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TSP-1 promotes glomerular mesangial cell proliferation and extracellular matrix secretion in Thy-1 nephritis rats 被引量:2
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作者 Wen Qiu Yan Li +5 位作者 Jianbo Zhou Chenhui Zhao Jing Zhang Kai Shan Dan Zha Yingwei Wang 《The Journal of Biomedical Research》 CAS 2011年第6期402-410,共9页
The proliferation of glomerular mesangial cells (GMC) and secretion of the extracellular matrix (ECM) in rat with Thy-1 nephritis (Thy-lN) resembling human mesangioproliferative glomerulonephritis have been expl... The proliferation of glomerular mesangial cells (GMC) and secretion of the extracellular matrix (ECM) in rat with Thy-1 nephritis (Thy-lN) resembling human mesangioproliferative glomerulonephritis have been explored for many years; however, the molecular mechanisms of GMC proliferation and ECM production remain unclear. Our previous studies have demonstrated that the thrombospondin-1 (TSP-1) gene was involved in mediating rat GMC proliferation and ECM synthesis induced by sublytic C5b-9 in vitro. 111 the present study, the roles of the TSP-1 gene in GMC proliferation, ECM production, and urinary protein secretion in Thy-lN rats were determined by using TSP-1 small hairpin RNA, and the results revealed that silencing of the TSP-1 gene in rat renal tissues could diminish GMC proliferation (P 〈 0.01) and ECM secretion (P 〈 0.01) as well as urinary protein secretion (P 〈 0.05) in Thy-lN rats. Together, the current findings suggested that TSP-1 gene expression was required for GMC proliferation and ECM production in Thy-lN rats. 展开更多
关键词 Thy-1 nephritis glomerular mesangial cells (gmcs) PROLIFERATION extracellular matrix thrombospondin-1 TSP-1)
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沉默大鼠KAT7基因对亚溶解型C5b-9刺激GMC诱导趋化因子MCP-1生成的影响 被引量:1
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作者 宫雅娟 张婧 +4 位作者 刘玉 赵聃 邱文 夏露 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期423-428,共6页
目的:研究沉默大鼠赖氨酸乙酰基转移酶7(lysine acetyltransferase 7,KAT7)基因对亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cell,GMC)诱导单核趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-l,MCP-1)生... 目的:研究沉默大鼠赖氨酸乙酰基转移酶7(lysine acetyltransferase 7,KAT7)基因对亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cell,GMC)诱导单核趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-l,MCP-1)生成的影响。方法:针对KAT7基因不同位点,用DNA重组技术设计4个小发夹RNA(short hairpinRNA,shRNA),分别克隆到真核表达载体p GCsi-U6/Neo/GFP/shRNA中。之后,用NeonTM电转仪将上述质粒转染至体外培养的GMC中,再给予sublytic C5b-9刺激。行Western blot实验检查筛选出针对KAT7基因且有最佳沉默效率的shRNA。此外,用real-time PCR和ELISA法分别检测GMC行不同分组处理后MCP-1的mRNA和蛋白水平。结果:核酸测序表明,重组的sh KAT7质粒构建成功。Western blot显示,sh KAT7-2是具备最佳沉默效率的shRNA。用sh KAT7转染GMC后,由sublytic C5b-9刺激GMC诱导的MCP-1基因表达水平显著下降。结论:成功构建了大鼠KAT7 shRNA真核表达质粒,并初步证实KAT7基因的表达能够促进sublytic C5b-9刺激大鼠GMC诱导趋化因子MCP-1的合成与分泌。 展开更多
