival,as well as angiogenesis,in the context of brain injury.However,whether bioactive materials can repair the damage caused by ischemic stroke by activating endogenous neurogenesis and angiogenesis is still unknown.In this study,we applied chitosan gel loaded with basic fibroblast growth factor to the stroke cavity 7 days after ischemic stroke in rats.The gel slowly released basic fibroblast growth factor,which improved the local microenvironment,activated endogenous neural stem/progenitor cells,and recruited these cells to migrate toward the penumbra and stroke cavity and subsequently differentiate into neurons,while enhancing angiogenesis in the penumbra and stroke cavity and ultimately leading to partial functional recovery.This study revealed the mechanism by which bioactive materials repair ischemic strokes,thus providing a new strategy for the clinical application of bioactive materials in the treatment of ischemic stroke. 展开更多
关键词 adult endogenous neurogenesis ANGIOGENESIS basic fibroblast growth factor-chitosan gel CHITOSAN functional recovery ischemic stroke neural stem cell newborn neuron
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Expression and effect of basic fibroblast growth factor on human cataract lens epithelial cells 被引量:1
2
作者 申屠形超 姚克 +2 位作者 孙朝晖 徐雯 吴仁毅 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2002年第2期268-271,156,共4页
OBJECTIVE: To detect the expression of basic fibroblast growth factor (bFGF) in human ocular tissues, and to assess the effect of bFGF on the proliferation of human cataract lens epithelial cells (LECs) and its correl... OBJECTIVE: To detect the expression of basic fibroblast growth factor (bFGF) in human ocular tissues, and to assess the effect of bFGF on the proliferation of human cataract lens epithelial cells (LECs) and its correlation with age. METHODS: Enucleated eyes were subjected to immunostaining for bFGF protein. Human cataract LECs were cultured in vitro, and treated with bFGF for 48 hr. Proliferation was estimated by the positive area ratio of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in immunohistochemistry. RESULTS: bFGF protein was found in various human ocular tissues. bFGF stimulated human cataract LEC proliferation, and there was an age-related decrease in responsiveness of human cataract LECs to bFGF (P 展开更多
