The potential effect of gigantol on lung cancer metastasis

Lung cancer has been one of the most fundamental leading causes of death within the past 10 years[1].The severity of the disease is related to the metastatic potential and aberrant apoptosis of lung cancer cells.Metastasis is the process when cancer cells transport from their original tumor site and establish a secondary tumor elsewhere.These aggressive behaviors comprise their anoikis resistance and their migrate abilities[2].The process of a programmed cell death in an attached condition is called apoptosis whereas anoikis is a cellular mortality in a detached condition.

石斛酚抑制碱烧伤大鼠角膜新生血管的实验研究

目的 探讨石斛酚抑制碱烧伤大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization, CNV)的作用。方法 构建SD大鼠角膜碱烧伤模型,随机分成正常对照组、模型对照组、低浓度石斛酚组、高浓度石斛酚组、阿柏西普组,每组各10只。低浓度石斛酚组、高浓度石斛酚组、阿柏西普组分别于伤后第1天结膜下注射2.5 mg/0.05 mL、5 mg/0.05 mL石斛酚,2 mg/0.05 mL阿柏西普。伤后第3、7、14天,观察并计算角膜新生血管占全角膜面积的百分比、角膜混浊评分并测量角膜厚度。碱烧伤第14天,处死全部大鼠,通过苏木素-伊红(HE)染色和免疫组化观察角膜组织中VEGF和CD34蛋白表达水平,以及通过ELISA检测各组VEGF、IL-1β、TNF-α的蛋白含量。结果 碱烧伤后第7、14天,低浓度石斛酚组、高浓度石斛酚组、阿柏西普组角膜新生血管面积占全角膜面积百分比均显著低于模型对照组(所有P<0.05)。碱烧伤后第14天,高浓度石斛酚组角膜混浊评分显著小于模型对照组(P<0.05),模型对照组、低浓度石斛酚组角膜厚度均显著高于正常对照组(所有P<0.001)。但是,高浓度石斛酚组、阿柏西普组角膜厚度与正常对照组相比较,均无显著性差异(所有P>0.05)。此外,低浓度石斛酚组、高浓度石斛酚组、阿柏西普组角膜组织中VEGF、IL-1β、TNF-α蛋白表达均显著低于模型对照组(所有P<0.01)。结论 结膜下注射石斛酚对碱烧伤大鼠角膜新生血管有抑制作用,并能促进角膜水肿的吸收。

大叶兰酚对人胃癌细胞株SGC-7901生长和侵袭的影响

目的:探讨大叶兰酚对人胃癌细胞株SGC-7901生长和侵袭的影响。方法:体外培养人胃癌细胞SGC-7901,加入不同浓度的大叶兰酚(0、30、60、120μmol/L),分别设为对照组与低、中、高剂量组,每组重复5孔。使用CCK-8检测法评估细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell法检测细胞侵袭能力,并采用Westernblot检测各组热休克蛋白90(HSP90)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和细胞周期依赖性蛋白激酶1(CDK1)表达水平。结果:人胃癌细胞SGC-7901增殖率为高剂量组<中剂量组<低剂量组<对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。人胃癌细胞SGC-7901凋亡率为高剂量组>中剂量组>低剂量组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。侵入下室的人胃癌细胞数SGC-7901量为高剂量组<中剂量组<低剂量组<对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。随着药物浓度的增加,中、高剂量组HSP90蛋白的表达水平,低、中、高剂量组p-Akt和CDK1蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:大叶兰酚可抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长、侵袭,并促进细胞凋亡,其作用可能与抑制HSP90/Akt/CDK1信号通路有关。

