GLS1通过激活Nrf2/HO-1轴抑制过氧化氢诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬与凋亡

目的探究GLS1对过氧化氢诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬与凋亡的影响及机制。方法ARPE-19细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+Vector组、H_(2)O_(2)+GLS1组,对照组细胞不做任何处理,H_(2)O_(2)组细胞用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导48h,H_(2)O_(2)+Vector组和H_(2)O_(2)+GLS1组细胞转染Vector和GLS1质粒后用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导48 h,比色法测定各组细胞SOD、GSH和MDA浓度,透射电镜观察各组细胞自噬小体,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞Nrf2、HO-1、LC3-Ⅱ、p62的表达。结果与对照组比较,H_(2)O_(2)组ARPE-19细胞SOD、GSH表达显著下降,MDA显著增加,自噬小体数目显著增加,细胞凋亡显著增加,LC3-Ⅱ表达显著上调,P62、抗核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶1(heme Oxygenase-1,HO-1)表达显著下调。与H_(2)O_(2)+Vector组比较,H_(2)O_(2)+GLS1组细胞SOD、GSH表达显著增加,MDA显著降低,自噬小体数目显著减少,细胞凋亡显著减少,LC3-Ⅱ表达显著下调,P62、Nrf2、HO-1表达显著上调。结论GLS1可抑制H_(2)O_(2)诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬与凋亡,其机制为激活Nrf2/HO-1信号通路。

GLS1基因调节胃癌细胞迁移、侵袭和EMT的研究

目的研究谷氨酰胺酶1(glutaminase1,GLS1)对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法体外培养人胃黏膜上皮细胞GES1和胃癌细胞N87、MKN28、BGC826和BGC803。设计合成靶向GLS1的siRNA片段(si-GLS1-1#和si-GLS1-2#),分别转染N87和BGC823细胞,以无意义siRNA为对照(si-con)。采用qRT-PCR检测细胞中GLS1 mRNA表达,CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞中GLS1蛋白和上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达。异种移植瘤实验评估干扰GLS1对胃癌细胞体内生长的影响。结果胃癌细胞中GLS1 mRNA和蛋白均呈高表达(P<0.05)。与si-con组比较,si-GLS1-1#和si-GLS1-2#组细胞中GLS1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05)。细胞功能实验结果显示,与si-con组比较,si-GLS1-1#和si-GLS1-2#组细胞的增殖活力、克隆形成能力及迁移、侵袭能力均被抑制(P<0.05),而细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05)。异种移植瘤实验结果显示,与si-con组比较,si-GLS1-1#和si-GLS1-2#组移植瘤体积和重量均明显减小(P<0.05),移植瘤中N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论干扰GLS1能够抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力及EMT,促进细胞凋亡,抑制胃癌细胞的体内生长。

GLS1基因在乳腺癌中的表达及在新辅助化疗中的意义

目的 探讨GLS1基因在乳腺癌中的表达及在新辅助化疗中的意义。方法 收集134例乳腺癌患者为研究对象,入组患者经过穿刺活检确诊乳腺癌后,按照随机对照原则平均分成两组,每组67例。观察组在乳腺癌改良根治术前使用多西他赛＋表柔比星＋环磷酰胺（TEC）方案,进行3~4周期的化疗后再进行择期手术。对照组在改良根治术前不进行TEC化疗,直接手术摘除病变乳腺。术后两组患者采用免疫组化法,对病变组织中GLS1蛋白免疫组化染色。结果 GLS1基因在134例患者正常组织和乳腺癌组织中表达,但在乳癌组织中表达明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;术前采用新辅助化疗后,癌组织中GLS1基因表达水平明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。患者生存率与GLS1表达水平有关（P〈0.05）,表达水平越高生存率越低。结论GLS1基因在乳腺癌患者癌组织中高表达。在乳腺癌改良根治术前,使用辅助化疗可明显降低GLS1的表达水平;患者癌组织中GLS1基因表达水平与生存预后相关,GLS1基因在乳腺癌靶向治疗以及靶向治疗药物开发中可作为特异性的药物靶点之一。