关键词 Adolescent adult Age Factors CATARACT CHILD Child Preschool Epithelial cells fibroblast Growth Factor 2 Humans Immunohistochemistry INFANT Infant Newborn Lens Crystalline Middle Aged Proliferating cell Nuclear Antigen Research Support Non-U.S. Gov't
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简易灌注装置同时提取成年小鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞 被引量:1
3
作者 师雷 金振晓 +7 位作者 谭延振 张冰 崔君 冯乐乐 宋宇杰 刘英英 张苗 易蔚 《中国体外循环杂志》 2023年第3期172-178,共7页
目的简化Langendorff灌注装置,并且同时提取成年小鼠心肌细胞(AMCM)和心脏成纤维细胞(AMCF)用于实验。方法采用简易灌注装置进行成年小鼠主动脉逆行灌注,同时提取AMCM和AMCF。对其进行形态学观察,并分别通过L-苯肾上腺素(PE)和转化生长... 目的简化Langendorff灌注装置,并且同时提取成年小鼠心肌细胞(AMCM)和心脏成纤维细胞(AMCF)用于实验。方法采用简易灌注装置进行成年小鼠主动脉逆行灌注,同时提取AMCM和AMCF。对其进行形态学观察,并分别通过L-苯肾上腺素(PE)和转化生长因子(TGF)-β1刺激诱导AMCM肥厚和AMCF向肌成纤维细胞分化,以评估其生物学功能。结果复钙后耐钙杆状AMCM占比(62.65±3.12)%,并且可以在体外培养超过1周,与对照组相比,PE刺激后AMCMβ-肌球蛋白重链、心钠肽蛋白表达水平显著升高(P<0.05),杆状AMCM长宽比显著缩小(P<0.05)。AMCF纯度较高,在体外可以传代3~4次,与对照组相比,TGF-β1刺激后AMCF Collagen I、Collagen III、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平显著升高(P<0.05)和荧光强度显著增强(P<0.05)。结论简易灌注装置可以简单、稳定、高效地同时提取满足实验需求、具备生物学功能的AMCM和AMCF。 展开更多
关键词 Langendorff灌注装置 心脏灌注 成年小鼠心肌细胞 成年小鼠心脏成纤维细胞 细胞提取 细胞培养
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供体核种类对水牛核移植效果的影响 被引量:16
4
作者 杨素芳 石德顺 +4 位作者 韩杰 韦英明 韦精卫 陆凤花 牛向丽 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2004年第3期233-237,共5页
采用电融合法和直接注射法进行核移植,以比较不同来源和不同类型水牛供体细胞的核移植效果。当用电融合法进行核移植时,成体耳部成纤维细胞的融合率(46.0%)、卵裂率(53.9%)和囊胚发育率(10.9%),均显著低于胎儿成纤维细胞(64.5%,70.1%和2... 采用电融合法和直接注射法进行核移植,以比较不同来源和不同类型水牛供体细胞的核移植效果。当用电融合法进行核移植时,成体耳部成纤维细胞的融合率(46.0%)、卵裂率(53.9%)和囊胚发育率(10.9%),均显著低于胎儿成纤维细胞(64.5%,70.1%和21.6%)、胎儿皮肤细胞(71.5%,70.8%和22.1%)以及卵巢颗粒细胞(88.2%,79.1%和25.5%);后三种细胞间的卵裂率和囊胚发育率无显著差异,但卵巢颗粒细胞的融合率显著高于胎儿成纤维细胞和胎儿皮肤细胞(P<0.05)。当用直接注射法进行核移植时,胎儿皮肤细胞注核后的存活率(78.2%)、卵裂率(41.6%)均显著低于成体耳部成纤维细胞(88.6%和57.4%)和胎儿成纤维细胞(85.8%和65.0%)。胎儿成纤维细胞注核后的卵裂率和囊胚发育率(23.3%)均显著高于胎儿皮肤细胞(10.1%)和成体耳部成纤维细胞(12.0%)。结果表明:(1)采用直接注核法进行核移植时,胎儿成纤维细胞作为核供体较为合适,而采用电融合法进行核移植时,用颗粒细胞作核供体更为适宜;(2)胎儿成纤维细胞的核移植效果好于成体成纤维细胞。 展开更多
关键词 水牛 卵母细胞 核移植 卵巢颗粒细胞 成体耳部成纤维细胞 胎儿成纤维细胞 胎儿皮肤细胞
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HGF+FGF4体外定向诱导人骨髓来源的多能成体祖细胞向肝样细胞分化的特征性表型鉴定 被引量:8
5
作者 唐力军 高毅 +2 位作者 张志 李浩 单毓强 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期973-976,共4页