关键词 KAT7 sublytic C5B-9 肾小球系膜细胞(gmc) MCP-1 SHRNA
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上调HBO1基因对亚溶解型C5b-9刺激大鼠GMCs生成CCL5的作用机制研究
3
作者 宫雅娟 马芳 +1 位作者 张楠 郝艳梅 《齐齐哈尔医学院学报》 2021年第22期1933-1937,共5页
目的研究上调乙酰基转移酶(HBO1)基因对亚溶解型C5b-9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)生成趋化因子CCL5的作用机制。方法构建外源性真核表达重组质粒pIRES2-HBO1,利用NeonTM电转仪将重组质粒转染至体外培养的GMCs中,免疫印迹(WB)实... 目的研究上调乙酰基转移酶(HBO1)基因对亚溶解型C5b-9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)生成趋化因子CCL5的作用机制。方法构建外源性真核表达重组质粒pIRES2-HBO1,利用NeonTM电转仪将重组质粒转染至体外培养的GMCs中,免疫印迹(WB)实验鉴定外源性过表达HBO1的结果。再进行分组实验(MEM组、pIRES2组、亚溶解型C5b-9组,以及pIRES2-HBO1+亚溶解型C5b-9组)。分别用实时PCR和ELISA法检查不同分组处理后CCL5的mRNA和蛋白水平,并用荧光素酶报告实验检测CCL5的启动子活性情况。结果WB实验表明,真核表达重组质粒pIRES2-HBO1构建成功。用pIRES2-HBO1转染GMCs后,GMCs在亚溶解型C5b-9复合物的刺激下生成CCL5基因的水平及其启动子活性均显著升高。结论成功构建了pIRES2-HBO1真核表达重组质粒,并初步证实HBO1基因表达能够正向调控亚溶解型C5b-9诱导大鼠GMCs生成趋化因子CCL5。 展开更多
关键词 HBO1基因 亚溶解型C5b-9 肾小球系膜细胞 C-C基序趋化因子5
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多球壳菌素诱导系膜细胞凋亡及对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响 被引量:7
4
作者 陈美 江警予 +1 位作者 郝燕 周建华 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1208-1212,共5页
目的观察多球壳菌素(ISP-1)对体外培养的正常大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的促凋亡作用,研究ISP-1对细胞周期调节蛋白基因表达谱和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法体外培养大鼠GMC,加入100μmol/L ISP-1干预,分别于作用6、12、24、4... 目的观察多球壳菌素(ISP-1)对体外培养的正常大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的促凋亡作用,研究ISP-1对细胞周期调节蛋白基因表达谱和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法体外培养大鼠GMC,加入100μmol/L ISP-1干预,分别于作用6、12、24、48 h后以流式细胞术检测GMC凋亡,Hoechst33258/PI染色观察凋亡细胞形态变化,琼脂糖DNA凝胶电泳法观察凋亡细胞核小体DNA的断裂现象,并通过SuperArray Real-Time PCR细胞周期基因芯片测定ISP-1对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响,Western blotting法观察Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果ISP-1可显著诱导GMC凋亡,并呈一定的时间依赖性,作用48 h后细胞凋亡最显著,Hoechst33258/PI荧光染色法可见亮蓝色的凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡梯度的出现;PCR细胞周期基因芯片检测结果发现ISP-1可显著上调GMC Rad51、Atm、Brcal、Caspase3、cyclinA2、cyclinC、chek1、cyclinB1、cyclinB2、cyclinD2、cyclinF、Cdc25a和P27等一些与DNA损伤、凋亡和细胞周期调节蛋白相关的基因的表达;Western blotting发现ISP-1可显著上调GMC Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。结论ISP-1可时间依赖性诱导体外培养的正常大鼠GMC凋亡,其机制与影响细胞周期调节蛋白及凋亡相关基因的表达有关。 展开更多
