红松子油皮诺敛酸靶向脂质合成关键酶HMGCR保护冠脉内皮细胞的作用研究

本研究主要围绕红松子油中的活性成分皮诺敛酸(PLA)靶向脂质合成关键酶HMGCR保护冠脉内皮细胞的作用进行探讨,并就其在动脉粥样硬化(AS)防治领域的应用作出理论指导。采用H2O2作用于HCAEC建立细胞损伤模型,将PLA和HMGCR进行分子对接,CCK8法检测细胞存活率,倒置显微镜观察HCAEC细胞形态,TC试剂盒测定HCAEC中TC含量,免疫荧光法及Western blot法检测HCAEC中HMGCR的表达水平。结果表明,PLA与HMGCR具有强相互作用,在PLA干预下细胞存活率有明显提高、细胞形态有较好改善、HCAEC中TC含量下降、HMGCR表达水平降低。PLA能够通过与HMGCR互作显著抑制HCAEC中HMGCR的表达,从而减少细胞内总胆固醇的水平,为冠脉内皮细胞损伤提供保护,为AS的预防和治疗提供理论依据。

新型戊二酸胆固醇单酯脂质体的制备及其与H22细胞疫苗的耦联

制备能够与细胞疫苗耦联的新型戊二酸胆固醇单酯脂质体,用作疫苗的载体和佐剂,并研究其贮存稳定性及其最佳耦联条件。以戊二酸酐和胆固醇为原料合成戊二酸胆固醇单酯,再以其为原料与磷脂制备戊二酸胆固醇单酯脂质体,采用薄膜分散法制备脂质体,以粒径及多分散指数为指标优化脂质体处方,制得粒径在150-200 nm之间的戊二酸胆固醇单酯脂质体。对脂质体的稳定性和贮存条件进行研究,结果表明冻干脂质体在-20℃可至少保存12个月。以耦联率为指标,对影响戊二酸胆固醇单酯脂质体与H22细胞疫苗耦联的相关因素进行优化,试验结果表明,复溶后加入EDC活化10 min,再加入H22细胞疫苗和S-NHS孵育3 h,得到耦联率为81.4%的H22细胞疫苗-脂质体耦联物。

高剂量大豆蛋白摄入无更好降胆固醇作用的原因探讨

目的:从分子角度探讨摄入高剂量大豆蛋白不能起到更好降胆固醇的可能原因,为合理利用大豆蛋白提供依据。方法:将高胆固醇血症大鼠随机分为4组,分别喂养含有20%和30%大豆蛋白、20%和30%酪蛋白的纯合成饲料。实验8w后,采血测定血浆中TC、TG浓度,取肝脏测定HMG-CoA R、CYP7A和LDL-R mRNA的表达量。结果:与同水平酪蛋白组相比,两大豆蛋白组血浆TC浓度都显著下降(P<0.05),但两剂量大豆蛋白组之间无差异;与酪蛋白组相比,两个大豆蛋白剂量组的CYP7A mRNA的表达量增加(P<0.05),20%大豆蛋白组HMG-CoAR mRNA的表达量下降(P<0.05),LDL-R mRNA表达量增加(P<0.05),而30%大豆蛋白组HMG-CoA-R和LDLR mRNA的表达量没有差异。结论:高剂量大豆蛋白摄入上调CYP7A基因mRNA的表达量而可能负反馈刺激HMGCoA-R基因mRNA的表达量,降低了大豆蛋白降胆固醇效果。

人工培植牛黄对牛血清AKP、r-GT及Ch的影响

本文采用化学方法分别测定了人工植黄牛血清中AKP和r-GT的活性及Ch的含量。实验结果表明,植黄牛血清中AKP的活性比未植黄牛血清中AKP的活性有所升高(P<0.05),而血清中r-GT的活性和Ch的含量在两组牛之间未存在明显差别(P>0.05)。植黄牛与未植黄牛血清中三项指标分别为:AKP 13.16±4.99与8.68±2.13金氏单位:r-CT 37.44±7.70与35.78±6.71活力单位/dl;Ch 171.70±27.10与158.79±19.04mg/dl。

白细胞介素-1β激活HMGCoA还原酶促进HepG2细胞脂质积聚

目的:探讨白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)对HepG2细胞羟甲基戊二酸单酰辅酶A(3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-coenzyme A,HMGCo A)还原酶及脂质积聚的影响。方法:200μg/m L低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)负荷下的HepG2细胞分别给予0 ng/m L(对照组)、20 ng/m L(炎症组)IL-1β处理24 h。荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot分别测定HMGCo A还原酶mRNA及蛋白表达水平;薄层层析法检测HMGCo A还原酶活性;同位素标记法评估胆固醇合成情况;油红O染色及酶法定量检测细胞内脂质。结果:IL-1β处理下,HepG2细胞HMGCo A还原酶mRNA表达水平为对照组的(1.54±0.04)倍(t=5.619,P=0.001)、蛋白表达水平为对照组的(1.92±0.12)倍(t=7.745,P=0.002),且HMGCo A还原酶的酶活性为对照组的(1.73±0.25)倍(t=2.476,P=0.048)。IL-1β处理使HepG2细胞的胆固醇合成增多为对照组的(1.32±0.11)倍(t=2.316,P=0.036)。IL-1β处理的HepG2细胞内红染的脂滴显著多于对照组,且IL-1β处理组细胞内总胆固醇含量(22.43±1.62)为对照组(14.90±1.11)的1.51倍(t=3.845,P=0.018),胆固醇酯的含量(3.84±0.20)为对照组(1.41±0.05)的2.72倍(t=11.730,P=0.000)。结论:IL-1β可以上调HepG2细胞HMGCo A还原酶的mRNA和蛋白表达水平,并增强其酶活性,促进HepG2细胞内胆固醇合成和脂质积聚。

核黄素对高脂血症大鼠脂质代谢的影响

目的研究核黄素(Riboflavin)对高脂血症大鼠脂质代谢的影响,并探讨其机制。方法 70只SD雄性大鼠随机分为两组,10只大鼠作为正常对照组,60只大鼠给高脂饲料建立高脂血症模型,剔除造模失败的大鼠,最终造模成功高脂血症大鼠40只,分为模型对照组(HF)和低、中、高剂量组(分别为HF+LR、HF+MR、HF+HR组,核黄素剂量分别为0.667、3.385和6.670 mg/kg),每组10只。空白对照组正常饮食,其他组高脂饮食。实验末期(第60天)眼内眦采血(禁食)测卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT);取肝组织HE染色观察肝组织病理学形态,并制作10%肝匀浆测肝组织中3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)、胆固醇和甘油三酯水平。结果 HF+LR组肝脏胆固醇水平[(1.07±0.14)mmol/L]与HF组[(1.37±0.36)mmol/L]差异有统计学意义(P<0.05);HF+LR组、HF+MR组肝脏甘油三酯水平[(1.73±0.28)、(1.82±0.38)mmol/L]明显低于HF组[(2.15±0.43)mmol/L],差异有统计学意义(P<0.05);HF+LR组肝脏HMGR水平[(1.82±0.72)ng/ml]明显低于HF组[(2.88±0.99)ng/ml],差异有统计学意义(P<0.05);核黄素干预组和HF组间血清LCAT水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论核黄素可能通过降低HMGR的水平来调节肝脂水平,从而影响脂质代谢。