目的 探索人骨髓来源多能成体祖细胞 (hMAPCs)在肝细胞生长因子 (HGF) +成纤维生长因子 4 (FGF 4 )诱导下分化为肝细胞的可行性 ,为肝组织工程提供新的种子细胞来源。方法 取健康成人适量骨髓 ,采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞... 目的 探索人骨髓来源多能成体祖细胞 (hMAPCs)在肝细胞生长因子 (HGF) +成纤维生长因子 4 (FGF 4 )诱导下分化为肝细胞的可行性 ,为肝组织工程提供新的种子细胞来源。方法 取健康成人适量骨髓 ,采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞并行贴壁培养 ,获取骨髓间充质干细胞(MSCs) ,将MSCs通过CD4 5、GlyA免疫微磁珠负分选得到hMAPCs;将获取的hMAPCs用HGF(2 0ng/ml) +FGF 4(10ng/ml)进行诱导分化 ,L 0 2人肝细胞株为阳性对照 ,未加任何诱导因素的hMAPCs为阴性对照 ;免疫细胞化学染色鉴定不同诱导分化阶段细胞的ALB、AFP、CK 18、CK 19等肝细胞特征的表型变化 ,并计数阳性细胞比率 ;Westernblot检测诱导分化第 2 1天、35天后细胞的ALB表达。结果 ALB、CK 18在诱导组中基本为阳性着色 ,CK 19均为阴性着色 ,AFP仅在诱导第 7天有阳性着色。在诱导分化第 2 1天、35天 ,ALB均有阳性表达。 展开更多
关键词 多能成体祖细胞 肝细胞生长因子 成纤维生长因子 细胞分化 肝细胞
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成年小鼠心脏成纤维细胞的分离、纯化和原代培养 被引量:13
6
作者 李如君 龚开政 张振刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期67-71,共5页
目的探讨并建立成年小鼠心脏成纤维细胞原代培养方法。方法采用0.8 g/LⅣ型胶原蛋白酶和1 g/L胰蛋白酶为消化液,以多次短时间水浴振荡的方式消化成年小鼠心脏组织,差速贴壁法分离纯化心脏成纤维细胞。波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴... 目的探讨并建立成年小鼠心脏成纤维细胞原代培养方法。方法采用0.8 g/LⅣ型胶原蛋白酶和1 g/L胰蛋白酶为消化液,以多次短时间水浴振荡的方式消化成年小鼠心脏组织,差速贴壁法分离纯化心脏成纤维细胞。波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴定细胞类型及纯度;倒置相差显微镜观察细胞生长情况,绘制细胞生长曲线;CCK-8法测定细胞增殖能力、Western blot法检测转化生长因子β1(TGF-β1)刺激后细胞SMAD家族成员2/3(Smad2/3)蛋白及磷酸化水平。结果差速贴壁后在相差显微镜下可见大量球形贴壁细胞;3 d后细胞逐渐由圆形伸展为长梭形并迅速增殖,分裂象多见;5 d后细胞数量显著增多,完全汇合无空隙;细胞生长曲线近似"S"形。波形蛋白阳性率可达95%。CCK-8法显示在第3~5天细胞增殖能力最显著,给予第2代心脏成纤维细胞TGF-β1刺激显示Smad2/3蛋白磷酸化水平明显增加。结论建立了一种快速、经济、有效获取成年小鼠心脏成纤维细胞的方法。 展开更多
关键词 成年小鼠 心脏成纤维细胞 原代培养 细胞鉴定
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供体细胞种类对牛核移植效果的影响 被引量:2
7
作者 韦精卫 韦英明 +3 位作者 孟凡丽 杨素芳 陆凤花 石德顺 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2006年第3期200-204,共5页
供体细胞种类对牛卵母细胞核移植效果影响的研究结果表明,颗粒细胞的核移植效果与成年牛成纤维细胞无显著差异(19.8%vs 17.3%,P>0.05);胎牛成纤维细胞核移植囊胚发育率高于成年牛成纤维细胞(24.2%vs 14.0%,P<0.05);血清饥饿处理... 供体细胞种类对牛卵母细胞核移植效果影响的研究结果表明,颗粒细胞的核移植效果与成年牛成纤维细胞无显著差异(19.8%vs 17.3%,P>0.05);胎牛成纤维细胞核移植囊胚发育率高于成年牛成纤维细胞(24.2%vs 14.0%,P<0.05);血清饥饿处理的胎牛成纤维细胞(休眠细胞)与高血清培养(非休眠细胞)的胎牛成纤维细胞核移植效果差异不显著(18.8%vs 18.6%,P>0.05),表明胎牛成纤维细胞血清饥饿处理没有必要。 展开更多
关键词 颗粒细胞 成年牛/胎牛成纤维细胞 核移植
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供体细胞培养处理方法对水牛核移植效果的影响 被引量:5
8
作者 杨素芳 石德顺 +3 位作者 冯贵雪 韦精卫 韦英明 陆凤花 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期612-616,共5页