关键词 多球壳菌素(ISP-1) 肾小球系膜细胞(gmc) 凋亡 细胞周期调节蛋白
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黄芪注射液对AGEs培养肾小球系膜细胞的影响 被引量:13
5
作者 沈健 许惠琴 +1 位作者 刘洪 韦敏 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1170-1174,共5页
目的:观察黄芪注射液对糖化终产物(AGEs)培养大鼠肾小球系膜细胞(GMC)形态学、细胞周期及氧化应激的影响。方法:用含AGEs的培养液配制黄芪注射液、氨基胍,同时设对照。GMC培养48 h后,加混合荧光染液进行染色,并立即进行荧光显微观察。... 目的:观察黄芪注射液对糖化终产物(AGEs)培养大鼠肾小球系膜细胞(GMC)形态学、细胞周期及氧化应激的影响。方法:用含AGEs的培养液配制黄芪注射液、氨基胍,同时设对照。GMC培养48 h后,加混合荧光染液进行染色,并立即进行荧光显微观察。另用流式细胞仪分析GMC的周期。试剂盒测定细胞上清液SOD、MDA和GSH-PX,流式细胞仪检测细胞内ROS含量。结果:形态学显示,正常GMC形态结构正常。而GMC在AGEs的刺激下,细胞数量明显增多,细胞结构不甚清晰,细胞S期延长,G0/G1缩短,细胞内SOD、GSH-PX下调,ROS、MDA上调。在系统中加入黄芪注射液后细胞异常增殖明显减少,细胞形态趋于正常,使S期细胞减少,SOD、GSH-PX活力提高,ROS、MDA含量降低。结论:黄芪注射液能对抗AGEs对GMC的损伤作用。其可能是通过抑制氧化应激来保护GMC免受AGEs的损害。 展开更多
关键词 黄芪注射液 肾小球系膜细胞 大鼠 形态学 细胞周期 SOD MDA GSH—PX ROS
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山茱萸环烯醚萜总苷对高糖或AGEs培养肾小球系膜细胞增殖和Na^+,K^+-ATP酶活性的影响 被引量:7
6
作者 许惠琴 刘洪 +1 位作者 沈健 李丽华 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期27-29,共3页
目的:研究山茱萸环烯醚萜总苷(ICO)对高糖或糖化终产物(AGEs)培养肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Na+,K+-ATP酶活性的影响。方法:用含AGEs或高糖的培养液配制ICO、氨基胍,同时设对照。GMC培养48h后MTT法考察GMC的增殖情况,试剂盒测试细胞悬... 目的:研究山茱萸环烯醚萜总苷(ICO)对高糖或糖化终产物(AGEs)培养肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Na+,K+-ATP酶活性的影响。方法:用含AGEs或高糖的培养液配制ICO、氨基胍,同时设对照。GMC培养48h后MTT法考察GMC的增殖情况,试剂盒测试细胞悬液中细胞蛋白含量,再进行Na+,K+-ATP酶测定。结果:于葡萄糖或AGEs中GMC的吸收度值增大,Na+,K+-ATP酶活性显著降低,而加入ICO后,则表现为对抗高糖或AGEs对GMC的增殖作用,并能提高Na+,K+-ATP酶活性。结论:ICO能抑制高糖或AGEs对GMC的过度增殖,修复高糖或AGEs致GMC的Na+,K+-ATP酶活性降低。 展开更多
关键词 肾小球系膜细胞 山茱萸环烯醚萜总苷 细胞增殖 NA^+ K^+-ATP酶
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益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖和凋亡及TGF-β_1 mRNA表达的影响 被引量:4
7
作者 吴喜利 孙万森 +3 位作者 石兴民 安鹏 乔成林 王竹 《中国中西医结合肾病杂志》 2011年第6期485-487,566,共4页
目的:观察益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达的影响。方法:以体外培养肾小球系膜细胞为研究对象,应用血清药理学方法,分别采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,M... 目的:观察益肾胶囊对大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达的影响。方法:以体外培养肾小球系膜细胞为研究对象,应用血清药理学方法,分别采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法、荧光倒置显微镜及RT-PCR技术检测系膜细胞增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达情况。结果:与正常对照组比较,其他各组MC均有不同程度的增殖、凋亡及TGF-β1 mRNA表达上调(P<0.05或P<0.01);与脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)组比较,益肾胶囊可明显抑制MC增殖及TGF-β1 mRNA表达,并诱导MC凋亡(P<0.01)。结论:益肾胶囊抑制MC增殖并诱导其凋亡可能与下调TGF-β1 mRNA表达有关。 展开更多
关键词 益肾胶囊 系膜细胞 细胞增殖 细胞凋亡 TGF-Β1 mRNA
