gltC基因缺失对单增李斯特菌10403S抗酸应激能力的影响

【目的】构建单增李斯特菌gltC基因缺失株,并阐明gltC基因对单增李斯特菌抗酸应激能力的影响。【方法】通过对单增李斯特菌参考菌株10403S进行添加或不添加外源性谷氨酸在致死性酸性条件的抗酸应激试验,测定谷氨酸对菌株抗酸应激存活能力的影响;利用同源重组方法构建单增李斯特菌gltC基因缺失株;通过生长曲线测定gltC基因缺失对菌株生长能力的影响;通过酸应激存活试验测定gltC基因缺失对单增李斯特菌酸应激能力的影响;通过Western blotting测定gltC基因缺失对GadD2蛋白表达水平的影响;通过构建携带gltBD启动子区域gfp报告质粒,测定在酸性和中性条件下gltC基因缺失对gltBD启动子区域转录水平的影响。【结果】酸应激结果显示,添加外源谷氨酸可极显著提高菌株10403S在pH 2.5酸性条件下的存活能力(P<0.01)。PCR结果显示,缺失株10403SΔgltC构建成功。生长曲线结果显示,gltC基因缺失不影响单增李斯特菌的生长能力。酸应激结果显示,在pH 2.5致死性酸性环境下缺失株10403SΔgltC生长能力弱于亲本株10403S(P<0.01)。Western blotting结果显示,gltC基因缺失不影响GadD2蛋白表达水平(P>0.05)。PCR结果显示,携带gltBD启动子区域的gfp报告质粒构建成功。GFP荧光分析结果显示,gltC基因缺失后在酸性和中性条件下均会极显著降低gltBD启动子区域转录水平(P<0.01)。【结论】gltC基因缺失不影响单增李斯特菌正常生长,缺失株10403SΔgltC表现出抗酸应激能力下降,且会降低gltBD启动子区域转录水平,但不影响GadD2蛋白表达水平。