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携带乙肝大包膜蛋白L基因与结核Esat6融合基因植物表达载体的构建及鉴定
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作者 李君武 宫君原 +2 位作者 刘鑫 叶秋萍 黄清华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期1-6,共6页
构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404。分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6... 构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404。分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6融合基因片段,连接到有玉米特异性启动子globulin-1的pEGG载体上,将G-L-Esat6融合基因片段酶切下,连接到含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。构建了真核表达重组质粒pCAMG-L-Esat6,测序分析表明,克隆的L和Esat6序列与NCB I上公布序列一致。成功构建与转化了包含编码乙肝病毒大包膜蛋白L基因和结核杆菌Esat6基因的植物表达载体,并将其转化入根癌农杆菌LBA4404中,为成功研制利用转基因植物生产抗乙肝和结核联合口服疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 乙肝病毒 大包膜蛋白L基因 Esat6基因 globulin-l
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大豆种子7S、11S球蛋白及7S球蛋白亚基的研究 被引量:19
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作者 姜振峰 赫卫 +1 位作者 汪洋 李文滨 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期138-141,共4页
利用线性梯度SDS-PAGE方法分析了黑龙江省422份大豆资源材料的7S和11S球蛋白含量、7S球蛋白α′、α和β亚基的含量变化,以及百粒重、蛋白质含量、油分含量、11S球蛋白、7S球蛋白、11S/7S比值的相关性。结果表明大豆种子贮藏蛋白品种间... 利用线性梯度SDS-PAGE方法分析了黑龙江省422份大豆资源材料的7S和11S球蛋白含量、7S球蛋白α′、α和β亚基的含量变化,以及百粒重、蛋白质含量、油分含量、11S球蛋白、7S球蛋白、11S/7S比值的相关性。结果表明大豆种子贮藏蛋白品种间亚基带型基本一致,但是品种间相同亚基含量差异很大,变异系数均大于10%,变异类型丰富,本实验发现1份α′亚基缺失材料。大豆百粒重、蛋白质含量、油分含量、11S球蛋白、7S球蛋白以及11S/7S比值之间的相关性结果表明:11S球蛋白含量和7S球蛋白含量间(r=-1**)、蛋白质含量和油分含量间(r=-0.776**)显著负相关;11S/7S比值和百粒重、蛋白质含量以及油分含量间无显著相关性。 展开更多
关键词 大豆 贮藏蛋白 球蛋白 亚基
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陕西省农家种大豆资源11S和7S球蛋白含量分析 被引量:1
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作者 张敏娟 刘萌娟 赵惠贤 《干旱地区农业研究》 CSCD 北大核心 2008年第1期187-193,共7页
利用SDS—PAGE分析了陕西省75份农家种大豆核心种质的11S和7S球蛋白亚基组成、相对百分含量和11S/7S比值,并对陕北、关中和陕南三个地区的资源材料进行了分析和比较。结果表明:大豆贮藏蛋白质由许多亚基组成,其中含量较高的有α'... 利用SDS—PAGE分析了陕西省75份农家种大豆核心种质的11S和7S球蛋白亚基组成、相对百分含量和11S/7S比值,并对陕北、关中和陕南三个地区的资源材料进行了分析和比较。结果表明:大豆贮藏蛋白质由许多亚基组成,其中含量较高的有α'、α、β、A3、Acid和Basic;不同品种间大豆球蛋白组成几乎没有差异,但是各亚基的含量存在较大差异;75份供试材料的7S、11S球蛋白含量的平均值分别为36%和64%,交幅分别为28%~48%和52%~72%;11S/7S比值的交异幅度在1.09~2.53,平均值为1.78,高于2.0的种质有19个;陕北、关中、陕南三个地区农家种大豆群体11S/7S比值存在显著差异。 展开更多
关键词 大豆 农家种 球蛋白 SDS—PAGE
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批量法研究牛γ-球蛋白在尼龙亲和膜上的等温吸附行为 被引量:2
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作者 甘宏宇 商振华 +1 位作者 刘学良 王俊德 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2001年第6期637-641,共5页
以尼龙膜为基质,L-色氨酸(Trp)为配基,合成了一种新的亲和介质用以吸附牛γ-球蛋白(BGG)。用批量法系统考察了温度、离子强度和pH对亲和等温吸附的影响。研究结果表明,BGG与氨基酸之间的亲和相互作用力主要是静电... 以尼龙膜为基质,L-色氨酸(Trp)为配基,合成了一种新的亲和介质用以吸附牛γ-球蛋白(BGG)。用批量法系统考察了温度、离子强度和pH对亲和等温吸附的影响。研究结果表明,BGG与氨基酸之间的亲和相互作用力主要是静电力和疏水相互作用力。在最适条件下吸附遵循Langmuir型吸附,并且亲和吸附量最大而非特异性吸附最小。偏离该条件则会发生蛋白质在膜上的堆积,蛋白质构型变化及蛋白质与配基间的空间取向的变化,从而使吸附不再遵循Langmuir型吸附。 展开更多