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PI3-K/Akt shRNA真核表达质粒的构建及鉴定 被引量:1
8
作者 张艳 高玲娟 +3 位作者 邱文 任琎 赵聃 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期407-411,共5页
目的:构建针对PI3-K/Akt基因的特异性短发卡RNA(shRNA)真核表达载体。方法:用DNA重组技术将针对大鼠PI3-K/Akt基因不同位点所设计的8个shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中。在酶切分析及序列测定后,用脂质体转染至大鼠肾小球系膜... 目的:构建针对PI3-K/Akt基因的特异性短发卡RNA(shRNA)真核表达载体。方法:用DNA重组技术将针对大鼠PI3-K/Akt基因不同位点所设计的8个shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中。在酶切分析及序列测定后,用脂质体转染至大鼠肾小球系膜细胞(GMCs),Western blot检测蛋白的相对表达量来筛选最佳沉默效率的shRNA。结果:限制性酶切及核酸序列分析证明重组质粒正确。Western blot证实在重组质粒中shPik3c3-2、shAkt1-4具有最佳沉默效率。结论:成功构建了PI3-K/Akt shRNA的真核表达质粒。该实验结果为进一步研究PI3-K/Akt信号通路的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 PI3-K/AKT SHRNA 肾小球系膜细胞(gmcs)
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转化生长因子-β_1对肾小球系膜细胞TRPC6表达的影响 被引量:4
9
作者 姚兴梅 王筱霞 汪年松 《中国中西医结合肾病杂志》 2010年第3期203-205,283,共4页
Objective:To investigate the effects of TGF-β1 on the expression of TRPC6 in glomerular mesangial cells(GMC).Methods:GMC were cultured in vitro with indicated concentration of TGF-β1 10 ng/ml for 24 h.The expression... Objective:To investigate the effects of TGF-β1 on the expression of TRPC6 in glomerular mesangial cells(GMC).Methods:GMC were cultured in vitro with indicated concentration of TGF-β1 10 ng/ml for 24 h.The expression of TRPC6 protein was examined by immunofluorescent staining and Western blotting.Results:TRPC6 was expressed mainly in the membrane of GMC,also some expressed in the plasma.In the TGF-β1 group,the expression of TRPC6 significantly decreased.Conclusion:Glomerular mesangial cells express TRPC6,and TGF-β1 decreases the expression of TRPC6, which might be one of the mechanisms of TGF-β1 in DN. 展开更多
关键词 转化生长因子-Β1 肾小球系膜细胞 瞬时受体势C6 糖尿病肾病
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大鼠野生型TRAF6基因和TRAF6 shRNA表达质粒的构建及鉴定 被引量:1
10
作者 邱文 单锴 +2 位作者 庞蓉蓉 季明德 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1407-1411,1435,共6页
目的:构建大鼠野生型肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)基因及其特异性短发卡状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察其在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达和沉默TRAF6基因的情况... 目的:构建大鼠野生型肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)基因及其特异性短发卡状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察其在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达和沉默TRAF6基因的情况。方法:用DNA重组技术将针对大鼠TRAF6基因的CDS区序列(加HA标签)和针对其不同位点所设计的3种shRNA序列分别克隆到pcDNA3.1及pGenesil-1/GFP真核表达质粒中。