朝鲜红参中人参皂苷类成分含量测定及指纹图谱研究

目的：建立可同时测定朝鲜红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg15种成分含量和指纹图谱的HPLC方法。方法：采用DiscoveryC18（4.6×250mm,5μm）柱,流动相为水（A）-乙腈（B）梯度洗脱;流速1.0ml min-1,柱温为25℃,检测波长为203nm,并用计算机辅助相似性评价系统对指纹图谱进行了相似度分析。结果：朝鲜红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg1的线性范围分别为1.077~5.385μg,1.046~5.230μg,0.0953~0.4765μg,1.018~5.090μg,0.973~4.865μg,相关系数分别为0.9999,0.9999,0.9995,0.9995,0.9996。人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg1平均回收率分别为96.55%、101.4%、99.08%、99.92%、96.00%;RSD分别为1.6%、1.2%、1.5%、1.2%、1.3%。不同规格的朝鲜红参之间及朝鲜红参与国产红参都具有较好的相关性。结论：该方法重复性好,可以用来同时测定朝鲜红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg1五种成分的含量,14批不同规格的朝鲜红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re和Rg15种成分含量存在差异,但总体而言,朝鲜红参与国产红参在人参皂苷含量和指纹图谱上无明显差异。

人参皂苷Rb_(1)对MPTP诱导的神经元损伤和小鼠行为学异常的作用研究

探讨人参皂苷Rb_(1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetmhydropyridine,MPTP)诱导的小鼠多巴胺能神经元损伤及小鼠行为学异常的作用及可能的机制。体外分离培养小鼠多巴胺能神经元,给予MPTP(10μmol/L)损伤和不同剂量的Rb_(1)(10、20、40μmol/L)药物治疗处理,观察神经元形态。对C57B/L6小鼠腹腔注射MPTP(30 mg/kg)构建帕金森模型,灌胃给予不同剂量Rb_(1)(10、20、40 mg/kg)药物治疗,采用旷场实验及爬杆实验对小鼠进行行为学检测;采用蛋白免疫印迹反应(Western blot)检测纹状体TH、CaMKII、FP1和Bcl-2的表达。结果显示,与对照组相比,不同剂量人参皂苷Rb_(1)可以明显改善MPTP诱导的神经元损伤;人参皂苷Rb_(1)处理能显著改善MPTP诱导的PD模型小鼠行为学异常;人参皂苷Rb_(1)可以显著上调MPTP所造成的TH、Bcl-2的减少,对CaMKII及FP1表达的减少没有显著作用。人参皂苷Rb_(1)对MPTP诱导的神经元损伤和小鼠行为学异常具有明显的改善作用,其机制可能与逆转TH和Bcl-2的表达有关。

基于HPLC与化学计量法的不同年限林下参茎、叶中皂苷类成分比较分析

目的采用HPLC法对不同年限人参Panax ginseng(林下参)茎、叶中10种人参皂苷类成分含量进行测定,结合化学模式识别比较含量差异。方法采用HPLC法对10、15、20、25年林下参茎、叶中人参皂苷Rg_(1)、Re、Rf、Rg_(2)、Ro、Rb_(1)、Rc、Rb_(2)、Rb_(3)、Rd含量进行测定,采用化学计量学方法对结果进行分析。结果HPLC结果显示,在林下参茎中未检测到人参皂苷Rb_(2)、Rb_(3),林下参叶中10种皂苷含量远高于林下参茎中。在4种年限林下参叶中,10种人参皂苷总量在60~100 mg/g,20年时含量最高;在4种年限林下参茎中,除人参皂苷Rb_(2)、Rb_(3)外的8种人参皂苷总量在20年最高;原人参二醇型皂苷在20年林下参叶中最高。原人参三醇型皂苷在15年林下参叶中皂苷含量最高;4种年限林下参茎、叶中差异性成分为人参皂苷Re、Rd、Rg_(1)和Rc。结论不同生长年限的林下参茎、叶中皂苷含量存在差异,为林下参非药用部位资源的开发与利用提供理论依据。

不同产地人参根和根茎中人参皂苷的含量分析

目的:研究不同产地人参根和根茎中14个人参皂苷的含量,为制定人参皂苷的质量标准提供科学依据。方法:采用Diamonsil·ODS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)以乙腈和乙腈-水-0.1%磷酸水溶液(5:90:8,v/v/v)为流动相,梯度洗脱,203nm波长处二极管阵列检测器检测,外标对照品法测定人参根和根茎中人参皂苷(G)Ra_1、Ra_2、Rb_1、Rb_2、Rb_3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg_1、Ro,20-O-葡萄糖基人参皂苷Rf(20-GG-Rf)三七人参皂苷(NG)R_1、R_2 14个化合物。结果:不同产地人参根和根茎中人参皂苷含量的变化较大,26批次五年生人参根和根茎样品中14个人参皂苷的含量(μg·g^(-1),人参根和根茎)变化幅度分别为G-Ra_1,0~2 958;G-Ra_2,0~1 320;G-Rb_1,1 195~7 129;G-Rb_2,835~6 993;G-Rb_3,178~1 812;G-Rc,414~5 569;G-Rd,393~5 529;G-Re,603~3 564;G-Rf,301~1 504;G-Rg_1,738~4 710;G-Ro,893~8 569;20-GG-Rf,110~656;NG-R_1,74~778;NG-R_2,0~844。结论:G-Ra_1、Ra_2、Rb_1、Rb_2、Rb_3、Rc和Rd为典型的原人参二醇型人参皂苷,G-Re、Rf、Rg_1,20-GG-Rf、NG-R_1和R_2为典型的原人参三醇型人参皂苷,G-Ro为典型的齐墩果酸型人参皂苷,三大类人参皂苷能代表体现人参药物活性的皂苷成分。其中,又以G-Rb_1、Rb_2、Rb_3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg_1、Ro和20-GG-Rf含量更高,作为判定人参根和根茎中人参皂苷质量的指标性成分更科学。