以经常规培养法 (DMEM+10 % FCS)、血清饥饿法 (DMEM+0 .5 % FCS培养 5~ 10 d)和 Apidicolin- APD结合血清饥饿法 (0 .1mg/ L APD培养 2 4 h,DMEM+0 .5 % FCS培养 1~ 18d)培养处理的水牛卵巢颗粒细胞和水牛成体耳部成纤维细胞作供核 ... 以经常规培养法 (DMEM+10 % FCS)、血清饥饿法 (DMEM+0 .5 % FCS培养 5~ 10 d)和 Apidicolin- APD结合血清饥饿法 (0 .1mg/ L APD培养 2 4 h,DMEM+0 .5 % FCS培养 1~ 18d)培养处理的水牛卵巢颗粒细胞和水牛成体耳部成纤维细胞作供核 ,分别采取带下注核法和胞质内注核法进行核移植。同一供核细胞各处理组间的核移植胚融合率 (以颗粒细胞作供核 )以及重组胚的囊胚发育率无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,但经 APD+0 .5 % FCS培养处理供体细胞核移植后的分裂率显著高于其他组 (P<0 .0 5 )。用 7%乙醇处理的成体耳部成纤维细胞进行核移植 ,其重组胚的分裂率和囊胚发育率与对照组 (不含乙醇 )均无明显差异 (P>0 .0 5 )。结果表明 ,(1)血清饥饿处理水牛供体细胞对其核移植效果没有影响 ;(2 ) DNA合成抑制剂 APD结合血清饥饿培养处理水牛颗粒细胞和成体耳部成纤维细胞 ,可提高其核移植效果 ;(3)乙醇预激活处理水牛成体耳部成纤维细胞 。 展开更多
关键词 供体细胞 培养方法 水牛 核移植效果
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电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的初步研究 被引量:5
9
作者 谷瑞环 李善刚 +6 位作者 宋伟杰 王伟 丁雷 张艳 邢凤英 李垚 陈学进 《实验动物与比较医学》 CAS 2010年第4期241-245,250,共6页
目的采用电穿孔方法,介导质粒载体pEGFP-cl转入兔成体成纤维细胞,探讨建立电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的基本条件。方法电穿孔介导质粒载体pEGFP—cl转入7.10代兔耳成体成纤维细胞系GG,研究不同电压、电容、DNA剂量,... 目的采用电穿孔方法,介导质粒载体pEGFP-cl转入兔成体成纤维细胞,探讨建立电穿孔介导外源基因转染兔成体成纤维细胞的基本条件。方法电穿孔介导质粒载体pEGFP—cl转入7.10代兔耳成体成纤维细胞系GG,研究不同电压、电容、DNA剂量,孵育温度的条件下,观察细胞存活数,流式细胞仪测试GFP的含量。结果以PBS作为电击基础液、细胞浓度2×10^6个/ml,电压250V、电容700μF,DNA用量30μg时,兔耳成纤维细胞的转染率和存活率最佳。且电击前冰浴10min,电转染后37℃孵育10min有利于提高细胞的转染率和存活率。结论在合适电压、电容、DNA剂量条件下,电转染提供了外源基因转染兔耳成体成纤维细胞适用性;电转染前的一定时间冰浴和电转染后一定温度孵育可使电转染效率得到改善。 展开更多
关键词 电穿孔 兔成体成纤维细胞 pEGFP-cl 转染
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鲁西黄牛体细胞克隆保种技术的研究 被引量:1
10
作者 朱化彬 程金华 +5 位作者 孙秀柱 王栋 戴蕴平 龚国春 万荣 郝海生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1287-1292,共6页
以体外培养的鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞作核供体,研究利用体细胞克隆技术保存我国地方黄牛优良品种的技术方法。通过组织块培养法建立的鲁西黄牛(1♂,4♀)成纤维细胞系,作为核移植供体细胞,利用屠宰场母牛卵巢卵母细胞经体外培养成熟后... 以体外培养的鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞作核供体,研究利用体细胞克隆技术保存我国地方黄牛优良品种的技术方法。通过组织块培养法建立的鲁西黄牛(1♂,4♀)成纤维细胞系,作为核移植供体细胞,利用屠宰场母牛卵巢卵母细胞经体外培养成熟后作为核受体进行核移植,试验结果表明:重构胚的融合率为62.5%(242/387),分裂率为63.6%(154/242),体外培养第7天囊胚发育率为42.9%(66/154)。体外培养第7天的囊胚的内细胞团细胞(ICM)与滋养层细胞数平均为37和47,ICM占44.2%。体外发育到7 d的囊胚新鲜胚胎的移植妊娠率(新鲜胚胎)移植受体10头,60 d妊娠率为20%(2/10)。 展开更多
关键词 鲁西黄牛 成纤维细胞系 体细胞克隆
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骨巨细胞瘤中成纤维样基质细胞体外钙化能力的研究 被引量:5
11
作者 赵宁侠 于世凤 《北京医科大学学报》 CSCD 1999年第4期363-365,共3页