在酶切鉴定及序列测定正确后,用NeonTM电转仪,将上述质粒分别转染入培养的大鼠GMC中,然后用Western blot检查HA-TRAF6融合蛋白的表达情况,同时筛选最有效的TRAF6shRNA。结果:限制性酶切及核酸序列分析确证,上述TRAF6基因过表达和shRNA表达质粒均构建成功。Western blot显示,构建的pcDNA3.1-HA-TRAF6质粒能在大鼠GMC中表达,且TRAF6 shRNA-1具有最佳的沉默效率。结论:本实验成功构建了大鼠野生型TRAF6真核表达质粒及其特异性的shRNA表达载体,这为今后进一步研究TRAF6基因的生物学功能提供了实验基础。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子受体相关因子6 小发夹RNA 肾小球系膜细胞
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复方血尿停经肝微粒体代谢后对肾小球系膜细胞的影响 被引量:1
11
作者 张红敏 丁樱 +1 位作者 陈世伟 王丽英 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期233-236,共4页
目的探讨复方血尿停治疗以系膜增生为主要病理改变的肾小球疾病的作用机制。方法将复方血尿停与大鼠肝微粒体共同孵育后加入到肾小球系膜细胞(GMC)体外培养体系中,MTT法观察细胞增殖情况,放射免疫法测定白细胞介素-6(IL-6)、内皮素-1(ET... 目的探讨复方血尿停治疗以系膜增生为主要病理改变的肾小球疾病的作用机制。方法将复方血尿停与大鼠肝微粒体共同孵育后加入到肾小球系膜细胞(GMC)体外培养体系中,MTT法观察细胞增殖情况,放射免疫法测定白细胞介素-6(IL-6)、内皮素-1(ET-1)水平,速率法检测乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果经肝微粒体代谢后,复方血尿停2、4、8mg/mL均抑制GMC的增殖及IL-6、ET-1的产生,且呈剂量依赖方式。结论复方血尿停能抑制IL-6、ET-1的分泌和GMC的增殖,此作用可能是其治疗系膜增生性肾小球疾病的作用机制之一。 展开更多
关键词 复方血尿停 肾小球系膜细胞 增殖 白细胞介素-6(IL-6) 内皮素-1(ET-1)
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黄芩苷下调NF-κB表达抑制高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的作用 被引量:4
12
作者 赵平 林锐珊 +1 位作者 佘燕玲 苏宁 《世界中西医结合杂志》 2013年第1期33-35,49,共4页
目的研究黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞(GMC)增殖的抑制作用及对NF-κB表达的影响。方法将体外培养的大鼠GMC分为六组:低糖组,高糖组,黄芩苷低、中、高剂量组、氯沙坦组,培养24、48、72 h。实验结束后根据MTT法检测结果,收集细胞并... 目的研究黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞(GMC)增殖的抑制作用及对NF-κB表达的影响。方法将体外培养的大鼠GMC分为六组:低糖组,高糖组,黄芩苷低、中、高剂量组、氯沙坦组,培养24、48、72 h。实验结束后根据MTT法检测结果,收集细胞并提取核蛋白,用Western blot方法检测各组NF-κB表达情况。结果高糖组在24、48、72 h时间段的吸光值均较低糖组增高,且随培养时间延长而增高明显(P<0.05);黄芩苷低、中、高剂量组,氯沙坦组在24 h时间段吸光值均较高糖组高,48、72 h时间段较高糖组低(P<0.05)。Western blot结果显示,高糖组NF-κB表达量较低糖组增加。而用黄芩苷干预后,GMC中NF-κB表达量较高糖组减少,且随着浓度增加,表达量逐渐减少。结论高糖环境下体外培养的GMC存在异常增殖现象,黄芩苷能抑制高糖诱导的GMC异常增殖,且呈时间、剂量依赖关系,其机制可能与黄芩苷下调NF-κB表达有关。 展开更多
关键词 肾小球系膜细胞 黄芩苷 NF-ΚB
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滋肾解毒中药对Ⅳ型狼疮肾炎血清诱导肾小球系膜细胞增殖 凋亡及纤维连接蛋白核酸表达的影响 被引量:4
13
作者 刘学耀 李燕 +2 位作者 刘亚敏 张秋林 史成军 《中华中医药学刊》 CAS 2008年第7期1397-1400,共4页
目的:观察滋肾解毒中药对Ⅳ型狼疮性肾炎(LN)血清干预下肾小球系膜细胞(GMC)增殖、细胞凋亡及GMC中纤维连接蛋白(FN)mRNA表达的影响,从细胞分子生物学水平探讨滋肾解毒中药治疗LN的机制。方法:①结合血清药理学方法,分空白对照组、对照... 目的:观察滋肾解毒中药对Ⅳ型狼疮性肾炎(LN)血清干预下肾小球系膜细胞(GMC)增殖、细胞凋亡及GMC中纤维连接蛋白(FN)mRNA表达的影响,从细胞分子生物学水平探讨滋肾解毒中药治疗LN的机制。方法:①结合血清药理学方法,分空白对照组、对照组血清+15%LN血清组、低、中、高浓度含药血清+15%LN血清组5组观察,MTT法检测GMC的增殖及抑制率,荧光法和流式细胞仪技术检测GMC细胞凋亡。②RT-PCR检测GMC中纤维连接蛋白(FN)mRNA的表达。结果:①含药血清均可明显抑制GMC增殖、诱导GMC细胞凋亡,与对照组血清相比差异有非常显著性意义(P<0·01),以高浓度组最显著。②含药血清可明显抑制GMC中FNmRNA的表达,以高浓度组最显著。结论:滋肾解毒中药的含药血清可明显抑制15%Ⅳ型LN患者血清干预下的GMC增殖、诱导细胞凋亡、抑制FNmRNA的表达,这可能是滋肾解毒中药治疗LN的分子机理。 展开更多
