A PRELIMINARY STUDY OF THE WATER—SOLUBLE OLIGOPEPTIDES AND AMINO ACIDS OF GINSENG

γ-Amino butyric acid(GABA)and several γ-glutamyl oligopeptides were isolated and identified from water-extract of ginseng.

吉林人参低聚肽的抗氧化作用

目的:探讨吉林人参低聚肽(ginseng oligopeptide,GOP)对D-半乳糖过氧化损伤大鼠抗氧化作用的影响。方法:取SD大鼠90只,设立9个实验组:6个GOP剂量组(0.062 5、0.125 0、0.250 0、0.500 0、1.000 0、2.000 0 g/kg mb)、1个空白对照组、1个乳清蛋白组(0.250 0 g/kg mb)和1个模型对照组。除空白对照组外,其余各组每天腹腔注射D-半乳糖125 mg/kg mb,连续6周,造成过氧化损伤模型。造模成功后继续腹腔注射D-半乳糖并连续灌胃45 d后进行血清和肝脏氧化应激指标检测。结果:GOP可以显著降低大鼠脂质氧化产物和蛋白质氧化产物水平,显著提高大鼠抗氧化酶活力和抗氧化物质含量(P<0.05),且效果优于乳清蛋白。结论:GOP对D-半乳糖所致过氧化损伤大鼠有抗氧化作用。

吉林人参低聚肽对高脂血症大鼠的影响

目的:观察吉林人参低聚肽(ginseng oligopeptides,GOP)对高脂血症模型大鼠是否具有降脂作用。方法:取SD大鼠108只,设立9个实验组:6个GOP剂量组(0.062 5、0.125 0、0.250 0、0.500 0、1.000 0、2.000 0 g/kg)、1个空白对照组、1个乳清蛋白组(0.250 0 g/kg)和1个模型对照组。空白对照组每日给予基础饲料,其余各组每日给予高脂饲料,2周后各组继续给予相应饲料并连续灌胃30 d。结果:GOP各剂量组大鼠血清胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯含量均无明显变化(P>0.05);GOP能够降低高脂血症大鼠血清和肝脏丙二醛含量(P<0.01),提高血清和肝脏超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力(P<0.01),升高血清一氧化氮和一氧化氮合酶含量(P<0.01)。结论:GOP没有辅助降血脂作用,GOP可能具有抗动脉硬化作用。

人参低聚肽对急性酒精中毒大鼠的保护作用研究

目的:探讨吉林人参低聚肽(GOP)对酒精诱导的大鼠急性酒精中毒的防治作用及其可能机制。方法:采用SPF级SD雄性大鼠,随机分为7组,每组10只,包括1个空白对照组、1个模型对照组、1个乳清蛋白对照组(0.250 0g/kg)和4个GOP剂量组(0.062 5、0.125 0、0.250 0、0.500 0g/kg)。连续灌胃30d后,采用体积分数50%的酒精以7g/kg BW剂量灌胃,观察大鼠翻正反射,测定大鼠血清ALT、AST、TC、TG、HDL-C和LDL-C的含量,及肝组织ADH与大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平。结果:与模型对照组相比,人参低聚肽干预组大鼠翻正反射消失的比率、血清TNF-α、IL-6、IL-1β的水平明显降低(P<0.05),血清ALT、AST及肝组织ADH活性显著升高(P<0.05),但TC、TG、HDL-C和LDL-C含量与模型对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:人参低聚肽可有效保护机体免受急性酒精中毒的伤害和防治急性肝损伤。

吉林人参低聚肽对小鼠耐缺氧作用的研究

目的:观察吉林人参低聚肽(ginseng oligopeptides,GOP)对小鼠是否具有耐缺氧作用。方法:将BALB/C小鼠分为6个实验组:4个GOP剂量组[0. 075、0. 150、0. 300、0. 600g/(kg·BW)]、1个空白对照组和1个乳清蛋白组(0. 300g/(kg·BW)),连续灌胃30d后,通过常压耐缺氧实验、亚硝酸钠中毒存活实验和急性脑缺血性缺氧实验来观察GOP的耐缺氧效果。结果:与空白对照组和乳清蛋白组相比,GOP均可明显延长小鼠常压耐缺氧存活时间、亚硝酸钠所致缺氧存活时间和急性脑缺血性缺氧存活时间。结论:GOP对小鼠具有耐缺氧作用。