石斛酚抑制黑色素瘤细胞增殖与迁移的作用以及潜在靶点miRNA的分析

探究石斛酚对黑色素瘤细胞生物学功能的调节作用及其对miRNA表达谱的影响。用不同浓度(0,40,80,160,320μmol·L^(-1))石斛酚处理小鼠黑色素瘤B16细胞,采用CCK-8法检测B16细胞增殖能力,采用细胞划痕实验检测B16细胞迁移能力。利用Small RNA-seq技术检测Control组和石斛酚组(160μmol·L^(-1))细胞中的miRNA的表达情况,构建其差异表达谱,并对差异表达miRNA进行生物信息学分析,确定差异表达miRNA的主要生物学功能及其可能参与的信号通路。结果表明:石斛酚对黑色素瘤B16细胞的增殖与迁移能力均有抑制作用,且具有剂量依赖性,160μmol·L^(-1)和320μmol·L^(-1)石斛酚处理的增殖抑制率分别为51.19%和70.51%,迁移率分别为(21.82±6.27)%和(8.54±5.02)%。Small RNA-seq数据分析结果显示,与Control组相比,石斛酚组显著上调表达42个miRNA和显著下调表达11个miRNA,这53个差异表达miRNA共预测到2 050个靶基因,通过GO分析发现靶基因功能主要是参与轴突导向、细胞质、DNA结合等,KEGG分析发现靶基因主要与Rap1信号通路、钙信号通路、吗啡成瘾以及磷脂酶D信号通路等信号转导通路关系密切。除33个新预测到的miRNA外,其余差异表达miRNA共20个,即与Control组相比,石斛酚组中显著上调的miRNA有mmu-miR-132-5p、mmu-miR-144-3p、mmu-miR-212-3p、mmu-miR-5100、mmu-miR-6238、mmu-miR-6239、mmu-miR-6240、mmu-miR-690、mmu-miR-6937-5p、mmu-miR-708-5p和mmu-miR-708-3p;显著下调的miRNA有mmu-miR-1191b-5p、mmu-miR-133a-3p、mmu-miR-3073a-5p、mmu-miR-3091-3p、mmu-miR-335-3p、mmu-miR-5128、mmu-miR-6539、mmu-miR-7661-3p和mmu-miR-7667-5p。可见,石斛酚可能通过调控黑色瘤细胞中miRNA的表达,影响相关细胞生物学功能而发挥抑制黑色瘤发生发展的作用。

叠鞘石斛中联苄类成分的定性定量分析

目的建立叠鞘石斛中联苄类成分的定性、定量分析方法。方法运用薄层色谱法对叠鞘石斛中联苄类成分石斛酚（gigant01）和杓唇石斛素（moscatilin）进行定性分析，采用高效液相色谱法测定石斛酚的含量，以Shim—packCLC—ODS柱为固定相，流动相乙腈-0．2％甲酸（35-65），检测波长280nm，柱温25℃。结果石斛酚在0．196～12．54μg内峰面积与进样量呈良好的线性，r=0．9999；平均回收率100．6％；RSD3．0l％。结论通过10批不同来源的叠鞘石斛的鉴别和含量测定，证明方法灵敏，准确可靠，重复性好。在不同采收期的叠鞘石斛中，石斛酚的含量在春季4，5月份和秋季10，11月份相对高于其他月份。

石斛酚对醛糖还原酶的抑制作用及其机制研究

目的探讨石斛酚对醛糖还原酶(AR)的抑制作用及其机制。方法采用紫外分光光度法表征石斛酚对AR的抑制作用及抑制类型;采用分子对接软件Syby17.3中的FlexX预测二者作用残基及结合方式。结果石斛酚对AR的IC50=2.12 mmol/L,抑制类型为非竞争性抑制,并呈显强烈的量-效关系;二者作用残基为Trp111,His110,Tyr48,Trp20,主要结合方式是疏水相互作用、氢键和范得华力。结论石斛酚对AR活性表现出良好的抑制作用。