基于趁鲜切制与传统切制工艺的人参饮片质量评价分析

目的 优选人参Panax ginseng趁鲜切制饮片工艺,比较分析趁鲜切制与传统切制人参饮片的质量,为人参趁鲜切制的合理性提供数据支持。方法 考察切片厚度、烘干温度、烘干时间等因素优选人参趁鲜切制饮片最佳制备工艺;建立指纹图谱结合化学计量法评价2种炮制工艺人参饮片质量差异性;并定量分析2种人参饮片中指标性成分人参皂苷含量差异。结果 人参趁鲜切制饮片的最佳制备工艺为人参鲜药材含水量65%,烘干温度50℃、烘干时间8 h、切片厚度1.5 mm;指纹图谱分别确定了人参趁鲜切制饮片和传统切制工艺饮片22个共有峰,指认了其中7个共有峰,2种炮制工艺所得人参饮片指纹图谱相似度分别在0.983~0.992、0.948~0.996。趁鲜切制与传统切制工艺饮片之间的指纹图谱相似度为0.960~0.993,相似度良好;主成分分析(principal component analysis,PCA)将人参趁鲜切制饮片和传统切制饮片归为2类,正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)确定2种炮制工艺项下饮片的7个差异色谱峰,趁鲜切制及传统工艺人参饮片总皂苷含量无显著差别。结论 趁鲜切制加工工艺在人参饮片生产上具有可行性。

一测多评法测定芪白平肺颗粒中8种皂苷类成分

目的 建立一测多评法（QAMS）测定芪白平肺颗粒中8种皂苗成分的分析方法。方法 以芪白平肺颗粒为研究对象,以人参皂苷Rb_1为内参物,计算人参皂苷Re、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、黄芪甲苷、人参皂苷Rd与人参皂苷Rb_1的相对较正因子（f）,通过f计算芪白平肺颗粒中7种成分,并在10批芪白平肺颗粒中进行验证,比较该方法与外标两点法测定结果的相似度。结果 人参皂苷Rg_1、Re、Rf、Rb_1、Rc、Rb2、Rd、黄芪甲苷分别在进样量为0.416 0-4.992、0.315 4-3.785 2、0.259 6-3.115、0.385 2-4.622、0.222 8-2.674、0.193 2-2.318、0.183 5-2.202、0.574 6-6.895μg线性关系良好,f值分别为1.244、1.075、1.133、1.090、1.071、1.070、0.967,且在不同条件下重复性良好。QAMS法的计算结果与外标两点法的测定结果无显著性差异,再验证结果也无显著性差异,实验所得的f值可信。结论 建立的QAMS可以准确、快速地实现芪白平肺颗粒中多种皂苷类成分的定量测定。

基于细胞膜色谱技术的人参皂苷及五味子木脂素与血管内皮生长因子受体的作用分析

目的运用细胞膜色谱(CMC)技术检测分析人参皂苷与五味子木脂素中15种成分与血管内皮生长因子(VEGF)受体的作用。方法运用Western blotting法检测筛选VEGF受体高表达细胞株;构建VEGF受体CMC,并建立ECV304/CMC online-LC检测方法,以索拉菲尼作为阳性药,对人参皂苷Rb_(1)、Rb_(2)、Rb_(3)、Rc、Rd、Rg_(1)、Rg_(2)、Rg_(3)、Rh_(1)、Ro、F_(2),五味子甲素,五味子乙素,五味子醇甲,五味子醇乙进行VEGF受体结合强度的检测分析;CCK-8法检测筛选出的成分(5、10μg/mL)对ECV304细胞的促增殖作用。结果Western blotting结果显示,ECV304细胞中VEGF受体高表达;人参皂苷Rb_(1)、Rb_(2)、Rb_(3)、Rc、Rd、Rg_(3)、Rh_(1)、F_(2)、五味子甲素、五味子乙素与VEGF受体CMC柱有结合作用;CCK-8法检测以上成分对ECV304细胞的活力影响发现,人参皂苷Rb_(2)能促进细胞的增殖。结论人参皂苷Rb_(2)能与VEGF受体结合,且显著促进ECV304细胞增殖。

不同干燥方式对人参果浆中稀有皂苷生成的影响

目的 研究采不同干燥方法对人参Panax ginseng果浆中原型皂苷降解和稀有皂苷生成的影响。方法 采用HPLC建立了同步检测11种人参皂苷含量的分析方法,对采用冷冻、电热、汽热3种方法干燥的人参果浆样品中原型皂苷和稀有皂苷的含量进行了测定。结果 与未干燥处理的人参果浆进行对比,冷冻干燥样品中11种人参皂苷含量变化较小;人参果浆电热干燥和汽热干燥样品中原型皂苷发生降解,稀有皂苷生成出现不同程度增加。结论 人参果浆经电热干燥和汽热干燥后原型人参皂苷Re、Rg_(1)、Rb_(1)、Rc、Rb_(2)、Rb_(3)发生降解,稀有人参皂苷F_(1)、Rh_(1)、Rg_(3)、Rk_(1)、Rh_(2)含量增加。