吉林人参低聚肽对糖尿病大鼠的降血糖作用研究

目的：研究吉林人参低聚肽（GOP）对正常大鼠和糖尿病大鼠的血糖调节作用及其机制。方法：正常大鼠降血糖实验：选取雄性SD大鼠30只,根据空腹血糖值随机分为空白对照组和GOP组,GOP组以灌胃的方式给予0.25g/kg bw的人参肽溶液、空白对照组给予等剂量的蒸馏水,连续灌胃30d,测定空腹血糖水平。糖尿病模型大鼠降血糖实验：采用高热能饲料联合小剂量四氧嘧啶建立实验性糖尿病大鼠模型,雄性SD大鼠135只,根据空腹血糖水平随机分为9组：空白对照组、糖尿病模型组（HGC）、乳清蛋白组（WPC）,0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 g/kg bw GOP组。GOP组以灌胃方式给予不同剂量的GOP溶液、WPC组给予0.25g/kg bw的乳清蛋白溶液、HGC和空白对照组给予等体积的蒸馏水。实验期间HGC组、WPC组和GOP各组饲喂高热能饲料,空白对照组使用基础鼠料。连续灌胃28d,HGC组、WPC组和GOP各组给予四氧嘧啶103-105mg/kg bw腹腔注射,空白对照组注射等体积生理盐水。5d后进行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）,测定胰岛素水平、糖化血清蛋白、胆固醇等指标。结果：正常大鼠降血糖实验：空白对照组和GOP组空腹血糖水平没有显著差异。糖尿病大鼠降血糖实验：与HGC组比较,GOP 0.0625、0.125、0.25g/kg bw组和WPC组大鼠空腹胰岛素、糖化血清蛋白、总胆固醇、甘油三酯、OGTT实验0.5h血糖和血糖曲线下面积明显降低。结论：GOP对正常大鼠空腹血糖没有影响,而对高热能饲料联合小剂量四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠的糖脂代谢紊乱具有明显的改善作用。

人参低聚肽对急性酒精中毒大鼠的作用研究

目的:评价人参低聚肽(ginseng oligopetides,GOPs)对急性酒精中毒大鼠的作用效果。方法:根据体重将大鼠随机分为酒精模型组、乳清蛋白组(250 mg/kg·BW)和4个GOPs剂量组(62.5、125、250、500 mg/kg·BW),另设1个正常对照组,每组10只。GOPs灌胃30 d后,以4 g/kg·BW浓度灌胃染毒造成大鼠急性酒精中毒模型(翻正反射实验为7 g/kg·BW),进行行为学实验(包括翻正反射、转棒和网上攀附实验)、检测血乙醇浓度,并检测大鼠肝脏乙醇脱氢酶(ADH)、乙醛脱氢酶(ALDH)的活性。结果:GOPs干预能明显减少急性酒精中毒大鼠的翻正反射消失比率,延长网上攀附时间,增加醉酒大鼠在转棒上的停留时间,降低血乙醇浓度及提高肝脏ADH、ALDH活性。结论:GOPs可以通过加速酒精在体内的代谢,加强肝脏乙醇代谢酶活性,改善酒精引起的行为异常,从而对急性酒精中毒大鼠具有保护作用。

人参寡肽的合成

使用溶液法和有机磷肽缩合试剂DEPBT合成了从人参中分离鉴定的三个寡肽,N,N'-双-(γ-谷氨酰甘氨酰)胱氨酸1,N.N'-双-γ-谷氨酰胱氨酰甘氨酸2,N-γ-谷氨酰胱氨酰-双-甘氨酸3,以及γ-谷氨酰甘氨酰半胱氨酸4.产物经离子交换树脂柱或HPLC纯化,用质谱、核磁共振谱、氨基酸分析进行了验证.