关键词 滋养肾阴法 清热解毒法 狼疮性肾炎 肾小球系膜细胞 细胞凋亡
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滋肾解毒中药对Ⅳ型狼疮肾炎血清诱导肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原核酸表达的影响 被引量:4
14
作者 刘学耀 李燕 +2 位作者 刘亚敏 张秋林 史成军 《中华中医药学刊》 CAS 2008年第5期922-924,共3页
目的:观察滋肾解毒中药对Ⅳ型狼疮性肾炎(LN)血清干预下肾小球系膜细胞(GMC)中Ⅳ型胶原(ColⅣ)mRNA表达的影响,从细胞分子生物学水平探讨滋肾解毒中药治疗LN的机制。方法:结合血清药理学方法,分空白对照组、对照组血清+15%LN血清组、低... 目的:观察滋肾解毒中药对Ⅳ型狼疮性肾炎(LN)血清干预下肾小球系膜细胞(GMC)中Ⅳ型胶原(ColⅣ)mRNA表达的影响,从细胞分子生物学水平探讨滋肾解毒中药治疗LN的机制。方法:结合血清药理学方法,分空白对照组、对照组血清+15%LN血清组、低、中、高浓度含药血清+15%LN血清组5组观察,RT-PCR检测GMC中ColⅣ mRNA的表达。结果:含药血清可明显抑制GMC中ColⅣ mRNA的表达,以高浓度组最显著。结论:滋肾解毒中药的含药血清在15%Ⅳ型LN患者血清诱导下可明显抑制ColⅣ mRNA的表达,从而抑制GMC增殖和细胞外基质积聚,这可能是滋肾解毒中药治疗LN的分子机理。 展开更多
关键词 滋养肾阴法 清热解毒法 狼疮性肾炎 肾小球系膜细胞 Ⅳ型胶原
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大鼠野生型Gadd45γ基因和Gadd45γshRNA真核表达质粒的构建及鉴定 被引量:1
15
作者 车楠 邱文 +2 位作者 夏梅 赵聃 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期594-599,共6页
目的:构建大鼠野生型Gadd45γ基因和其特异性短发卡状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察其在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达及沉默Gadd45γ基因的情况。方法:用DNA重组技术将针对大鼠Gadd45γ基因的cds区序列或针对其不同位点所设... 目的:构建大鼠野生型Gadd45γ基因和其特异性短发卡状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察其在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达及沉默Gadd45γ基因的情况。方法:用DNA重组技术将针对大鼠Gadd45γ基因的cds区序列或针对其不同位点所设计的4对shRNA序列分别克隆到真核表达质粒pcDNA3.1/HA或pGCsi.U6.neo.GFP中。在酶切分析及序列测定正确后,用GenEscortTMⅢ转染试剂将上述两种质粒分别转染至大鼠GMCs中,用免疫细胞化学和Western blot检测HA-Gadd45γ融合蛋白的表达及筛选最佳沉默效率的shRNA。结果:限制性酶切及核酸序列分析证明两种重组质粒均构建正确。免疫细胞化学和Western blot分析表明构建的pcDNA3.1/Gadd45γ质粒在大鼠GMCs中能够表达;Gadd45γshRNA-3具有最佳沉默效率。结论:成功构建了大鼠野生型Gadd45γ基因和其特异性的shRNA真核表达质粒,该实验结果为进一步研究Gadd45γ基因的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 Gadd45γ SHRNA 肾小球系膜细胞
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大鼠野生型Egr-1基因及Egr-1 shRNA真核表达质粒的构建及鉴定 被引量:2
16
作者 刘炘 刘丽莎 +2 位作者 邱文 夏梅 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期607-611,共5页
目的:构建大鼠野生型早期生长应答基因-1(early growth responsegene-1,Egr-1)及其特异性短发夹状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察Egr-1在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达及沉默Egr-1基因的情况。方法:用DNA重组技术将针对大鼠Eg... 目的:构建大鼠野生型早期生长应答基因-1(early growth responsegene-1,Egr-1)及其特异性短发夹状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察Egr-1在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达及沉默Egr-1基因的情况。方法:用DNA重组技术将针对大鼠Egr-1基因的CDS区序列和针对其不同位点所设计的3对shRNA序列分别克隆到真核表达质粒pcDNA3.1-myc-his-A和pGCsi.U6.neo.GFP中。经酶切分析及序列测定正确后,用GenEscortTMⅢ转染试剂将上述两种质粒分别转染至大鼠GMC中,随后进行Western blot检测Egr-1蛋白的表达及筛选最佳沉默效率的shRNA。结果:限制性内切酶酶切及核酸序列分析证明,两种重组质粒均构建正确。Westernblot分析表明,构建的pcDNA3.1/Egr-1质粒在大鼠GMC中能够表达;Egr-1shRNA-2具有最佳沉默效率。结论:成功构建了大鼠野生型Egr-1基因和其特异性的shRNA真核表达质粒,为进一步研究Egr-1基因的生物学功能提供了必要的实验工具。 展开更多
