谷氨酰胺酶抑制剂CB-839介导T细胞效应抑制肺癌细胞中αKGA、Gln转化的作用机制

目的研究谷氨酰胺酶抑制剂CB-839(简称CB-839)介导T细胞效应抑制肺癌细胞α-酮戊二酸(αKGA)、谷氨酰胺(Gln)转化的作用机制。方法10只SPF级健康SD裸鼠均建立肺癌动物模型,分为模型组及抑制剂组,模型组裸鼠常规饲养;抑制剂组裸鼠皮下注射CD-839,测量两种肿瘤体积。人肺癌细胞A549购自上海匹拓公司,将肺癌细胞分为Ⅰ组(肺癌细胞常规培养)、Ⅱ组(肺癌细胞+0.25μmol/L浓度CB-839)、Ⅲ组(肺癌细胞+0.50μmol/L浓度CB-839)、Ⅳ组(肺癌细胞+1.00μmol/L浓度CB-839)。MTT法测A549细胞增殖,流式细胞仪测A549细胞凋亡及CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)水平,RT-qPCR测谷氨酸脱氢酶(GLUD1)mRNA、谷氨酰胺酶(GLS)mRNA水平,αKGA试剂盒测αKGA水平。结果培养24、48及72 h时Ⅰ组肺癌A549细胞吸光度(A值)高于Ⅱ组,差异有统计学意义(P<0.05);培养24、48及72 h时Ⅳ组肺癌A549细胞A值与Ⅲ组比较,明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ组肺癌A549细胞凋亡率分别为(3.02±0.39)%、(4.72±0.52)%、(7.95±0.84)%及(13.22±1.28)%。与Ⅲ组相比,Ⅳ组肺癌A549细胞中CD80、CD86、MHCⅡ水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅳ组肺癌A549细胞中αKGA水平与Ⅲ组比较,明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。GLUD1 mRNA与GLS mRNA呈正相关(r=0.671,P<0.001),GLUD1 mRNA与αKGA呈正相关(r=0.708,P<0.001)。GLS mRNA与αKGA呈正相关(r=0.671,P<0.001)。结论CB-839可能通过介导T淋巴效应提高CD80、CD86、MHCⅡ水平,抑制αKGA及Gln相关基因转化,从而降低肺癌细胞活性,促进其凋亡,为今后肺癌的临床治疗及新药研发提供参考依据。

谷氨酰胺酶新型抑制剂及其抗肿瘤活性研究进展

肿瘤细胞利用各种代谢途径以满足增殖的能量和生物合成需求。除葡萄糖外,谷氨酰胺也是肿瘤细胞生长的重要前体物质及能量来源。谷氨酰胺酶(glutaminase,GSL)活性与Ras、c-Myc等癌基因以及Rho GTP酶相关。诸多临床前研究已证实谷氨酰胺酶抑制剂不仅具有抗肿瘤活性,还可以明显增强耐药肿瘤细胞对靶向药物的敏感性。目前新型GSL抑制剂CB-839已进入Ⅰ期临床试验,有望成为癌症治疗的新型药物。本文就谷氨酰胺代谢及其新型抑制剂抗肿瘤研究进展做一综述。

谷氨酰胺酶抑制剂CB-839对耐药小细胞肺癌细胞H69AR的杀伤作用研究

目的研究谷氨酰胺酶抑制剂CB-839对耐药小细胞肺癌细胞H69AR的细胞毒性作用。方法培养耐药小细胞肺癌细胞H69AR,将对数生长期耐药小细胞肺癌细胞H69AR随机分为8组:对照组仅加等量的培养液,其余7组实验组以倍比稀释的方式分别给予质量浓度为1.6×10^(-2),3.2×10^(-2),6.3×10^(-2),1.25×10^(-1),0.25,0.5,1μmol·L^(-1)的谷氨酰胺酶抑制剂CB-839。用噻唑蓝(MTT)法检测各组H69AR细胞活力的变化;用倒置显微镜观察H69AR细胞经CB-839作用后的形态学变化;用Western blotting法检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3及细胞自噬标志蛋白LC3的表达。CB-839处理耐药小细胞肺癌细胞H69AR,分为CB-839组、氯喹组和CB-839联合自噬抑制剂氯喹组,用MTT法检测H69AR细胞活力的变化。结果不同质量浓度的CB-839作用H69AR细胞72 h后,H69AR细胞的活力均降低且呈明显的剂量依赖性,其中6.3×10^(-2),1.25×10^(-1),0.5,1μmol·L^(-1)实验组的细胞活力分别为74.3%,58.7%,41.7%,29.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。通过倒置显微镜观察,CB-839作用H69AR细胞72 h后,0.25,0.5,1μmol·L^(-1)实验组的细胞密度随着药物质量浓度升高而显著降低,且形态发生皱缩和坏死。Western blotting实验结果表明,CB-839诱导H69AR细胞发生细胞凋亡,并激活细胞自噬活动。当使用自噬抑制剂氯喹抑制细胞自噬时,CB-839对H69AR细胞的杀伤作用显著增强。结论谷氨酰胺酶抑制剂CB-839对耐药小细胞肺癌细胞H69AR具有显著杀伤作用,在该过程中,H69AR细胞自噬活动增强,抑制自噬能进一步提高CB-839的抗肿瘤效应。