sgp130对糖尿病小鼠视网膜p-STAT3及VEGF-A表达的影响

目的:观察可溶性糖蛋白130(sgp130)对糖尿病(DM)小鼠视网膜p-STAT3及VEGF-A表达的影响,探讨sgp130防治糖尿病视网膜病变(DR)炎性损害的可能性。方法:小鼠45只被随机分为正常组、DM组和sgp130组。采用链脲佐菌素对DM组和sgp130组进行DM造模。正常组、DM组不做特殊干预,sgp130组在第1、5wk被给予1.5mg/mL sgp1302μL进行玻璃体腔注射治疗。10wk后处死所有小鼠,检查视网膜组织IL-6、p-STAT3、VEGF-A等蛋白的表达。结果:在第10wk时,DM组视网膜IL-6、p-STAT3、VEGF-A表达较正常组升高(均P<0.01)。sgp130组p-STAT3、VEGF-A表达水平较DM组低(均P<0.01)。结论:sgp130可以选择性拮抗IL-6反式信号传导通路,下调下游炎性因子VEGF-A的表达,可以用于干预DM引起的IL-6相关性视网膜炎性损害。

毛蕊异黄酮介导GP130/JAK/STAT通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的探究毛蕊异黄酮介导糖蛋白(GP)130/Janus酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)通路对脊髓星形胶质细胞损伤的影响。方法原代分离大鼠脊髓星形胶质细胞,并利用免疫荧光检测胶原纤维酸性蛋白(GFAP)。分别加入50、100、150μmol/L毛蕊异黄酮预处理脊髓星形胶质细胞12 h,然后加入H_(2)O_(2)处理24 h造氧化损伤模型,CCK8检测各组细胞增殖情况,选择合适的毛蕊异黄酮处理浓度。实验分组:空白对照(Control)组、模型(H_(2)O_(2))组、模型+毛蕊异黄酮预处理(H_(2)O_(2)+Calycosin)组、模型+毛蕊异黄酮预处理+抑制剂Ly294002(H_(2)O_(2)+Calycosin+Ly294002)组、模型+毛蕊异黄酮处理+抑制剂Stattic(H_(2)O_(2)+Calycosin+Stattic)组。CCK8检测各组细胞增殖情况,流式检测各组细胞凋亡和周期情况,免疫荧光检测各组细胞样本中Brdu水平;Western印迹检测各组细胞中p-JAK2、p-STAT3、p-蛋白激酶B(AKT)、GP130、白细胞介素(IL)-6蛋白表达水平。结果H_(2)O_(2)处理能够抑制脊髓星形胶质细胞的增殖并诱导其凋亡,氧化损伤模型细胞组中p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、GP130、IL-6的蛋白表达水平显著增加,而毛蕊异黄酮预处理后能够减轻H_(2)O_(2)造成的氧化损伤,促进增殖和抑制凋亡,并显著抑制p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、GP130、IL-6蛋白表达水平(P<0.05)。结论蕊异黄酮能够促进氧化损伤的星形胶质细胞增殖并抑制其凋亡,并能通过抑制磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/AKT通路磷酸化、JAK2/STAT3通路磷酸化起作用。