关键词 亲和膜色谱 L-色氨酸 γ-球蛋白 批量法 等温吸附 尼龙亲和膜 分离 纯化
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706份中国大豆种质贮藏蛋白7S和11S组分及其亚基相对含量的研究(英文) 被引量:26
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作者 麻浩 王显生 +4 位作者 刘春 俞阗 郝小燕 高文瑞 何小铃 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期11-17,共7页
大豆籽粒贮藏蛋白7S和11S组分及其亚基含量、11S/7S比值与大豆蛋白的营养价值和加工特性密切相关。获得具不同7S和11S组分及其亚基含量、不同11S/7S比值的种质材料是对大豆蛋白的营养价值和功能特性进行遗传育种改良的重要材料基础。本... 大豆籽粒贮藏蛋白7S和11S组分及其亚基含量、11S/7S比值与大豆蛋白的营养价值和加工特性密切相关。获得具不同7S和11S组分及其亚基含量、不同11S/7S比值的种质材料是对大豆蛋白的营养价值和功能特性进行遗传育种改良的重要材料基础。本研究利用SDS-PAGE技术,对706份中国大豆种质资源7S、11S组分及其亚基相对含量进行了研究。结果表明:706份我国大豆种质资源中7S、11S组分及其亚基相对含量具有丰富的遗传变异;7S和11S组分含量间存在极显著的负相关(r=-1.00,P<0.01);603份地方品种和103份新育成品种或主栽品种的7S、11S组分相对含量的平均值和变异幅度分别为40.00%,20.58%~56.65%,60.00%,43.35%~79.42%和38.21%,30.33%~52.67%,61.79%,47.33%~69.67%;11S/7S比值的平均值和变异幅度分别为1.54,0.77~3.86和1.65,0.90~2.30;筛选获得了63份7S、11S组分或亚基含量变异种质。 展开更多
关键词 大豆 种质资源 SDS-PAGE 11S 7S组分及其亚基 相对含量
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3个陆地棉球蛋白基因启动子的克隆与功能初步分析
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作者 魏琦超 张锐 +4 位作者 孙国清 孟志刚 周焘 赵雷霖 郭三堆 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期104-114,共11页
为克隆陆地棉来源的种子特异性启动子,根据雷蒙德氏棉测序结果,设计针对GhαGLOA、GhβGLOA和GhβGLOB基因编码区上游约1.5 kb序列的引物,分别以陆地棉总DNA为模板克隆了3条序列。构建了含有编码区上游序列驱动GUS的表达载体,经农杆菌... 为克隆陆地棉来源的种子特异性启动子,根据雷蒙德氏棉测序结果,设计针对GhαGLOA、GhβGLOA和GhβGLOB基因编码区上游约1.5 kb序列的引物,分别以陆地棉总DNA为模板克隆了3条序列。构建了含有编码区上游序列驱动GUS的表达载体,经农杆菌介导转化野生型拟南芥。转基因拟南芥种子的GUS活性荧光检测结果表明,所克隆序列具有启动子功能,其中GhαGLOA启动子的转录活性极显著高于其他2个启动子。在转基因拟南芥成体植株的多个器官中,仅可检出痕量的GUS活性,认为所克隆启动子为种子特异性启动子。 展开更多
关键词 陆地棉 球蛋白 启动子 种子特异性启动子 顺式作用元件
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L-赖氨酸-Sepharose 4B吸附纤溶酶原及纤溶酶
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作者 王期中 李西河 +1 位作者 徐贯芬 庞广礼 《药学实践杂志》 CAS 1997年第2期90-92,共3页
本次研究为了解决人血丙种球蛋白制品因纤溶酶原及纤格酶引起的IgG裂解问题,采用了L-赖氨酸与Sepharose4B偶联后吸附制品中纤溶酶原及纤溶酶。结果表明,人血丙种球蛋白中纤港酶原及纤溶酶被吸附。被吸附过的制品与未被吸附过的制品相... 本次研究为了解决人血丙种球蛋白制品因纤溶酶原及纤格酶引起的IgG裂解问题,采用了L-赖氨酸与Sepharose4B偶联后吸附制品中纤溶酶原及纤溶酶。结果表明,人血丙种球蛋白中纤港酶原及纤溶酶被吸附。被吸附过的制品与未被吸附过的制品相比较其裂解程度显著降低。因此,在人血丙种球蛋白生产工艺中,加入L-赖氨酸-Sepharose4B吸附纤溶酶原和纤溶酶,可明显提高产品稳定性,解决人血丙种球蛋白裂解的问题,可提高产品的稳定性。 展开更多
关键词 人血丙种球蛋白 赖氨酸 Sepharose4B 纤溶酶
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鸦胆子转录组测序及基因功能注释
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作者 石好宇 王慧芸 +4 位作者 赵艺 朱甫臻 尹艳燕 缪剑华 王灵芝 《中南药学》 CAS 2022年第6期1267-1273,共7页
