敌百虫对异育银鲫(Carassais auratus gibebio)毒性及其影响因素的研究

采用静水法生物测试探讨了敌百虫对不同生长时期异育银鲫毒性及其毒性影响因素，为敌百虫在水产养殖中合理应用提供科学依据。根据试验期间死亡鱼数及死亡时间，用直线内插法计算各时间点的半致死浓度Lc如并根据死亡鱼数研究pH值和温度对敌百虫毒性的影响。结果表明：敌百虫对异育银鲫仔鱼（1．0g±0．3g）48、72、96h的LC50分别为121．19、90．22、59．78mg·L^-1，安全浓度为5．98mg·L^-1；对异育银鲫鱼种（23．2g±3．6g）48h的LC50为411．65mg·L^-1。当敌百虫的浓度在安全浓度范围内，环境pH值为6-8、水温低于26℃时，对鱼体毒副作用较小；随着pH值增大，水温升高，敌百虫对鱼体毒性增强，但环境pH值小于6，敌百虫对试验鱼无明显影响。

异育银鲫体内盐酸双氟沙星血浆蛋白结合率的变化与其药代动力学研究

为了研究盐酸双氟沙星(Difloxacin,DIF)在异育银鲫体内血浆蛋白结合率的变化及其与药代动力学之间的关系,实验采用超滤法测定了DIF在异育银鲫体内血浆蛋白结合率,运用HPLC测定其对应时间点药物浓度,并分析了血浆蛋白结合率变化对DIF体内处置的影响。实验以感染嗜水气单胞菌的异育银鲫为感染组,健康异育银鲫为对照组。结果显示:感染组各时间点DIF血浆蛋白结合率均高于对照组,感染组与对照组DIF血浆蛋白结合率与总药物浓度呈对数关系:y=9.01ln x+74.34和y=4.81ln x+65.15,DIF血浆蛋白结合率与游离药物浓度的对数关系式分别为:y=6.36ln x+64.91和y=4.36ln x+60.63;感染组和对照组血浆药时曲线均可使用开放性二室模型描述;感染组DIF的吸收和消除慢于对照组,其表观分布容积和曲线下面积大于对照组。结果显示异育银鲫体内感染嗜水气单胞菌促使DIF血浆蛋白结合率升高;血浆蛋白结合率升高导致药物以结合药物的形式储存于血液中可能是导致药物组织分布受限、消除缓慢、长时间滞留于血液原因之一。

敌百虫在异育银鲫体内富集与消除规律

在（20±2）℃的水温条件下，将异育银鲫（Carassais auratus gibebio）分别浸浴于0．2mg／L、0．5mg／L浓度（理论浓度）的敌百虫水溶液进行7d富集试验，第8天起隔天换清水进行消除试验，研究了敌百虫在异育银鲫体内的富集与消除规律。结果显示：鳃组织中敌百虫富集浓度最高。且给药后2h时就接近水体中药物浓度，7d内一直保持在相对较平稳的浓度水平；肝胰脏、肌肉组织中敌百虫浓度随时间延长逐渐增高，肝胰脏组织富集浓度略高于肌肉组织。消除试验1d后鳃组织中敌百虫浓度迅速下降，消除了91．4％，以后消除速度趋缓，至第5～7天未检出敌百虫；肝胰脏、肌肉组织中敌百虫浓度随试验时间延长逐渐降低，且分别在消除试验的第5天、第7天未检出敌百虫，肝胰脏组织中敌百虫消除速度比肌肉组织中快。

双氟沙星在异育银鲫体内药代动力学研究

采用反相高效液相色谱法(RP-HLPC),研究了(25±1)℃水温条件下单次经口灌注20mg.kg-1双氟沙星(DIF)后,DIF在异育银鲫体内的药代动力学特征及其代谢产物沙拉沙星(SAR)的残留规律。结果表明:DIF在血液及各组织中的药时数据均符合二室开放模型。血液和各组织中均出现重吸收峰现象,肝脏组织达峰浓度最大。其中DIF在血液、肝脏、肾脏、肌肉中吸收半衰期(T1/2α)分别为0.144、0.274、0.137和8.636h;消除半衰期(T1/2β)分别为18.322、26.013、33.066和52.504h;总体清除率(CL)分别为0.082、0.068、0.077和0.058L.h.kg-2;药时曲线下面积(AUC)分别为243.244μg.mL.h-2和294.857、258.587、344.630μg.g.h-2;表观分布容积(Vd)分别为0.676、0.220、0.226和1.258L.kg-1,血浆蛋白结合率为52.39%～64.10%。组织中均可检测到DIF的代谢产物SAR,其中血液中检测到的时间迟于其它组织;根据肌肉组织的DIF和SAR最大残留限量为100和30μg.kg-1,建议DIF休药期为18d以上。