基于IL-6/gp130信号研究逍遥抗癌解郁方调节乳腺癌并发抑郁症模型小鼠肿瘤、海马组织免疫的机制

目的 观察逍遥抗癌解郁方(Xiaoyao Kang’ai Jiyu Formula,XYKAJY)对乳腺癌并发抑郁症(breast cancer related depression, BCRD)模型小鼠肿瘤、海马组织免疫的影响。方法 BALB/c雌性小鼠腋下接种1×106个/m L 4T1炎性乳腺癌细胞,7d后观察成瘤情况,将所有成瘤小鼠根据糖水偏好随机分为5组:模型组、紫杉醇合氟西汀组、逍遥抗癌解郁高剂量组、逍遥抗癌解郁低剂量组,并连续21 d背部皮下注射皮质酮(30 mg/kg)以复制BCRD模型,另设空白组。通过旷场、强迫游泳实验检测各组小鼠行为学变化;采用悬液芯片技术检测小鼠血清、海马、肿瘤、前额皮质中白细胞介素(interleukin, IL)-6的含量;采用免疫组化和Western blot法检测肿瘤、海马中白细胞介素6受体(interleukin 6 receptor, IL-6R)、糖蛋白130(glycoprotein 130, gp130)的蛋白表达。结果 与空白组比较,BCRD小鼠的水平及垂直活动次数降低(P<0.01),强迫游泳不动时间延长(P<0.01);血清、肿瘤、海马、前额皮质中IL-6的含量均显著升高(P<0.01,P<0.05);海马组织中IL-6R、gp130表达均显著升高(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,逍遥抗癌解郁高剂量能显著增加模型小鼠的水平及垂直活动次数(P<0.01,P<0.05),缩短游泳不动时间(P<0.01),降低血清、海马、前额皮质、乳腺肿瘤中IL-6含量(P<0.01或P<0.05),并有效降低肿瘤、海马组织中IL-6R、gp130表达(P<0.01,P<0.05)。结论 XYKAJY具有良好的抗癌解郁功效,其机制可能与IL-6/gp130信号异常紧密相关。

抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体对IL-6信号分子调控浅析

目的:分析鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体[anti-IL-6Rβ(gp130)mAb]的生物学特性及对IL-6信号分子的调节作用。方法:利用Western blot、竞争性ELISA实验、功能表位结合实验,检测anti-IL-6Rβ(gp130)mAb的亲和力、效价及与gp130抗原表位结合特异性。进而探讨anti-IL-6Rβ(gp130)mAb对U266细胞、RA患者外周血单个核细胞(PBMC)及滑膜液单个核细胞(SFMC)增殖和分化中的IL-6信号分子的调控机制。结果:Anti-IL-6Rβ(gp130)mAb对gp130具有高亲和性(如10A1细胞株的亲和力常数可达为2.62E-10),所获得的多株单抗还具有针对不同抗原结合表位的特性,可用于分析和研究IL-6信号通路及下游STAT3的磷酸化。结论:获得针对不同抗原结合表位的anti-IL-6Rβ(gp130)mAb,初步的实验结果表明此类单抗不仅具有调控IL-6信号分子和下游STAT3磷酸化的生物学功能,并为解析临床RA的发病与IL-6信号分子的关联性提供了初步的实验结果。

gp130分子在树突状细胞上表达及其意义

目的：探讨单核细胞向树突状细胞（ＤＣ）分化成熟时，ｇｐ１３０分子在细胞膜上的表达及其意义。方法：人外周血分离得到的单核细胞在含有ＤＣ分化成熟所需的各种因子的培养液中分别培养４ｄ和７ｄ，然后用流式细胞术测定ＤＣ上ｇｐ１３０分子的表达。结果：ｇｐ１３０分子在单核细胞上低表达，经培养分化成熟成为ＤＣ后，ＤＣ上的ｇｐ１３０分子表达被上调，特别是在ＴＮＦα和抗ＣＤ４０刺激型单克隆抗体存在下。结论：ｇｐ１３０分子表达于ＤＣ前体细胞（单核细胞）并随其分化成熟而增加。

肝炎肝硬化患者血清sIL-6R和sgp130变化的研究

为了探讨肝炎肝硬化（ＨＣ）患者血清可溶性白介素６受体（ｓＩＬ－６Ｒ）和可溶性ｇｐ１３０（ｓｇｐ１３０）含量的变化及其临床意义，运用酶联免疫吸附法检测了３４例ＨＣ患者血清ｓＩＬ－６Ｒ和ｓｇｐｌ３０含量。结果表明：①活动性和静止性ＨＣ患者血清ｓＩＬ－６Ｒ和ｓｇｐ１３０水平均高于正常对照（Ｐ＜０．０１），ｓＩＬ－６Ｒ／ｓｇｐ１３０比值ＨＣ患者低于正常人，活动性ＨＣ患者低于静止性ＨＣ患者（Ｐ＜０．０１）；②血清ｓＩＬ－６Ｒ和ｓｇｐ１３０水平之间呈正相关（ｒ＝０．４１７，Ｐ＜０．０５），ｓＩＬ－６Ｒ、ｓｇｐｌ３０水平与血清Ｂｉｌ－Ｔ水平间亦呈正相关（分别为ｒ＝０．４７４，ｒ＝０．４８２，Ｐ＜０．０１），而与血清ＡＬＴ水平无明显相关性（分别为ｒ＝０．１９３，ｒ＝０．１５２，Ｐ＞０．０５）。提示：血清ｓＩＬ－６Ｒ。