目的丰富临床常用中药鸦胆子的基因资源,揭示其主要活性成分苦木素类化合物的生物合成途径。方法采用高通量测序技术对鸦胆子进行转录组测序分析,构建鸦胆子转录组数据库,经de novo组装后进行生物信息学分析。结果本研究共获得85828条Un... 目的丰富临床常用中药鸦胆子的基因资源,揭示其主要活性成分苦木素类化合物的生物合成途径。方法采用高通量测序技术对鸦胆子进行转录组测序分析,构建鸦胆子转录组数据库,经de novo组装后进行生物信息学分析。结果本研究共获得85828条Unigenes,平均长度为1775 bp;有68806条Unigenes在七大功能数据库得到注释,分别有67087(78.16%)、59850(69.73%)、49801(58.02%)、53755(62.63%)、52416(61.07%)、43042(50.15%)以及52214(60.84%)条Unigenes分别注释到NR、NT、SwissProt、KOG、KEGG、GO和Pfam数据库。KEGG分析发现276条萜类骨架(苦木素合成的重要前体)生物合成途径。球蛋白水解物具有显著的抗肿瘤活性,本研究共获得56624个编码蛋白框(CDS)序列,其中有10个与球蛋白相关。共检测到36045个简单重复序列(SSR),且以单核苷酸重复基序出现频率最高,其次是二核苷酸与三核苷酸重复基序。结论本研究首次对鸦胆子转录组进行全面的测序分析,可进一步促进鸦胆子药用价值的开发。 展开更多
关键词 鸦胆子 转录组分析 代谢通路 球蛋白 苦木素
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Protein Bodies in Cotyledon Cells Exhibit Differential Patterns of Legumin-Like Proteins Mobilization during Seedling Germinating States
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作者 Jose C. Jimenez-Lopez Maria C. Hernandez-Soriano 《American Journal of Plant Sciences》 2013年第12期2444-2454,共11页
Olive (Olea europaea L.) tree is one of the most extensive and important agricultural crop in Mediterranean countries due to its beneficial health and nutritional properties and its high economic value. Currently, oli... Olive (Olea europaea L.) tree is one of the most extensive and important agricultural crop in Mediterranean countries due to its beneficial health and nutritional properties and its high economic value. Currently, olive tree constitutes the sixth most important cultivated plant in the world, spreading from the Mediterranean region of origin to new production areas such as Australia, South and North America and South Africa. However, the mobilization processes of storage materials i.e. reserve proteins during seed germination, which are largely involved in essential physiological process including plant growth and development, remain poorly understood. Morphometric and immunohistochemistry analyses of protein bodies contained in olive seed storage tissues, cotyledon and endosperm, were performed by using different microscopy techniques, including light (bright-field and fluorescence) microscopy and transmission electron microscopy. Furthermore, we used legumin-like proteins (11S-type globulins) as a molecular marker to study the mobilization of reserve proteins from PBs of cotyledons at germinating seedling stages by using immunofluorescence assays. Results demonstrated that cotyledon and endosperm are characterized by distinct PBs populations containing legumin-like proteins, distinctly discriminated by the number of PBs per cell and tissue, size, immunofluorescence and histochemical staining. These