水稻光叶性状基因gl1的精细定位与候选基因分析

光叶水稻是一类在叶片和谷粒等表面都光滑无毛的水稻,是美国南部和非洲一些国家的主栽品种。已有研究表明水稻的光叶性状受一对位于第5染色体上的隐性基因gl1控制。本试验旨在对gl1进行精细定位,分析候选基因,为最终克隆gl1基因、研究毛状体形态建成的调控奠定基础。首先根据与gl1连锁的RFLP标记在第5染色体上的大致位置,有选择地用第5染色体上的部分微卫星(SSR)标记研究热带光叶粳稻(AP9)与毛叶籼稻(浙恢7954)的杂交分离群体中与光叶性状的共分离,获得了与gl1连锁的SSR标记RM17990。在此基础上,采用与RM17990相邻的更多SSR标记以及插入/缺失(InDel)标记将gl1定位在RM17759～RM17831之间(物理区间为538kb～1.649Mb)。为进一步缩小范围,发展了毛细管电泳方法和能够识别单碱基多态性(SNP)的四引物扩增受阻突变体系-PCR(Tetra-primer amplification refractory mutation system PCR,ASPCR)标记,将gl1的区间缩至770.5～977.1kb之间。结合其他实验室有关gl1定位的最新结果,本研究将gl1定位在971～977.1kb之间,并对其中的全部4个注释基因进行测序分析,发现只有LOC_Os05g02750的5’端非翻译区在光叶水稻和毛叶水稻之间存在一个碱基差异,该差异可能是造成光叶突变的原因。

海1无腺体性状遗传基因Gl_2^e与Gl_1间的互作

海岛棉无腺体突变品系海１除含有和Ｇｌ_３基因外，还含有一有腺体基因Ｇｌ_１，基因对Ｇｌ_１、也有上位性作用。海１的基因型可表示为Ｇｌ_１Ｇｌ_１Ｇｌ_３Ｇｌ_３。

青少年特发性脊柱侧凸疾病候选基因SH3GL1外显子序列比对分析

目的通过对候选基因SH3GL1的核酸序列进行比对分析,确定其是否为青少年特发性脊柱侧凸(AIS)的致病基因。方法采取以家系为基础的"病例同胞对"研究方案,提取基因组DNA,根据候选基因SH3GL1核酸序列,以10个外显子为重点设计引物对,进行PCR扩增、克隆和测序,用GeneTool软件对外显子测序结果进行序列比对分析,判断是否存在碱基变异,并进行蛋白质结构预测分析。结果候选基因SH3GL1中的10个外显子成功地在AIS"同胞对"基因组DNA中得到扩增和克隆,且序列测定均取得阳性结果。通过比对分析,在SH3GL1的10个外显子中共发现12处碱基变异,分别位于第2(3处)、4、5(4处)、6、8和10(2处,非编码区)六个外显子上。其中先证者mRNA第515位碱基如果为T,则形成终止密码子,导致蛋白阅读框发生改变,蛋白质序列预测分析显示编码截短蛋白,从而影响蛋白质的一级结构。结论SH3GL1是AIS的致病基因之一。

沉默GLUT-1表达对食管鳞癌细胞株TE-13增殖和迁移的影响

目的研究沉默葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter protein-1,GLUT-1)的表达对食管鳞癌TE-13细胞增殖、周期及迁移的影响及可能的作用机制。方法采用慢病毒感染的方法将特异性针对GLUT-1基因的GLUT-1-sh RNA转入TE-13细胞,建立稳定干扰GLUT-1表达的TE-13细胞株,分成GLUT-1-sh RNA组和阴性对照组进行对比研究。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测GLUT-1-sh RNA对TE-13细胞GLUT-1 m RNA及其蛋白表达的影响。CCK-8法、FCM法和Transwell小室迁移实验分别检测沉默GLUT-1表达后对TE-13细胞增殖、细胞周期和迁移的影响;同时采用蛋白质印迹法检测细胞迁移以及乏氧相关蛋白的表达情况。结果采用慢病毒将GLUT-1-sh RNA转入TE-13细胞后,可明显下调GLUT-1蛋白(t=6.713,P<0.01)和m RNA的表达水平(t=4.181,P<0.05)。与阴性对照组相比,GLUT-1干扰后细胞的增殖至72 h(t=3.097,P<0.05)和96 h(t=3.497,P<0.05)明显被抑制,同时细胞的迁移能力可见下降,但是细胞周期至24 h未见影响;基质金属蛋白酶的MMP-9(t=6.895,P<0.01)和缺氧诱导因子HIF-1α(t=13.74,P<0.001)的表达明显下调,但是MMP-2的表达没有变化(t=2.582,P>0.05)。结论沉默GLUT-1的表达可抑制食管磷癌细胞株TE-13细胞的增殖和迁移,并明显下调细胞内MMP-9和HIF-1α蛋白的表达,为寻找靶向治疗食管癌新靶点提供了初步的实验基础。