人参低聚肽改善老龄db/db小鼠疾病状态和延长寿命的研究

目的:评价人参低聚肽(GOP)改善老龄db/db小鼠血糖水平和延长寿命的效果。方法:采用db/db小鼠作为2型糖尿病模型。对老龄db/db(生长至70周龄)小鼠摄食量、体重、饮水量和尿量以及血糖水平进行测定,并且对老龄db/db小鼠存活率进行评价,表征GOP对疾病状态和寿命的改善效果。结果:GOP可以降低小鼠体重、摄食量、饮水量和尿量,改善老龄db/db小鼠的生存状态,同时,相比于模型对照组,GOP可以显著减少老龄db/db小鼠肾周脂肪指数和睾周脂肪指数(P<0.05)。通过GOP干预,可以降低老龄db/db小鼠的血糖水平,GOP干预组AUC为20mmol/(L·h),显著低于模型对照组小鼠AUC[50 mmol/(L·h)]。当db/db小鼠增长至80周龄时,GOP干预组小鼠存活率为50%,大于模型对照组存活率(20%)。结论:GOP干预小鼠生存质量较高,并且寿命较长,说明GOP可以在一定程度上改善老龄db/db小鼠血糖情况,延长其寿命。本研究为利用GOP开展糖尿病的营养治疗提供了科学依据。

人参低聚肽对老年db/db小鼠血糖及免疫调节的作用

目的:评估人参低聚肽改善老年db/db小鼠血糖以及炎症因子和氧化应激状态的效果。方法:db/db小鼠随机分为老年模型对照组、阳性对照组、人参低聚肽干预组,同时以db/m小鼠作为正常对照组,并且取喂养至35周龄的青年db/db小鼠作为青年模型对照组。干预期间和干预结束后对各组小鼠进行空腹血糖、糖耐量水平、炎症反应程度和氧化应激状态的测定。结果:人参低聚肽可显著降低70周db/db小鼠空腹血糖(P<0.05),人参低聚肽干预组的小鼠血糖峰值和血糖曲线下面积(AUC)低于老年模型对照组、阳性对照组、青年模型对照组。人参低聚肽干预组小鼠IL-6(412.61±12.18 pg/L)低于正常对照组(476.50±30.00 pg/L),并且显著低于老年模型对照组(P<0.05),正常对照组、人参低聚肽干预组、阳性对照组和青年模型对照组的SOD和GSH-Px含量均显著高于老年模型对照组(P<0.05)。结论:人参低聚肽可以在一定程度上改善老年db/db小鼠血糖和糖耐量情况,其可能的作用机制是降低小鼠炎症因子和改善氧化应激状态,调节其免疫。

人参寡肽抗苯并芘诱发肺上皮细胞炎性损伤研究

本研究从人参中提取获得人参寡肽,解析其氨基酸序列;利用CCK-8技术筛选保护人肺上皮Ⅱ型(A549)细胞免受苯并芘(Benzopyrene,Bap)损伤效果最好的寡肽;流式细胞术检测人参寡肽-1(Renshen Oligopeptides-1,RSO-1)在10μmol/L及50μmol/L浓度下对浓度为10 nmol/L的Bap导致的A549细胞凋亡、线粒体膜电位降低和活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)含量增加的影响;蛋白免疫印迹验证10 nmol/L浓度的Bap对A549细胞芳香烃受体(Aromatic Hydrocarbon Receptor,AHR)、NF-κB与MAPK信号通路及AP-1因子的影响,并检测了RSO-1在10及50μmol/L浓度下对Bap毒性的抑制作用。结果表明,10 nmol/L的Bap暴露诱发A549细胞氧化应激(与空白对照组相比具有显著性差异,P<0.05),激活芳香烃受体(Aromatic Hydrocarbon Receptor,AHR)和NF-κB信号通路并诱发细胞凋亡(与空白对照组相比具有显著性差异,P<0.05)。而浓度为10和50μmol/L人参寡肽(Ginseng Oligopeptide,RSO,RSO-1~氨基酸序列-EGHGF)均可抑制Bap暴露导致的AP-1因子表达及芳香烃受体(AHR)和NF-κB的激活,从而抑制Bap暴露导致的细胞凋亡(与Bap组相比均具有显著性差异,P<0.05)。本研究对人参的应用及深层次开发提供理论依据。

