gidA基因缺失对貉源大肠杆菌生物学特性的影响

为研究葡萄糖抑制的分裂蛋白A(GidA)在貉源大肠杆菌致病机制中的作用,本研究利用λ-Red同源重组技术构建貉源致病性大肠杆菌LCE-1(WT)gidA基因缺失株LCE-1ΔgidA(KO)和回补株LCE-1ΔgidA/gidA(RS),均采用PCR和测序鉴定正确后,进一步分析各菌株的生长特性、生化特性,结果显示,在LB培养基中3株菌的生长速度均无明显差异;KO菌株的部分生化特性如肌醇、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶指标均发生变化,RS菌株指标基本恢复。通过试管法及微量结晶紫法分析评估3株菌生物被膜(BF)的形成能力,结果显示,与WT菌株和RS菌株相比,KO菌株BF形成能力极显著下降(P<0.0001)。体外模拟并检测在酸应激、碱应激、热应激以及氧化应激条件下这3株菌的生长情况,结果显示,gidA基因缺失能够显著提高大肠杆菌对酸应激、碱应激、热应激和氧化应激的敏感性。通过K-B纸片法对这3株菌的耐药性进行测定,结果显示,与WT菌株相比,KO菌株对头孢类、喹诺酮类、氨基糖苷类和青霉素类药物的敏感性增强。利用WT和KO菌株分别感染小鼠进行致病性试验,结果显示,WT和KO菌株对小鼠的LD50分别为1.58×10^(5)cfu/mL和3.16×10^(6)cfu/mL,与WT菌株相比,KO菌株的毒力下降大于1个数量级。本研究为进一步研究gidA基因对貉源大肠杆菌致病机制的影响奠定了基础。