目的:探讨骨巨细胞瘤的组织来源。方法:体外培养。Gomori法碱性磷酸酶染色,生化检测细胞培养上清液中的碱性磷酸酶含量。免疫组织化学染色检测骨钙素在成纤维样基质细胞中的表达。使用含B甘油磷酸钠和CaCl2的培养液,... 目的:探讨骨巨细胞瘤的组织来源。方法:体外培养。Gomori法碱性磷酸酶染色,生化检测细胞培养上清液中的碱性磷酸酶含量。免疫组织化学染色检测骨钙素在成纤维样基质细胞中的表达。使用含B甘油磷酸钠和CaCl2的培养液,观察成纤维样基质细胞体外钙化能力。结果:成纤维样基质细胞中碱性磷酸酶和骨钙素呈阳性表达,在体外具有钙化能力。在细胞培养上清液中有碱性磷酸酶。结论:骨巨细胞瘤中的成纤维样基质细胞具有某些成骨细胞的特点,为进一步探讨其组织来源提供了实验依据。 展开更多
关键词 骨肿瘤 巨细胞瘤 FSTC
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成人巨细胞成纤维细胞瘤
12
作者 王雷 李承新 +1 位作者 王胜春 高天文 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期27-29,共3页
报告1例成人巨细胞成纤维细胞瘤。患者男,72岁。8年前无明显诱因左下肢出现红色皮下结节,有轻度压痛,7年前经组织病理诊断为软组织来源恶性肿瘤,未予治疗。皮损缓慢增大,并形成多个外生性结节、肿瘤,皮损面积约8 cm×10 cm。再次行... 报告1例成人巨细胞成纤维细胞瘤。患者男,72岁。8年前无明显诱因左下肢出现红色皮下结节,有轻度压痛,7年前经组织病理诊断为软组织来源恶性肿瘤,未予治疗。皮损缓慢增大,并形成多个外生性结节、肿瘤,皮损面积约8 cm×10 cm。再次行组织病理学检查,结果示真皮和皮下胶原间弥漫性瘤细胞增生。肿瘤细胞为梭形,部分细胞体积巨大或呈多核形态,细胞异形性明显。肿瘤局部有黏液沉积,血管周围淋巴细胞浸润。免疫组化示肿瘤细胞波形蛋白阳性,角蛋白AE1/3、S-100蛋白、结蛋白、肌动蛋白、平滑肌肌动蛋白及CD31均为阴性。CD34染色示第1次切片肿瘤细胞阴性,第2次切片浅部肿瘤细胞阳性,深部肿瘤细胞阴性。结合临床、组织病理及免疫组化特点诊断为成人巨细胞成纤维细胞瘤。 展开更多
关键词 成纤维细胞 巨细胞.成人
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鸡痘病毒诱发细胞融合现象的观察 被引量:1
13
作者 肖履中 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2000年第11期5-6,共2页
鸡痘病毒在鸡胚绒毛作囊膜及鸡胚成纤维细胞上交替传代后 ,用本试验提供的条件 ,可以明显诱发鸡胚成纤维细胞的融合 ,形成多量多核细胞。经鸡胚及实验鸡回归试验证实 。
关键词 鸡痘病毒 鸡胚成纤维细胞 细胞融合现象 多核细胞
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体外培养成人包皮成纤维细胞周期同步化效果检测
14
作者 韦精卫 李蓉 +1 位作者 耿岚 郝桂琴 《细胞生物学杂志》 CSCD 2009年第2期265-270,共6页
供体细胞和受体胞质周期协调性是核移植胚胎发育的关键,对人成体细胞的细胞周期分布及其同步化效果进行探讨,将为人治疗性克隆研究打下基础。结果发现:80% ̄85%汇合生长成人包皮成纤维细胞G0/G1期细胞比例显著高于接种后第1天指数生长... 供体细胞和受体胞质周期协调性是核移植胚胎发育的关键,对人成体细胞的细胞周期分布及其同步化效果进行探讨,将为人治疗性克隆研究打下基础。结果发现:80% ̄85%汇合生长成人包皮成纤维细胞G0/G1期细胞比例显著高于接种后第1天指数生长细胞及接种后第5天100%汇合生长细胞两组(67.0%vs58.2%,52.8%,P<0.05),指数生长状态下,仍有58.2%的成人包皮成纤维细胞处于G0/G1期;以0.2μg/ml和2μg/ml不同浓度阿菲迪霉素(aphidicolin,APD)处理成人包皮成纤维细胞24h,2μg/mlAPD组G0/G1期细胞比例显著高于0.2μg/ml组和对照组(10%FBS)(82.9%vs68.8%,63.5%,P<0.05),2μg/mlAPD可有效的将成人包皮成纤维细胞同步于G0/G1期,且培养液中添加10%、0.5%、0%FBS不同浓度血清对2μg/mlAPDG0/G1期同步化效果无显著影响(82.6%vs81.8%vs74.6%,P>0.05);以血清饥饿培养法(0.5%FBS)进行成人包皮成纤维细胞同步化处理,血清饥饿处理3d组G0/G1期细胞比例显著高于0d组(对照组)(71.8%vs59.6%,P<0.05),血清饥饿培养3d可有效将细胞同步于G0/G1期。因此,2μg/mlAPD处理24h和血清饥饿培养3d可有效将成人包皮成纤维细胞同步于G0/G1期。 展开更多
关键词 成人包皮成纤维细胞 细胞周期同步化 体细胞核移植
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应用鸡胚成纤维细胞培养鸡痘病毒 被引量:1
15
作者 肖履中 《青海畜牧兽医杂志》 2000年第2期15-16,共2页