features reflect differential PBs biogenesis during development and maturation processes in olive seed tissues endosperm and cotyledon, in relation to proteins (polypeptides) final composition, SSPs processing and/or packaging during seed maturation. Three different mobilization patterns of legumin-like proteins were identified for the first time in cotyledon PBs during seedling germinating process. Mature proteins composition and/or processing, cell types and enzyme composition and/or differential activation have been discussed as key features determining how proteins mobilize from PBs for further degradation in the cotyledon. 展开更多
关键词 11S GLOBULINS COTYLEDON Endosperm In Vitro Germination Legumin-Like PROTEINS Olea europaea L. Protein Bodies Seed PROTEINS MOBILIZATION
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甲状腺癌患者术后感染的病原学特点及临床指标诊断价值分析
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作者 陈东奇 刘小瑜 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第4期460-464,共5页
目的分析甲状腺癌患者术后感染的病原学特点,探讨血PCT、MCP-1、免疫球蛋白对患者术后并发感染的诊断价值。方法选取2020-2022年福建省泉州市第一医院收诊的105例甲状腺癌术后并发感染患者为本次研究对象,同时随机选取同期进行甲状腺癌... 目的分析甲状腺癌患者术后感染的病原学特点,探讨血PCT、MCP-1、免疫球蛋白对患者术后并发感染的诊断价值。方法选取2020-2022年福建省泉州市第一医院收诊的105例甲状腺癌术后并发感染患者为本次研究对象,同时随机选取同期进行甲状腺癌手术未发生感染的90例患者作为对照组。采集患者标本并进行培养和病原菌鉴定,采用K-B纸片扩散法对主要病原菌进行药敏试验。采集所有患者静脉血,采用化学发光免疫分析法检测降钙素原(Procalcitonin,PCT)、单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)水平,采用免疫比浊法测定免疫球蛋白G(Immune globulin G,IgG)、免疫球蛋白A(Immune globulin A,IgA)、免疫球蛋白M(Immune globulin M,IgM)水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析术后1 d、3 d的PCT、MCP-1、IgG、IgA、IgM水平对术后并发感染的诊断价值。结果105例甲状腺癌患者发生术后感染,感染部位主要为呼吸道系统(41.90%),其次为切口部位(30.48%)。本次研究中共检出病原菌87株。革兰阳性菌(29株,33.33%)主要为金黄色葡萄球菌(12株,13.79%)、肺炎链球菌(11株,12.64%)。革兰阴性菌(52株,59.77%)主要为肺炎克雷伯菌(26株,29.89%)、铜绿假单胞菌(17株,19.54%)。真菌(6株,6.90%)主要为白色念珠菌(3株,3.45%)。革兰阳性菌金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌对常用抗菌药物克林霉素、青霉素、红霉素的耐药性均高于60%,对利福平的耐药率低于20%,未产生对利奈唑胺、万古霉素、喹诺普汀/达福普汀的耐药株。革兰阴性菌肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌对常见抗菌药物庆大霉素、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星的耐药率均高于50%,对阿米卡星、亚胺培南的耐药率低于15%,未产生对多粘菌素B的耐药株。感染组患者术后1 d、3 d的PCT、MCP-1水平均高于对照组患者水平,术后1 d、3 d的IgG、IgA、IgM水平均低于对照组患者水平,差异有统计学意义(P<0.05)。采用ROC曲线评估术后1 d、3 d的PCT、MCP-1水平对并发感染的诊断价值显示,术后3 d MCP-1水平的曲线下面积(AUC)最大,为0.998(95%CI:0.995~1.000)。采用ROC曲线评估术后IgG、IgA、IgM水平对并发感染的诊断价值显示,术后3 d IgM水平的曲线下面积(AUC)最大,为1.000(95%CI:0.999~1.000)。结论甲状腺癌患者术后感染多发生于呼吸道系统,以革兰阴性菌为主要病原菌。通过检测患者PCT、MCP-1、IgG、IgA、IgM水平变化可以有效预测患者术后感染的发生。 展开更多
关键词 甲状腺癌 术后感染 单核细胞趋化蛋白-1 免疫球蛋白
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