可溶性gp130酶联检测试剂盒的研制及其运用

目的 :建立灵敏、特异、稳定和简便的人可溶性gp130 (sgp130 )酶标检测试剂盒。方法 :采用本室制备的鼠抗人gp130单抗T2作为包被单抗 ,另一株识别不同抗原位点的单抗T12经生物素 (biotin)标记后作为检测抗体 ,建立双单抗夹心的人sgp130酶标检测方法 ,并分别测定了 40例健康供血员、40例甲亢及 47例慢性肾炎患者血清中sgp130的含量。结果 :成功地研制了人sgp130酶联检测试剂盒 ,其灵敏度为 10ng/ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 7 6 %,回收率为95 %～ 111%,提示检测方法具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。用该试剂盒测得的血清中sgp130含量的 95 %正常值范围为5 36 92～ 2 87 88(ng/ml) ,甲亢及慢性肾炎患者血清中sgp130的含量分别为 937 16± 2 17 5 9和 80 6 4 5± 138 4 7(ng/ml) ,明显高于正常对照者 (P <0 0 1)。结论 :建立的人sgp130酶标检测试剂盒 ,能够对血清中sgp130进行准确定量 ,可为临床gp130相关性疾病的辅助诊断、疗效估价和判断预后提供有价值的生物学参数 ,具有良好的运用前景。

痛泻要方对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中gp130、SOCS3表达的影响

目的观察痛泻要方对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织中糖蛋白130(gp130)、细胞因子信号传导抑制蛋白3(SOCS3)基因和蛋白表达的影响。方法将60只大鼠随机分为A、B、C、D组各15只,B、C、D组均采用三硝基苯磺酸/乙醇溶液+束缚应激、饮食失节法行肝郁脾虚型UC造模,A组采用同样方法用等量的生理盐水灌肠。C、D组分别予以痛泻要方(生药5.5 g/kg)、美沙拉秦(0.5 g/kg)灌胃10 m L/kg,A、B组灌服等体积生理盐水。各组造模成功后第1天开始灌胃,1次/d,连续21 d。取出距肛门以上7~8 cm处结肠段,肉眼行结肠黏膜损伤评分,分别采用Real-time荧光定量PCR法及免疫组化、免疫印迹法检测结肠组织中的gp130、SOCS3基因和蛋白。结果 B组结肠黏膜损伤评分为(2.67±0.62)分,高于A组的(0.6±0.63)分(P<0.01);C、D组分别为(1.73±0.70)、(1.27±0.46)分,均高于B组(P均<0.01);C、D组间比较无统计学差异。B组较A组结肠组织中gp130基因和蛋白表达升高、SOCS3基因和蛋白表达降低(P均<0.05),C、D组较B组结肠组织中gp130基因和蛋白表达降低、SOCS3基因和蛋白表达升高(P均<0.05),C、D组结肠组织gp130、SOCS3基因和蛋白比较无统计学差异。结论痛泻要方可下调gp130表达、上调SOCS3表达,从而有效降低肝郁脾虚型UC大鼠结肠黏膜损伤程度。

抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析

目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株。大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应。结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖。结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段。