用丹麦产NUNC一次性细胞培养瓶、199培养基加小牛血清培养鸡胚成纤维细胞 ,结果显示 ,细胞生长快 ,贴壁良好 ,2 4h单层细胞即长满瓶底 ,无卷边脱落现象发生。将在鸡胚绒毛尿囊膜上适应了的鸡痘病毒接种鸡胚成纤维细胞 ,4d后细胞出现预... 用丹麦产NUNC一次性细胞培养瓶、199培养基加小牛血清培养鸡胚成纤维细胞 ,结果显示 ,细胞生长快 ,贴壁良好 ,2 4h单层细胞即长满瓶底 ,无卷边脱落现象发生。将在鸡胚绒毛尿囊膜上适应了的鸡痘病毒接种鸡胚成纤维细胞 ,4d后细胞出现预期的典型病变 ,并且可见大量多核巨细胞形成 ,证明鸡痘病毒具有诱发细胞融合的功能 ,而且说明 ,用鸡胚成纤维细胞增殖鸡痘病毒 ,可获得数量可观的病毒粒子。将细胞毒回归鸡胚绒毛尿囊膜 ,形成白色典型痘斑。 展开更多
关键词 鸡痘病毒 鸡胚成纤维细胞 细胞培养 白色痘斑
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碱性成纤维细胞生长因子及受体在骨巨细胞瘤中的表达其及与预后的关系
16
作者 曾建成 裴福兴 +6 位作者 胡云洲 屠重棋 杨天府 张贤良 成娘 雷松 魏于全 《中国骨肿瘤骨病》 2003年第1期36-41,共6页
目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及受体Bek在骨巨细胞瘤的表达情况,探索骨巨细胞瘤的生物学行为规律与预后影响因素。方法 采用免疫组化方法、Mias-2000图像分析技术检测了147例骨巨细胞瘤(复发... 目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及受体Bek在骨巨细胞瘤的表达情况,探索骨巨细胞瘤的生物学行为规律与预后影响因素。方法 采用免疫组化方法、Mias-2000图像分析技术检测了147例骨巨细胞瘤(复发组56例,未复发组91例)石蜡标本中Bek/bFGF的表达情况,用流式细胞术分析其DNA含量与S期细胞百分数(S-phase fraction,SPF),结合肿瘤直径、浸润情况、手术方式、复发情况等相关临床病理资料,采用多元回归分析方法综合分析骨巨细胞瘤的预后影响因素。结果 bFGF、Bek在骨巨细胞瘤主要瘤细胞成分中广泛表达,阳性信号主要定位于瘤细胞胞浆;复发组瘤组织中bFGF、Bek均呈强阳性表达的异形性较大的单核、双核及三核基质细胞与4~8个核的多核巨细胞明显增多,而未复发组瘤组织中bFGF、Bek阴性或弱阳性表达的体积大核多(多达几十个)的多核巨细胞数目较多;复发组bFGF、Bek表达信号较未复发组明显增强,两组间bFGF、Bek表达的灰度值与阳性面积差异均有显著意义。复发组平均DNA指数(DNA Index,DI)为1.24,SPF为18.3%;未复发组平均DI值为1.05,SPF为11.7%;两组间DI值、SPF差异均有显著意义。在13个相关研究因素中,有7个因素与骨巨细胞瘤的预后显著相关,按影响强度由大到小依次为:手术方式? 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 受体 骨巨细胞瘤 基因表达 预后
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改良联合酶消化法提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞 被引量:3
17
作者 陈洪群 郑梅 +2 位作者 晏乘曦 黄鹏 赵兴山 《山东医药》 CAS 2019年第21期38-41,共4页
目的探讨改良联合酶消化法是否能稳定提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞。方法 6只C57成年小鼠拉颈处死后取心脏,然后采用改良联合酶消化法即用胰酶、Ⅱ型胶原酶于37℃恒温箱内消化心脏组织6 min,加血清终止消化,然后将含有细胞的消化液... 目的探讨改良联合酶消化法是否能稳定提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞。方法 6只C57成年小鼠拉颈处死后取心脏,然后采用改良联合酶消化法即用胰酶、Ⅱ型胶原酶于37℃恒温箱内消化心脏组织6 min,加血清终止消化,然后将含有细胞的消化液冰上储存,离心提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞,传代后采用苏木素-伊红染色及免疫荧光法检测波形蛋白、盘状结构域受体2进行形态学和免疫学鉴定。结果采用改良联合酶消化法可以稳定地提取贴壁细胞。苏木素-伊红染色可见细胞呈梭形,贴壁生长;经免疫荧光鉴定,所提取的细胞波形蛋白、盘状结构域受体2表达阳性。结论改良联合酶消化法可以稳定地提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞。 展开更多
关键词 组织细胞提取法 改良联合酶消化法 心脏成纤维细胞 原代培养 成年小鼠
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绒山羊胎儿成纤维细胞和成体干细胞体外生长特性的比较 被引量:4
18
作者 王潇 王志敏 +2 位作者 张飞旭 王青 刘东军 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期582-588,共7页