内皮抑素对人脑胶质瘤GL15细胞株β-catenin和Cyclin D1表达的影响

目的探讨内皮抑素对人脑胶质肉瘤细胞株GL15中β-catenin和Cyclin D1表达的影响。方法通过质粒转染的方法向GL15细胞中转染pcDNA3.1ES质粒,通过SABC免疫组织化学方法检测转染组与非转染组细胞中β-catenin和Cyclin D1表达。结果空白对照组细胞爬片中β-catenin和CyclinD1的平均光密度值分别为(0.3758±0.0371)和(0.4092±0.0417),而内皮抑素质粒转染组细胞爬片中β-catenin和CyclinD1的平均光密度值分别为(0.2462±0.0275)和(0.2046±0.0357);空白对照组中β-catenin和Cyclin D1的平均光密度值均高于内皮抑素转染组,统计学分析表明在不同组别之间,β-catenin的平均光密度值有显著性差异,其中Cy-clin D1的平均光密度值有极显著性差异。结论内皮抑素在GL15细胞株中可以抑制β-catenin蛋白的过度表达和异位表达,并通过直接和间接的途径,抑制Cyclin D1蛋白的过度表达,从而发挥抑制肿瘤发展的作用。

SH3GL1在紫杉醇耐药乳腺癌中的表达及临床意义

膜结合蛋白SH3GL1参与调控某些肿瘤细胞生物学行为,而其对紫杉醇耐药乳腺癌细胞的恶性生物学行为影响尚未见报道.为阐明SH3GL1对紫杉醇耐药敏感性的影响以及潜在的分子机制,本研究首先采用免疫组化法证实SH3GL1在紫杉醇耐药乳腺癌组织高表达(P<0.001).Western印迹法证实,SH3GL1在紫杉醇耐药细胞株MCF-7/PTX高表达(P<0.01);随后,采用MTT分别检测(0,50,100 nmol/L)紫杉醇处理后MCF-7细胞株增殖情况,同时Western印迹法检测SH3GL1表达,发现100 nmol/L紫杉醇能够抑制MCF-7细胞增殖(P<0.05);同时抑制SH3GL1表达(P<0.01);敲减SH3GL1表达后,紫杉醇耐药细胞株MCF-7/PTX和MCF-7增殖速率降低(P<0.05),耐药基因MDR1表达降低(P<0.05),p-AKT和p-gp水平下降(P<0.05).上述结果表明,降低SH3GL1表达可以减弱紫杉醇耐药性,增加乳腺癌对紫杉醇的敏感性,这为临床上紫杉醇耐药乳腺癌患者的治疗提供了新的靶点.

瑞格列奈联合替莫唑胺同步放疗对GL261胶质瘤的治疗作用研究

目的评价瑞格列奈联合替莫唑胺同步放疗的抗胶质瘤作用及其机制研究。方法建立小鼠GL261-luc+脑胶质瘤模型,将C57BL/6小鼠随机分为对照组、瑞格列奈组、替莫唑胺同步放疗组、瑞格列奈联合替莫唑胺同步放疗组,分别给予相应处理。观察各组小鼠的生存时间,小动物活体光学成像系统监测肿瘤生长情况,Western blotting检测给药后小鼠脑部肿瘤组织的PD-L1水平,免疫组化法检测肿瘤组织中CD3^+和CD8^+T细胞的分布情况。结果瑞格列奈联合替莫唑胺同步放疗组小鼠的生存时间较替莫唑胺同步放疗组显著延长(P<0.05),长期存活率达28.6%;瑞格列奈联合替莫唑胺同步放疗组小鼠肿瘤组织中PD-L1的表达较替莫唑胺同步放疗组显著下调(P=0.0177),且肿瘤组织中CD3^+和CD8^+T细胞的浸润显著增加(P<0.0001)。结论瑞格列奈联合替莫唑胺同步放疗可能通过调控肿瘤组织的淋巴细胞浸润,改善胶质瘤荷瘤小鼠的生存。