石斛酚与丁香酸协同对醛糖还原酶的抑制作用及机制研究

目的探讨石斛酚与丁香酸联用对醛糖还原酶(AR)活性的抑制作用。方法采用紫外分光光度法表征石斛酚和丁香酸联合对AR的抑制活性;采用分子对接软件Sybyl中的FlexX方法预测二者作用残基、结合方式及其药效团。结果石斛酚和丁香酸联用的抑制活性优于单一组分——石斛酚和丁香酸,表现良好的协同效果,二者协同抑制AR的氨基酸残基为Asn160,主要作用力为范德华力,形成共同药效团。结论石斛酚与丁香酸联合对AR活性表现为抑制作用,并呈现协同性。

不同石斛枫斗中酚酸类活性成分的比较及杓唇石斛素和石斛酚含量的测定

建立了基于液相色谱-离子阱飞行时间串联质谱(LC-IT-TOF MS/MS)的酚酸类分析方法,对6种共18批次的石斛枫斗药材中的酚类化合物进行了研究,其中18种酚酸类化合物得到初步定性。在共有化合物中选择杓唇石斛素和石斛酚作为质量控制的目标化合物。在此基础上,采用响应面法(RSM)确定了提取溶剂为60%甲醇、提取时间为65min的超声提取杓唇石斛素和石斛酚的最佳条件,建立了石斛枫斗中杓唇石斛素、石斛酚的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法。定量线性优于0.999 8,检出限(LOD)分别为0.18mg/L和0.09mg/L,重复性的相对标准偏差(RSD)小于3%,加标回收率均值分别为97.1%和101.4%。这些结果表明本研究建立的方法可用于石斛枫斗药材中酚酸类化学成分研究及质量控制。

石斛酚通过NF-κB/PRL-3通路抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨石斛酚对人成骨肉瘤U20S细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用及其分子机制。方法:用不同质量浓度(10、25、50、75、100、150μmol/L)的石斛酚处理U20S细胞24、48h后,用CCK-8法检测石斛酚对U20S细胞增殖能力的影响。Transwell实验检测25、50μmol/L的石斛酚对U20S细胞迁移、侵袭能力的影响,在脂多糖(LPS)诱导U20S细胞炎症反应的基础上,再以石斛酚处理,qPCR、WB法分别检测U20S细胞中NF-κB(p65)、TNF-α、IL-6、PRL-3mRNA和蛋白的表达水平。结果:不同质量浓度的石斛酚作用不同时间对肉瘤细胞U20S增殖均具有抑制作用(P<0.05或P<0.01);25、50μmol/L的石斛酚能够明显抑制骨肉瘤U20S细胞的迁移及侵袭能力(均P<0.01),同时能够抑制细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6、PRL-3等蛋白的表达(P<0.05或P<0.01);LPS诱导后,U20S细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6、PRL-3mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.01),25、50μmol/L的石斛酚处理后均能够降低U20S细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6、PRL-3mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论:石斛酚对骨肉瘤U20S细胞增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,其作用机制可能与调控NF-κB/PRL-3信号通路有关。

高效液相色谱法评价中药石斛的质量

以联苄类成分杓唇石斛素和石斛酚为指标成分,建立了采用HPLC进行石斛含量测定的方法。采用反相C18色谱柱,以乙腈-0.01%三氟乙酸为流动相进行梯度洗脱。结果表明目标化合物的质量浓度分别在2.29-1 144.00μg/mL之间和1.79-1 196.00μg/mL之间呈线性,R2均大于0.999 7;平均加样回收率分别为102.7%和99.1%。通过对18种不同来源石斛及18批商品石斛的含量测定,表明所建方法灵敏、准确、可靠,可作为中药石斛的质量控制方法。

石斛酚对诱导型一氧化氮合酶的抑制活性及其机制研究

【目的】探讨石斛酚(gigantol)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的抑制活性及作用位点,阐明石斛酚抗白内障的作用机制。【方法】采用试剂盒方法测定石斛酚对iNOS的体外抑制活性,动力学模拟石斛酚和iNOS的结合方式。【结果】浓度为120μmol/L的石斛酚对iNOS的抑制率为100%,其半数抑制量(IC50)为(32.227±5.73)μmol/L;石斛酚通过对iNOS活性位点的直接作用,进而抑制NO的产生;两者作用氨基酸位点是lle195、Gln257,相互作用力主要为氢键。【结论】石斛酚对iNOS具有良好的抑制作用。