本研究旨在探索阿尔巴斯白绒山羊成体干细胞和胎儿成纤维细胞体外生长、增殖能力和胚胎干细胞特性的差异,为成体干细胞的应用提供新的理论基础。研究以胎儿成纤维细胞(fetal fibroblast cells,FFCs)作为对照,检测阿尔巴斯白绒山羊3种成... 本研究旨在探索阿尔巴斯白绒山羊成体干细胞和胎儿成纤维细胞体外生长、增殖能力和胚胎干细胞特性的差异,为成体干细胞的应用提供新的理论基础。研究以胎儿成纤维细胞(fetal fibroblast cells,FFCs)作为对照,检测阿尔巴斯白绒山羊3种成体干细胞,脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)、骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)和肌肉卫星细胞(muscle-derived satellite cells,MDSCs)中多能性(NANOG,OCT4,SOX2)、增殖(TERT,PCNA)、凋亡(P53,BAX)基因的转录和表达。表明g ADSCs、g BMSCs和g MDSCs低表达NANOG、OCT4和SOX2,与g FFCs没有明显差异;TERT在g BMSCs和g MDSCs中的表达量高于g FFCs中的表达量,而在g ADSCs中的表达量则低于g FFCs;PCNA和BAX在g FFCs和g MDSCs中高表达,在g ADSCs和g BMSCs中低表达;P53在g BMSCs中的相对表达量较高,在g FFCs、g ADSCs和g MDSCs中的相对表达量均较低。现象表明,在一定程度上成体干细胞的胚胎干细胞特性及增殖能力优于胎儿成纤维细胞。 展开更多
关键词 胎儿成纤维细胞 成体干细胞 多能性 增殖 凋亡
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不同供体细胞代数对兔体细胞核移植效率的影响 被引量:1
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作者 宋伟杰 谷瑞环 +5 位作者 尹明茹 李敦高 邢凤英 李善刚 陈学进 李和平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1060-1064,1072,共6页
将兔成纤维细胞分为5~10低代数组和20~25高代数组进行核移植研究。结果显示,2试验组供体细胞核移植的效率存在差异。通过对供体细胞进行核移植后的重构胚胎的融合率、卵裂率、囊胚率以及体内发育的比较,发现低代数相对来说更有效率,... 将兔成纤维细胞分为5~10低代数组和20~25高代数组进行核移植研究。结果显示,2试验组供体细胞核移植的效率存在差异。通过对供体细胞进行核移植后的重构胚胎的融合率、卵裂率、囊胚率以及体内发育的比较,发现低代数相对来说更有效率,但是高代数组也能获得正常的克隆后代。结果表明,兔不同代数体外培养细胞对克隆效率存在影响,并为制备转基因打靶兔提供基础。 展开更多
关键词 成纤维细胞 体细胞核移植 细胞代数 基因打靶兔
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成人真皮成纤维细胞中转化生长因子β1转录调控Meox1的机制及对细胞迁移的影响
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作者 卫志远 李海胜 +6 位作者 周俊峄 韩超 董惠 吴玉章 贺伟峰 田易 罗高兴 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期224-233,共10页
目的探讨成人真皮成纤维细胞(HDF-a)中转化生长因子β1(TGF-β1)对Meox1的转录调控机制及细胞迁移功能的影响。方法(1)取HDF-a系细胞,用RPMI 1640完全培养基培养(下称常规培养),将细胞分为TGF-β1刺激组和空白对照组。TGF-β1刺激组细... 目的探讨成人真皮成纤维细胞(HDF-a)中转化生长因子β1(TGF-β1)对Meox1的转录调控机制及细胞迁移功能的影响。方法(1)取HDF-a系细胞,用RPMI 1640完全培养基培养(下称常规培养),将细胞分为TGF-β1刺激组和空白对照组。TGF-β1刺激组细胞加入10μL质量浓度为1 mg/μL的TGF-β1刺激,空白对照组加入等量磷酸盐缓冲液。培养72 h,取2组部分细胞进行转录组测序,筛选出2组差异表达比值≥2且P<0.01的基因,对差异基因进行功能富集分析与京都基因和基因组百科全书代谢途径分析,记录Meox1每百万转录本(TPM)表达值,样本数为3;取2组部分细胞,采用实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法检测Meox1 mRNA表达,样本数为3。(2)取对数生长期HDF-a系细胞(细胞生长期下同)常规培养,分为空质粒组和Smad2过表达组、Smad3过表达组、Smad4过表达组,分别转染2μg pcDNA3.1空质粒和各自搭载Smad2、Smad3、Smad4的pcDNA3.1质粒,转染6 h后常规培养48 h,实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中Meox1 mRNA的表达,样本数为3。