人参寡肽-2抗苯并芘诱导人脐静脉内皮细胞炎症损伤活性及机制研究

目的:从人参中分离纯化获得寡肽,并基于苯并芘诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型探究人参寡肽抗苯并芘诱导HUVECs炎症损伤的机制。方法:通过膜超滤、阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相高效液相的方法,从人参中分离具有保护活性的寡肽;CCK-8法检测并筛选出人参寡肽中抗苯并芘诱导HUVECs损伤活性最好的寡肽;试剂盒检测各组细胞ROS、IL-1β、IL-6、IL-18、NO含量;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;RT-qPCR和Western Blot检测各组细胞芳基烃受体通路(AhR、CYP1A1)、凋亡相关(Bax、Bcl-2、Cyt C、APAF-1、pro-Caspase-9)、NLRP3通路(NLRP3、ASC、Caspase-1)、PI3K通路(p-PI3K、p-Akt)基因的mRNA和(或)蛋白表达;并进一步利用siRNA技术和抑制剂干扰AhR和PI3K通路的表达,检测各组细胞IL-1β、IL-6、IL-18含量变化。结果:从人参中共分离获得寡肽3个,其中人参寡肽-2(Phe-Thr-Glu-Gly-Pro)抗苯并芘诱导HUVECs损伤的活性最佳;人参寡肽-2可显著降低苯并芘诱导下HUVECs中ROS、IL-1β、IL-18、NO含量及细胞凋亡率和Bax、Cyt C、APAF-1、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达及AhR、CYP1A1 mRNA和蛋白表达,显著升高Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。使用siRNA和抑制剂干扰AhR表达可显著降低IL-1β、IL-18分泌;PI3K抑制剂可进一步提高苯并芘诱导下HUVECs的IL-1β、IL-18分泌。结论:人参寡肽-2可调控NLRP3炎性小体、AhR和PI3K/Akt信号通路,对苯并芘暴露所致人脐静脉内皮细胞的炎症损伤具有保护作用,继而有助于内皮细胞功能损伤后的修复。

人参牡蛎复合肽固体饮料的配方研究

以人参和牡蛎中的功效成分人参糖肽和牡蛎低聚肽为主要原料,白砂糖和柠檬提取物为辅料,对人参牡蛎复合肽固体饮料的配方进行研究。通过构建BALB/c小鼠注射环磷酰胺致免疫低下动物模型,考察人参糖肽和牡蛎低聚肽质量比1∶1和1∶3的条件下小鼠免疫器官指数、细胞免疫功能、单核-巨噬细胞吞噬功能、自然杀伤细胞活性,筛选两者的最佳配比,并以感官评价为考察指标,采用单因素试验对人参牡蛎复合肽固体饮料的配方进行优化。结果显示,人参牡蛎复合肽具有提高小鼠免疫力的作用,且主要原料1∶1配比效果更为显著;固体饮料最优配方为人参糖肽0.5 g、牡蛎低聚肽0.5 g、白砂糖3 g、柠檬提取物2 g。该研究为人参与牡蛎的综合开发利用提供重要依据。