石斛酚对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨石斛酚对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)的醛糖还原酶(AR)通路及氧化应激的保护作用。方法:将体外培养的HRMECs分为5组:正常组(葡萄糖5. 5mmol/L)、甘露醇组(葡萄糖5. 5mmol/L+甘露醇24. 5mmol/L)、高糖组(葡萄糖30mmol/L)、石斛酚组(葡萄糖30mmol/L+石斛酚5μmol/L)、依帕司他组(葡萄糖30mmol/L+依帕司他1μmol/L)。通过MTS实验检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平; Western blotting法检测核因子κB(NF-κB)的蛋白表达; qRT-PCR法检测AR、HIF-1α及VEGF的mRNA表达。结果:DCFH-DA荧光探针法结果显示石斛酚可明显降低高糖环境下细胞内的ROS水平。与高糖组相比,石斛酚组NF-κB的蛋白表达,AR、HIF-1α及VEGF的mRNA表达也都明显下降。依帕司他组的AR及NF-κB表达趋势与石斛酚组一致。结论:石斛酚与依帕司他都可抑制AR/NF-κB通路的激活,同时石斛酚还可抑制高糖诱导的HRMECs氧化应激反应。石斛酚在糖尿病视网膜病变的发生发展中可能有一定的保护作用,可能帮助减少新生血管的生成。

紫外可见分光光度法测定叠鞘石斛中联苄类化合物的含量

目的：建立叠鞘石斛中联苄类化合物的含量测定方法。方法：以石斛酚为对照品，未加显色剂条件下，建立紫外可见分光光度法测定叠鞘石斛中联苄类化合物的含量。结果：确定最佳吸收波长280nm，石斛酚在浓度4．88-58．56μLg／mL范围内呈良好线性关系（r=0．9998），平均加样回收率为97．39％，RSD=2．97％。结论：该方法准确、简单、快捷，重现性好，适用于叠鞘石斛中联苄类化合物含量的测定。

叠鞘石斛与药典品种石斛酚含量对比研究

目的:建立叠鞘石斛与药典收载品种金钗石斛,鼓槌石斛中石斛酚的高效液相色谱含量测定方法.方法:Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.5％冰醋酸(35:65)为流动相,检测波长280 nm,流速1 mg· mL-1,柱温30℃.结果:石斛酚在0.01228～0.2456 mg·mL-1 (r=0.9999)范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率为100.39％,RSD为2.17％.结论:本方法操作简单、快捷、重现性好、准确率高,可用于上述三种石斛中石斛酚的含量测定.

中心复合设计——效应面法优化叠鞘石斛石斛酚提取工艺

目的:采用中心复合设计—效应面法优化叠鞘石斛中石斛酚的提取工艺。方法:以甲醇体积分数、料液比和超声提取时间为自变量,以石斛酚提取率为因变量,通过对因变量进行多元线性回归拟合,采用效应面法优化最佳提取工艺。结果:确定石斛酚提取工艺为甲醇体积分数50%～61%,料液比1∶19～1∶22,超声提取时间16～21min,工艺验证预测值与实测值的偏差为-1.82%。结论:该方法可用于优化叠鞘石斛石斛酚提取工艺。

石斛酚对高糖诱导的EA.hy926内皮细胞凋亡的保护作用研究

目的:研究石斛酚对高糖损伤的EA.hy926细胞(来源于人脐静脉的永生化内皮细胞系)的保护作用,并探讨其作用机制。方法:采用100 mmol·L-1高糖培养基建立EA.hy926内皮细胞损伤模型,给予石斛酚孵育24 h,采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,检测细胞半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性以及培养液中SOD(过氧化物歧化酶)、T-AOC(总抗氧化能力)活力和MDA(丙二醛)的含量。结果:石斛酚能抑制Caspase-3活性,降低细胞凋亡率,增强细胞活力,提高SOD和T-AOC活力,减少MDA含量。结论:石斛酚对高糖损伤的血管内皮细胞具有保护作用,其机理与其增强细胞的抗氧化能力密切相关。