关键词 早期生长应答基因-1 短发夹式小干涉RNA 肾小球系膜细胞
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大鼠糖皮质激素受体基因腺病毒载体的构建及在肾系膜细胞中的表达 被引量:1
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作者 朱璇 邢昌赢 +1 位作者 朱含章 濮雪华 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期257-259,F0003,共4页
目的利用AdEasy系统构建大鼠糖皮质激素受体(GR)基因重组腺病毒载体,转染大鼠肾小球系膜细胞(GMC),并通过Western Blot法检测GR蛋白的表达。方法将质粒pcDNA1 Neo-Rat GR扩增、凝胶回收获得的Rat GR cDNA双酶切片段,插入腺病毒穿梭载体... 目的利用AdEasy系统构建大鼠糖皮质激素受体(GR)基因重组腺病毒载体,转染大鼠肾小球系膜细胞(GMC),并通过Western Blot法检测GR蛋白的表达。方法将质粒pcDNA1 Neo-Rat GR扩增、凝胶回收获得的Rat GR cDNA双酶切片段,插入腺病毒穿梭载体质粒pShuttle-CMV的巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建重组穿梭载体pShuttle-CMV-Rat GR,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内经同源重组得到腺病毒重组质粒pAd-Rat GR,经人胚肾293A细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad-Rat GR;用包装后的病毒上清转染大鼠GMC,提取细胞中总蛋白,通过Western Blot方法检测GR蛋白的表达。结果连接、重组后通过酶切和测序法筛选出pAd-Rat GR重组质粒,经人胚肾293细胞包装,48h后观察到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)明显表达,氯化铯梯度离心纯化最终获得1×109PFU/ml滴度的重组病毒;用该滴度的Ad-Rat GR,转染大鼠GMC 48h后提取细胞总蛋白,Western Blot检测GR蛋白有明显表达。结论构建的大鼠GR基因腺病毒载体能够在大鼠GMC中表达GR蛋白,并有上调作用。 展开更多
关键词 糖皮质激素受体 腺病毒载体 肾小球系膜细胞 转染
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核转录因子-κB与系膜增生性肾炎的关系及中药调控机制探讨 被引量:2
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作者 高亮 任现志 《吉林中医药》 2015年第1期60-63,共4页
目的归纳总结核转录因子-κB与系膜增生性肾炎的关系及中药调控机制。方法通过查阅近10年的相关文献,探究核转录因子-κB与系膜增生性肾炎的关系及中药调控机制。结果核转录因子-κB是一种介导细胞内信号转导的核转录因子,与肾小球系膜... 目的归纳总结核转录因子-κB与系膜增生性肾炎的关系及中药调控机制。方法通过查阅近10年的相关文献,探究核转录因子-κB与系膜增生性肾炎的关系及中药调控机制。结果核转录因子-κB是一种介导细胞内信号转导的核转录因子,与肾小球系膜细胞的增生密切相关。中药可调控系膜增生性肾病中NF-κB/Ik B的表达,延缓肾脏的损伤。结论核转录因子-κB通过上调细胞因子和炎症介质的表达诱发炎性反应、促进成纤维细胞增生,中药可减轻系膜区的炎症反应,从而抑制系膜细胞的增生,这类中药多具有清热、益气、化瘀的功效。 展开更多
关键词 肾小球肾炎 系膜细胞增生 NF-κB IKB
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Role of activating transcription factor 3 (ATF3) in sublytic C5b-9-induced glomerular mesangial cell apoptosis 被引量:7
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作者 Xiaoming Jiang Jing Zhang Mei Xia Wen Qiu Hui Wang Dan Zhao Yingwei Wang 《Cellular & Molecular Immunology》 SCIE CAS CSCD 2010年第2期143-151,共9页