(3)取HDF-a系细胞常规培养,同实验(1)分组处理,常规培养72 h,采用染色质免疫共沉淀-定量PCR(ChIP-qPCR)法检测2组细胞中Smad2、Smad3和Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度,样本数为3。(4)取HDF-a系细胞常规培养,分为阴性干扰组、小干扰RNA(siRNA)-Smad2组、siRNA-Smad3组、siRNA-Smad4组和空质粒组、Smad2过表达组、Smad3过表达组、Smad4过表达组,分别转染50μmol/L随机siRNA、siRNA-Smad2、siRNA-Smad3、siRNA-Smad4和2μg pcDNA3.1空质粒及各自搭载Smad2、Smad3、Smad4的pcDNA3.1质粒,转染6 h后常规培养48 h,ChIP-qPCR法检测相应组别细胞中Smad2、Smad3和Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度,样本数为3。(5)取2个批次HDF-a系细胞常规培养,均分为阴性干扰组、siRNA-Meox1组、空质粒组、Meox1过表达组,分别转染50μmol/L随机siRNA、siRNA-Meox1和2μg pcDNA3.1空质粒、搭载Meox1的pcDNA3.1质粒,转染6 h后常规培养24 h,1个批次细胞进行划痕实验,划痕后24 h观察划痕宽度,与划痕后即刻对比划痕愈合宽度;1个批次细胞进行Transwell实验,常规培养24 h,计数迁移细胞,样本数为3。(6)2018年1月—2019年6月,陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院收治3例烧伤后8~12个月增生性瘢痕患者(男2例、女1例,年龄35~56岁),取其术中切除的瘢痕组织和瘢痕边缘附带正常皮肤组织,行免疫组织化学染色,观察Meox1蛋白表达分布。对数据行单因素方差分析、独立样本t检验。结果(1)培养72 h,2组细胞差异表达明显的基因共843个,涉及组织修复、细胞迁移、炎性细胞趋化诱导过程等功能以及肿瘤坏死因子、白细胞介素17、细胞外基质受体等潜在的信号通路;空白对照组细胞测序结果的Meox1 TPM表达值为45.9±1.9,显著低于TGF-β1刺激组的163.1±29.5(t=6.88,P<0.01)。培养72 h,空白对照组细胞Meox1 mRNA表达量为1.00±0.21,显著低于TGF-β1刺激组的11.00±3.61(t=4.79,P<0.01)。(2)培养48 h,Smad2过表达组、Smad3过表达组和Smad4过表达组细胞中Meox1 mRNA表达量分别为198.70±11.02、35.47±4.30、20.27±2.50,均显著高于空质粒组的1.03±0.19(t=31.07、13.80、13.12,P<0.01)。(3)培养72 h,TGF-β1刺激组细胞中Smad2、Smad3和Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度均显著高于空白对照组(t=12.99、41.47、29.10,P<0.01)。(4)培养48 h,阴性干扰组细胞中Smad2蛋白在Meox1启动子上的富集度为(0.200000±0.030000)%,显著高于siRNA-Smad2组的(0.000770±0.000013)%(t=11.67,P<0.01);空质粒组细胞中Smad2蛋白在Meox1启动子上的富集度为(0.200000±0.040000)%,显著低于Smad2过表达组的(0.700000±0.090000)%(t=8.85,P<0.01)。阴性干扰组细胞中Smad3蛋白在Meox1启动子上的富集度为(0.5000±0.0413)%,显著高于siRNA-Smad3组的(0.0060±0.0013)%(t=17.79,P<0.01);空质粒组细胞中Smad3蛋白在Meox1启动子上的富集度为(0.4700±0.0800)%,显著低于Smad3过表达组的(1.1000±0.0700)%(t=9.93,P<0.01)。阴性干扰组细胞中Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度与siRNA-Smad4组相近(t=2.11,P>0.05),空质粒组细胞中Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度与Smad4过表达组相近(t=0.60,P>0.05)。(5)划痕后24 h,siRNA-Meox1组细胞划痕愈合宽度较阴性干扰组窄,Meox1过表达组细胞划痕愈合宽度较空质粒组宽。培养24 h,阴性干扰组迁移细胞数显著多于siRNA-Meox1组(t=9.12,P<0.01),空质粒组迁移细胞数显著少于Meox1过表达组(t=8.99,P<0.01)。(6)烧伤后增生性瘢痕患者瘢痕组织中Meox1蛋白表达明显高于正常皮肤组织。结论在HDF-a系细胞中,TGF-β1通过Smad2/3转录调控Meox1表达,进而促进细胞迁移。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 Smad2蛋白质 Smad3蛋白质 细胞迁移分析 Meox1 成人真皮成纤维细胞
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