基于分散液-液微萃取技术的石斛酚含量测定与分析

建立分散液-液微萃取与高效液相色谱联用技术测定石斛酚的分析方法。通过对实验条件的筛选及优化,得到最佳条件：p H 3,辅以涡旋方式进行萃取,萃取溶剂为120μL正戊酸、萃取时间1 min,分散剂为曲拉通X-114、用量80μL。此方法进行萃取,检出限为2.625μg/L,定量限为8.74μg/L,线性范围为0.10~30.00 mg/L,萃取富集倍数平均值为28.02,萃取回收率平均值为1.01。将建立的分析方法应用于实际石斛样品的测定,结果表明该方法能对石斛中的石斛酚进行高效萃取与富集,方法快速简便。

石斛酚的合成

以3,5-二羟基苯甲酸甲酯和香兰素为原料,经苄基化、甲基化、还原、溴代、Wittig-Horner、还原反应得到4-(3-羟基-5-甲氧基苯乙基)-2-甲氧基苯酚,即石斛酚。目标化合物的结构经1H NMR和13C NMR确证。总收率为12.7%。

石斛酚与丁香酸的ADMET分子模拟预测

目的分子模拟预测石斛酚与丁香酸的吸收、分布、代谢、排泄和毒理性(ADMET),为进一步开发研究奠定基础。方法采用DS2.1中ADMET模块,从吸收性、水溶性、血脑屏障穿透性、与人细胞色素P450 2D6酶结合、肝毒性、与血浆蛋白结合6个方面进行测定。结果石斛酚的肝毒性比标准稍高,石斛酚与丁香酸的其他各方面的预测值都在正常范围内。结论石斛酚、丁香酸的ADMET测定结果符合药物研究开发的标准,可作为新药进一步研究。

美花石斛的质量研究及其与近似种石斛的比较

目的建立美花石斛生物碱、联苄类、黄酮类成分的TLC鉴别方法,以及石斛酚、甘露糖与葡萄糖含量测定方法,并与霍山石斛、金钗石斛、流苏石斛、铁皮石斛进行比较,为其质量控制提供科学依据。方法采用TLC法鉴别生物碱、联苄类、黄酮类成分;石斛酚含量测定:采用HPLC法,色谱柱为Kromasil 100-5C_(18);流动相为乙腈-水(36∶64);检测波长为210 nm;流速为0.5 m L·min^(-1);柱温为30℃。甘露糖与葡萄糖的含量测定:采用酸水解柱前衍生HPLC方法,色谱柱为Kromasil 100-5 C_(18);流动相为乙腈-0.02 mol·L^(-1)乙酸铵溶液(20∶80);检测波长为250 nm;流速为1.0 m L·min^(-1);柱温为30℃。结果 TLC鉴别中美花石斛分别检出2个生物碱主斑点、包括石斛酚在内的2个联苄类成分主斑点、包括柚皮素在内的5个荧光主斑点,与霍山石斛、金钗石斛、流苏石斛或铁皮石斛有一定区别。石斛酚、甘露糖、葡萄糖线的性关系良好(r=0.999 9);平均加样回收率分别为101.5%(RSD为1.95%)、97.9%(RSD为1.94%)、100.0%(RSD为1.36%);10批美花石斛的石斛酚含量为0.0739~0.171 mg·g^(-1);7批美花石斛的甘露糖与葡萄糖含量分别为5.07%~9.42%、8.43%~13.71%,甘露糖和葡萄糖含量之和为13.50%~22.61%。结论 TLC鉴别方法具有一定专属性,可作为美花石斛的鉴别方法之一;含量测定方法准确可靠,重复性好,可作为美花石斛的定量指标。