应用液质联用与分子对接技术筛选黑参中的活性寡肽

应用液质联用和分子对接技术筛选黑参中抑制乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶的活性寡肽类成分。针对黑参醇提物的精制组分,应用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法鉴定精制组分中寡肽类成分,应用分子对接技术进一步对潜在抑制乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶的活性成分进行筛选。黑参醇提物的C8固相萃取30%甲醇洗脱部位富含寡肽类成分,经质谱分析共鉴定出5个寡肽结构,包括谷氨酸-天冬酰胺、酪氨酸-天冬酰胺、亮氨酸-甲硫氨酸、脯氨酸-甲硫氨酸和苏氨酸-苯丙氨酸。这些化合物分别与乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶进行分子对接,其中寡肽酪氨酸-天冬酰胺与乙酰胆碱酯酶结合良好,结合能为-28.0 kJ/mol;寡肽酪氨酸-天冬酰胺与α-葡萄糖苷酶结合良好,结合能为-35.1 kJ/mol。将结合能最低的化合物通过可视化分析,发现黑参中寡肽抑制α-葡萄糖苷酶活性主要通过4个氢键与α-葡萄糖苷酶活性中心的His600和Asp203相互作用;抑制乙酰胆碱酯酶活性主要通过5个氢键与乙酰胆碱酯酶活性中心的Ser203、Tyr337、Gly120、Ser125和Tyr124相互作用。黑参中寡肽类成分具有潜在降血糖和抗阿尔茨海默病作用,可为其进一步开发应用提供科学依据。

吉林人参低聚肽对雄性小鼠性功能影响的实验研究

目的探讨吉林人参低聚肽对雄性小鼠性功能的影响。方法健康清洁级成年ICR雄性小鼠168只,随机分为7组,分别为空白对照组、乳清蛋白组(0.50g/kg bw)及5个吉林人参低聚肽剂量组(0.125g/kg bw、0.25g/kg bw、0.50g/kg bw、1.00g/kg bw、2.00g/kg bw)。连续灌胃30d后,检测血清中NO和睾酮含量,分别取睾丸、精囊和前列腺并精确称重,进行交配实验记录交配潜伏期及20min内交配的次数。结果各项指标中空白对照组与乳清蛋白组之间差异均无统计学意义;与乳清蛋白组相比,吉林人参低聚肽各剂量组可不同程度的增加雄性小鼠附性器官指数,提高血清中的NO和睾酮浓度,缩短小鼠交配潜伏期并增加交配次数。结论吉林人参低聚肽可提高小鼠性功能。

吉林人参低聚肽抗疲劳作用

为探讨吉林人参低聚肽对实验小鼠的抗疲劳作用,将336只SPF级雄性ICR小鼠随机分为7组,分别为空白对照组、乳清蛋白组(0.500 g/kg)及5个吉林人参低聚肽剂量组(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 g/kg)。连续灌胃30 d后,进行负重游泳实验测定各组小鼠负重游泳力竭时间,采用全自动生化仪测定各组小鼠血清尿素氮含量和乳酸脱氢酶活力,采用紫外分光光度计法检测各组小鼠血乳酸水平,采用试剂盒检测各组小鼠肝糖原含量。各项指标中空白对照组与乳清蛋白组之间均无统计学差异;与乳清蛋白组相比,适当剂量的吉林人参低聚肽干预可提高小鼠运动耐力,延长负重游泳时间,降低运动后血乳酸和血尿素氮的含量,提高乳酸脱氢酶活性和肝糖原的含量。因此,吉林人参低聚肽具有缓解实验小鼠体力疲劳功能。

吉林人参低聚肽的免疫调节作用

为研究吉林人参低聚肽(GOP)对小鼠的免疫调节作用,选取280只SPF级雌性BALB/c小鼠,随机分为7组:空白对照组、乳清蛋白组(150 mg/kg)及5个GOP组(37.5、75、150、300、600 mg/kg)。连续灌胃30 d后,进行免疫7项实验测定,观察GOP对小鼠免疫器官相对重量、细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能和NK细胞活性的影响。结果表明:GOP显著提高了Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力、迟发型变态反应能力、抗体生成细胞数、小鼠碳廓清指数、巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、NK细胞活性(P<0.05),且效果优于乳清蛋白。由此可知,GOP可以通过增强细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞吞噬能力和NK细胞活性,起到增强免疫力的作用。

