采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉表达载体的构建

为在泡盛曲霉中表达外源基因、克服泡盛曲霉常规转化法效率低下的瓶颈,本研究拟构建采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉表达载体。通过PCR,从糖化酶基因(glaA)高效表达的泡盛曲霉菌株SG1基因组DNA扩增获得glaA 2.1 kb启动子片段(包含信号肽编码序列)及1.1kb终止子片段,构建了外源基因表达盒。以根瘤农杆菌双元载体pCAMBIA1302为基础,删除非必需区段及多余限制酶位点,插入上述外源基因表达盒及来自丝状真菌标记载体pAN7-1的潮霉素抗性标记,构建采用农杆菌介导转化法的泡盛曲霉分泌整合型表达载体pSUAA52am。转化结果表明:采用原生质体法的转化效率为21个转化子/10~6分生孢子,而农杆菌介导法可达1106个转化子/10~6分生孢子,是原生质体法的53倍。构建载体成功利用glaA表达盒与农杆菌介导转化法的高效特性,可为利用泡盛曲霉高效表达外源基因奠定基础。