Sublytic complement C5b-9 complexes can cause cell apoptosis, but the mechanism of glomerular mesangial cell (GMC) apoptosis mediated by these complexes has not been well defined. The activating transcription factor... Sublytic complement C5b-9 complexes can cause cell apoptosis, but the mechanism of glomerular mesangial cell (GMC) apoptosis mediated by these complexes has not been well defined. The activating transcription factor 3 (ATF3) gene is an immediate early gene for the cell to cope with a variety of stress signals and can promote apoptosis of some cells. In this study, ATF3 expression and cell apoptosis in GMCs induced by sublytic C5b-9 were measured, and then the effects of ATF3 gene over-expression or knockdown on GMC apoptosis induced by sublytic C5b-9 were examined at a fixed time. The results showed that both ATF3 expression and GMC apoptosis were markedly increased and ATF3 over-expression obviously increased sublytic C5b-9-induced GMC apoptosis, whereas ATF3 gene silencing had a significant opposite effect. Collectively, these findings indicate that upregulation of ATF3 gene expression is involved in regulating GMC apoptosis induced by sublytic C5b-9 complexes. 展开更多
关键词 sublytic C5b-9 APOPTOSIS glomerular mesangial cell (gmc activating transcription factor 3 (ATF3)
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用sublytic C5b-9刺激上调的KLF5对大鼠肾小球系膜细胞合成IL-36α的影响 被引量:4
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作者 罗灿 王文博 +7 位作者 吴志皎 刘龙飞 谢梦晓 邱文 张婧 赵聃 季明德 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期367-373,共7页
目的:探讨转录因子Krüppel样因子5(Krüppel-like factor,KLF5)调控sublytic C5b-9刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)合成促炎因子白细胞介素(interleukin,IL)-36α的作用。方法:首先,培养大鼠GMC,体外用... 目的:探讨转录因子Krüppel样因子5(Krüppel-like factor,KLF5)调控sublytic C5b-9刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)合成促炎因子白细胞介素(interleukin,IL)-36α的作用。方法:首先,培养大鼠GMC,体外用sublytic C5b-9刺激GMC后,不同时间点行反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检查KLF5、IL-36αmRNA和蛋白水平的变化。接着,构建KLF5的过表达(pIRES2-KLF5)及发夹状小干扰RNA(shKLF5)质粒。将pIRES2-KLF5转染GMC或在shKLF5转染GMC后再用sublytic C5b-9刺激,行RT-PCR和Western blot检查过表达或沉默KLF5基因后对GMC合成IL-36α的影响。同时用荧光素酶报告实验检查过表达或沉默KLF5基因对IL-36α启动子活性的影响。结果:用sublytic C5b-9刺激GMC,能显著上调KLF5和IL-36α的mRNA和蛋白表达,且KLF5的表达时相早于IL-36α。过表达KLF5能上调IL-36α的生成,而沉默KLF5基因后再行sublytic C5b-9刺激,由GMC产生的IL-36α则显著下降。sublytic C5b-9刺激GMC或过表达KLF5基因均可提高IL-36α启动子的活性,而沉默KLF5基因则能明显减低sublytic C5b-9上调IL-36α启动子的活性。结论:KLF5的表达对sublytic C5b-9诱导GMC合成IL-36α有促进作用。 展开更多
关键词 sublytic C5B-9 肾小球系膜细胞(gmc) krüppel样因子5(KLF5) 白细胞介素-36α(IL-36α)
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