水稻OsGL1-2基因反义表达载体的构建

应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增水稻Os GL1-2基因反义片段及基因自身的启动子,并分别克隆到p UC19克隆载体上,得到含有Os GL1-2启动子+Os GL1-2反义片段的中间载体。对重组子进行PCR检测和酶切分析并测序,结果表明,长度分别为417和2 199bp。将Os GL1-2启动子+Os GL1-2反义片段克隆到植物表达载体p Cambia1380多克隆位点,构建了该基因的植物反义表达载体p Cam GL1-2。

gl(2|1)超代数的齐次微分实现和玻色-费米实现(英文)

研究了 gl( 2 | 1 )超代数在齐次多项式空间上的单参数齐次微分实现及其相应的玻色 -费米实现 .该参数与关联电子 Hubbard模型的 Hubbard作用参数

SH3GL1与p-ERK在原发性肝癌中的表达与其对索拉非尼治疗效果的影响

目的研究SH3GL1和p-ERK在原发性肝癌组织中的表达以及二者对服用索拉非尼患者预后的影响。方法收集我院自2008年1月至2016年12月期间因原发性肝癌进行手术治疗,并且术后坚持口服索拉非尼的患者组织标本共73例,免疫组化分析患者组织中SH3GL1和p-ERK的表达情况,统计所有患者性别、年龄、术前HBs Ag表达情况、术前AFP值、术前肝功能分级、体力状况评分、肿瘤分化程度、是否有脉管侵犯、是否有肝外转移病灶、肿瘤数量、肿瘤分期在内的多项临床指标,分析SH3GL1和p-ERK在HCC中的表达情况与这些指标的联系及其对患者预后的影响。结果 SH3GL1和p-ERK在原发性肝癌患者组织中阳性表达率高,并且二者的表达水平呈正相关关系(P<0.001);SH3GL1的高表达与肿瘤有肝外转移、肿瘤多发和肿瘤分期相关,p-ERK的高表达则与患者肿瘤分期相关;影响肝癌术后服用索拉非尼患者总生存期的危险因素包括年龄低于50岁、SH3GL1高表达,p-ERK高表达、有肝外转移灶、肿瘤多发,其中SH3GL1高表达、有肝外转移和肿瘤多发为影响总预后的独立危险因素。结论 SH3GL1和p-ERK在原发性肝癌中的表达对于肝癌多项临床指标相关,并且二者的高表达是影响服用索拉非尼患者总生存期的危险因素。

AAPBA@KCC-1的合成及其对血清中唾液酸和神经节苷脂的分析应用

将3-丙烯酰胺基苯硼酸(AAPBA)修饰在介孔二氧化硅KCC-1的表面,合成AAPBA@KCC-1材料,并通过扫描电子显微镜、透射电子显微镜、N_2吸附解吸附测试和X射线光电子能谱对其进行表征;将AAPBA@KCC-1材料作为分散固相萃取(dSPE)的吸附剂,对血清样品中的唾液酸和神经节苷脂(GLS)进行提取和富集;采用傅里叶变换离子回旋共振质谱法和超高效液相色谱-离子淌度-四极杆飞行时间质谱法分别对AAPBA@KCC-1材料吸附得到的唾液酸和神经节苷脂进行分析。结果表明,AAPBA@KCC-1材料能够有效吸附唾液酸和神经节苷脂,简化了样品前处理的操作,可以进一步应用于生物样品中唾液酸和神经节苷脂的研究。

水稻粒长新基因GL12-1定位与利用分析

水稻的粒长是水稻粒型构成的因素之一,直接影响水稻的单产,而粒长又是稻米品质的重要指标之一。该研究利用选育含有稻瘟病抗性基因Pigm-1的长粒恢复系R20-4为研究材料,通过图位克隆的方法,对粒长基因进行鉴定,并对该长粒性状在育种中的应用进行了分析。结果显示:(1)该长粒为显性基因控制的性状。(2)将粒长基因GL12-1初步定位在水稻第12染色体上Indel-12-3和Indel-12-7之间,物理距离约4.5 Mb。(3)通过进一步开发标记,最终将该粒长基因GL12-1定位在标记Indel-10和Indel-16之间,物理距离约900 kb。(4)长粒恢复系R20-4与‘庆源A’、‘定源A’和‘启源A’测交组合的粒长均表现R20-4表型,而与‘靓香A’测交组合的粒长比R20-4更长。研究表明,粒长基因GL12-1为显性基因控制的性状,可能为一个新的粒长控制基因,该研究为后期GL12-1基因的克隆、功能研究以及粒型分子育种奠定了基础。