牛磺酸与L-肉碱对异育银鲫生长与抗氧化能力的影响

在基础饲料中分别添加牛磺酸1000、2000、3000mg/kg,L-肉碱100、200、300mg/kg,制成6种饲料,再以基础饲料作为对照组,共7种饲料饲养异育银鲫(Carassius auratus gibebio)8周。结果显示,各组的摄食率无显著差异,部分试验组饲料系数比对照组有显著下降,特定生长率有显著上升,其中牛磺酸1000mg/kg组和L-肉碱200mg/kg组的饲料利用及生长效果最佳。除超氧化物歧化酶外,过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、维生素E、氧化型和还原型谷胱甘肽含量等抗氧化指标均受到添加剂的显著影响,并且大多在牛磺酸1000mg/kg组和L-肉碱200mg/kg组变化最为显著。结果表明,生长性能的变化和抗氧化能力的变化密切相关。

免疫增强剂对异育银鲫非特异免疫力的影响

分别用添加1%酵母细胞壁(1号饲料)、1%酵母细胞壁+0.23%Vc+0.02%VE(2号饲料)、1%免疫多糖(3号饲料)的饲料投喂异育银鲫,并于试验后4、11、17、24、31 d测定头肾巨噬细胞吞噬活性、血清溶菌酶活性和血清杀菌活性。结果表明,与对照组相比,3组饲料均能显著提高异育银鲫的头肾巨噬细胞吞噬活性、血清溶菌酶活性和血清杀菌活性,其中3号饲料效果最为显著,其次为2号饲料。

辛硫磷对鲫肝微粒体CYP3A酶活性、mRNA及蛋白表达的影响

为探究不同剂量的有机磷农药辛硫磷在24、48、72和96 h染毒后对鲫(Carassius auratus gibebio)肝微粒体中CYP3A酶活性、mRNA及蛋白表达的影响,采用半静态染毒法,设置辛硫磷空白对照组低、中、高浓度组(0.0825、0.165、0.330 mg/L),以红霉素-N-脱甲基酶(ERND)活性反映CYP3A酶活性,最后采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别测定CYP3A-mRNA及蛋白的表达量。结果显示:辛硫磷能抑制CYP3A的酶活性并且下调CYP3A-mRNA的表达,72 h和96 h后,各浓度组中的mRNA的表达量相较对照组降低了50%以上。辛硫磷染毒后的CYP3A蛋白的表达量在各时间段中都呈现显著的剂量效应关系,在低、中浓度组间存在时间效应关系。结果表明,辛硫磷能作为一种抑制剂降低鲫肝脏中CYP3A酶活性、mRNA及蛋白表达量,其对蛋白表达抑制的剂量效应和时间效应影响更显著。

两种水温条件下异育银鲫体内双氟沙星药代动力学比较

运用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),对比了单次口灌20 mg/kg鱼体重剂量条件下,16℃和25℃两种水温时双氟沙星(DIF)在异育银鲫体内代谢动力学差异。数据经过药代动力学软件(3P97)处理,结果显示:两种温度条件下,双氟沙星药时规律均符合开放性二室模型且存在明显的差异。其中,吸收半衰期(T1/2Ka)与水温呈正相关,在两种温度条件下分别可达0.010 h和0.122 h;消除半衰期(T1/2β)、表观分布容积(Vd/F)、血浆和组织中药时曲线下总面积(AUC)等参数则与水温呈负相关,16℃条件下血浆T1/2β、Vd/F和AUC分别为70.968 h、1.875/kg和763.761μg/(mL.h),25℃则为18.322 h、0.676/kg和243.244μg/(mL.h);16℃条件下肝脏组织中AUC为746.622μg/(mL.h),肾脏组织中AUC为1 095.711μg/(mL.h),肌肉组织中AUC为1 222.750μg/(mL.h);而25℃条件下肝脏组织中AUC则为294.857μg/(mL.h),肾脏组织中AUC为258.587μg/(mL.h),肌肉组织中AUC为344.630μg/(mL.h)。另外,在两种温度条件下,DIF代谢产物沙拉沙星在血浆及肝脏、肾脏和肌肉组织中均能被检出,且呈多峰现象。结果说明,相对于25℃的水温条件,16℃水温时双氟沙星能较好地分布于异育银鲫体内。另外,16℃时DIF Cmax/MIC90≥10的保持时间可达72 h,而25℃时Cmax/MIC90≥10的保持时间仅为4～6 h;因此,双氟沙星在较低水温时(16℃)具有更高的药效。