吉林人参低聚肽减轻大鼠慢性炎症作用

目的探讨吉林人参低聚肽减轻大鼠慢性炎症作用及机制。方法将大鼠随机分为5组,分别为对照组和62.5、125.0、250.0、500.0 mg/kg人参组,分别灌胃给予蒸馏水和相应浓度的吉林人参低聚肽,每天1次,连续30 d。采用棉球植入法计算棉球肉芽肿净重量、酶联免疫法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-10、一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)水平。结果与对照组比较[(0.248±0.038)g],250.0 mg/kg人参组大鼠肉芽肿净重量[(0.162±0.047)g]下降(P<0.05),呈一定剂量效应关系;对照组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-10、PGE2水平及NO含量分别为(309.9±16.1)、(46.2±2.6)、(30.4±3.1)、(354.2±10.2)ng/L与(36.2±3.1)μmol/L,250.0 mg/kg人参组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-10、PGE2水平及NO含量分别为(202.4±17.3)、(21.4±2.4)、(68.4±3.9)、(438.6±16.3)ng/L与(31.5±2.5)μmol/L;与对照组比较,250.0mg/kg人参组大鼠血清中TNF-α、IL-1β与NO水平下降,IL-10、PGE2水平升高(P<0.05)。结论吉林人参低聚肽能够减轻大鼠慢性炎症反应,其机制可能与其降低促炎因子水平、升高抗炎因子水平有关。

吉林人参低聚肽清咽功能的实验研究

目的验证吉林人参低聚肽是否具有清咽功能。方法按照《保健食品检验与评价技术规范(2012修订版)》中的清咽功能检验方法进行,包括SD大鼠棉球植入、SD大鼠足趾肿胀、BALB/c小鼠耳廓肿胀3个实验。分别将SD大鼠按体重随机分为4个剂量组(0.062 5、0.125、0.25、0.50 g/kg)和1个空白对照组,将BALB/c小鼠按体重也随机分为4个剂量组(0.075、0.150、0.300、0.600 g/kg)和1个空白对照组,分别给予不同浓度的受试物和蒸馏水,每天1次,连续灌胃30 d。实验结束当天再给1次受试样品,计算肉芽肿净量、足趾肿胀率和耳廓肿胀率。结果与空白对照组相比,各剂量组大鼠棉球肉芽肿净重,1、2、4、6 h大鼠足趾肿胀率显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与空白对照组相比,各剂量组小鼠耳廓肿胀率随着受试物剂量的增大而逐渐减小,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论吉林人参低聚肽具有清咽的功能。

运用化学计量学法高通量筛选人参抗老年痴呆的氨基酸成分

应用Ellman改良法和MTT法对人参水提物超滤分级后的<1 kD,1~3 kD,3~10 kD,>10 kD及总提物共5个组分进行体外乙酰胆碱脂酶(AChE)抑制活性和神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)保护活性筛选,对吉林省内12个样地的人参水提物<1 kD活性组分进行氨基酸检测,获得各样品的氨基酸共有峰图谱数据,并测定各样品的AChE抑制率和SH-SY5Y细胞存活率,采用主成分分析(PCA)、偏最小二乘法(PLS)和灰色关联度分析(GRA)对所获得的氨基酸共有峰数据进行处理后,可有效区分人参的不同产地,并筛选出其中潜在抗AChE活性和SH-SY5Y细胞保护活性的氨基酸成分。试验结果显示,苏氨酸(Thr)和亮氨酸(Leu)在氨基酸共有峰中对AChE的抑制活性最佳,苏氨酸(Thr)、丙氨酸(Ala)及亮氨酸(Leu)对SH-SY5Y损伤细胞具有较好的保护作用。揭示了人参水提物<1 kD组分具有良好的AChE体外抑制活性和SH-SY5Y细胞损伤保护作用。因此,苏氨酸(Thr)和亮氨酸(Leu)可能具有潜在的抗阿尔茨海默病(AD)活性,该成分为寻找抗AD寡肽类药物提供物质基础。此研究方法为简单、高通量的从中药中筛选抗AD的活性物质提供借鉴。