拟南芥GLABROUS1两个新等位突变体的筛选和鉴定

植物细胞命运决定机制的解析一直以来都是植物发育生物学研究的核心。模式植物拟南芥的表皮毛形成过程是研究植物细胞命运决定的优良模式系统。为了筛选和鉴定控制拟南芥表皮毛形成的新因子,我们进行了大规模的正向遗传筛选,获得了两株莲座叶表皮毛不能形成或数量显著减少的突变体f08-01和vat002-07。通过对突变基因的克隆和遗传互补实验,确定这两株突变体是GLABROUS1(GL1)的新等位突变体。GL1是调控植物表皮毛发生的关键遗传因子,其表达模式在表皮毛形成过程中受到严格调控,但是具体的机制还不清楚。通过遗传互补实验,证实GL1的3'非编码区在表皮毛形成过程中至关重要,并且3'非编码区的序列影响GL1 mRNA的稳定性和转录激活。

嗜热脂肪土芽孢杆菌GL-1 Hsp33基因的克隆及结构分析

以嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)GL-1为研究对象,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得该菌株的热休克蛋白33(Hsp 33)基因,通过ExPASy、SOPMA、Pymol等在线软件对其进行生物信息学分析。同时,考察热胁迫处理对嗜热脂肪土芽孢杆菌GL-1生长的影响,并利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)研究菌株在热胁迫中Hsp33基因的表达情况。结果表明,通过PCR扩增得到碱基长度为876 bp的Hsp33基因,该基因与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)1vzy的Hsp33基因序列相似性达到99%,其表达的蛋白质结构与Bacillus subtilis 1vzy的Hsp33蛋白具有相似的核心结构域,二者除C-末端稍有不同外,具有相同的β-折叠和α-螺旋,无卷曲螺旋。热胁迫对嗜热脂肪土芽孢杆菌GL-1生长具有影响,当菌株受到热胁迫时,Hsp33基因表达量增加,说明在受到热胁迫时,Hsp33蛋白作出了应激反应。

谷氨酰胺酶1在结肠癌中的表达及其对细胞代谢重编程的影响

目的:检测谷氨酰胺酶1(GLS1)在结肠癌和癌旁组织中的表达,并观察干涉GLS1对结肠癌细胞代谢重编程的影响。方法:利用免疫组织化学实验观察50例结肠癌组织芯片中GLS1的表达状态,并进行统计学量化分析;利用siRNA干涉HT29细胞和Caco2细胞中的GLS1后,通过MTT实验、葡萄糖摄取实验和谷氨酰胺摄取实验检测其对细胞生物学行为的影响。结果:GLS1在结肠癌中显著高表达;干涉GSL1后,细胞增殖能力、对葡萄糖和谷氨酰胺的摄取能力均显著下降。结论:GLS1在结肠癌组织中高表达,并且影响细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的摄取能力。

谷氨酰胺酶1对卡介苗诱导的巨噬细胞自噬的调控作用

目的:探讨谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1)在卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)感染的巨噬细胞中对自噬的调控作用。方法:培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,利用小干扰RNA敲减巨噬细胞内GLS1的表达并结合BCG感染,采用免疫荧光染色、流式细胞术、ELISA和Western blot等技术检测自噬相关指标,阐明GLS1对BCG诱导的巨噬细胞自噬的调控作用,并初步探讨其机制。结果:(1)BCG感染巨噬细胞显著增加了LC3B和GLS1的蛋白表达量(P<0.01),促进了谷氨酰胺分解;(2)敲减GLS1显著增加了巨噬细胞内谷氨酰胺的含量(P<0.05),同时显著降低了巨噬细胞的自噬率以及自噬相关因子LC3B(P<0.01)、beclin-1(P<0.01)和ATG12(P<0.05)的蛋白表达量;(3)剥夺培养液中的谷氨酰胺处理细胞后,敲减GLS1对BCG感染的巨噬细胞中自噬相关因子LC3B、ATG5和ATG12的表达以及自噬流的发生无显著影响。结论:在BCG感染巨噬细胞RAW264.7过程中,敲减GLS1后可通过增加巨噬细胞内的谷氨酰胺含量抑制细胞自噬。

不同的选择[ALi M5621/In-System ISD300A1/创惟GL811控制芯片]

USB硬盘是我们日常生活中经常会接触到的一种移动存储介质,其实它的内部结构非常简单,无非就是通过一块控制芯片把2.5英寸硬盘的IDE接口转换为可以即插即用的USB接口。