可溶性gp130(sgp130)在IL-6/IL-6R系统中的生物学作用研究

目的：在成功克隆、表达和纯化人可溶性ｇｐ１３０（ｓｇｐ１３０）分子的基础上，研究ｓｇｐ１３０在白介素６（ＩＬ６）／白介素６受体（ＩＬ６Ｒ）系统中的生物学作用。方法：采用转人膜型ｇｐ１３０的ＢＡＦ１３０细胞和人多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞株ＸＧ４ＣＮＴＦ和分离得到新鲜ＭＭ细胞，通过３ＨＴｄＲ的掺入做生物学检测，观察ｓｇｐ１３０在上述细胞上对ＩＬ６生物学活性的影响。结果：ｓｇｐ１３０对ＩＬ６和可溶性ＩＬ６Ｒ引起ＢＡＦ１３０细胞的增殖有抑制作用。此外，ｓｇｐ１３０对ＩＬ６刺激ＸＧ４ＣＮＴＦ细胞和分离得到新鲜ＭＭ细胞的增殖也有抑制作用。结论：ｓｇｐ１３０为ＩＬ６的拮抗剂。

白细胞介素-6受体亚单位gp80和gp130在骨质疏松症中的基因表达(英文)

目的观察骨质疏松症骨髓白细胞介素-6(IL-6)受体(IL-6R)亚单位gp80和gp130基因表达的变化,探讨IL-6R复合系统在雌激素缺乏所致骨质疏松中的作用。方法12周龄雌性SD大鼠20只犤体重(200±20)g犦随机分为骨质疏松组(10只)和空白对照组(10只)。分别于造模后0、12周,测定大鼠骨髓gp80和gp130mRNA水平。结果gp130mRNA水平(pg/μgtotalRNA):术后0、12周空白对照组无明显变化犤(80±3)和(82±4),t=0.85,P>0.05犦,骨质疏松组明显增加犤(80±3)和(290±40),t=6.46,P<0.01犦。gp80mRNA水平(pg/μgtotalRNA):术后0、12周空白对照组无明显变化增加犤(85.4±2.7)和(85.6±2.8),t=0.35,P>0.05犦,骨质疏松组明显增加犤(85.2±2.7)和(210±40),t=6.32,P<0.01犦。结论卵巢切除所致骨质疏松大鼠骨髓IL-6R亚单位gp80和gp130基因表达增加。

C6胶质瘤微环境中SIL-6R/GP130与MSCs瘤向转化的相关性

目的通过骨髓间充质干细胞(MSCs)与C6胶质瘤细胞间接共培养,探讨在C6胶质瘤微环境中SIL-6R及GP130的过度激活和表达对MSCs向肿瘤方向转化的影响。方法用Transwell插入式培养皿结合6孔板构建间接共培养体系来模拟MSCs生长的微环境,用RT-QPCR检测细胞中GP130、STAT-3、Cyclin D1和BCL-xl mRNA的表达;相差显微镜下观察细胞形态学;ELISA法检测上清液中SIL-6R的表达;免疫荧光法检测细胞膜上GP130的表达;Western blot检测细胞中STAT-3、Cyclin D1、BCL-xl蛋白表达。结果实验组的MSCs呈现类似胶质瘤细胞样的形态;细胞中GP130、STAT-3、Cyclin D1和BCL-xl mRNA的表达水平和上清液中SIL-6R的表达水平明显高于阴性对照组和空白组(P<0.05);实验组大部分细胞及阳性对照组的细胞膜上表达GP130蛋白,分别达到93%±5%和95%±5%,显著高于阴性对照组及空白组的0%(P<0.01),细胞中STAT-3、Cyclin D1和BCL-xl的蛋白表达水平高于阴性对照组和空白组(P<0.05)。结论 MSCs的恶性转变与SIL-6R/GP130的过度表达和激活存在一定的相关性,但其在MSCs瘤向转变中的作用及机制有待进一步研究。

大手术后MODS患者血清sgp130/IL-6比值变化及意义

目的探讨大手术后MODS患者血清可溶性糖蛋白130(sgp130)和白细胞介素6(IL-6)比值的变化及临床意义。方法将56例大手术后MODS患者按MODS评分(Marshall标准)[1]分为轻、中、重三组,再采用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组患者和30例健康体检者(对照组)血清sgp130、IL-6的水平以及sgp130/IL-6比值,并观察各组sgp130/IL-6比值间的关系。结果三组MODS患者sgp130、IL-6的水平均明显升高,与健康对照组比较差异有显著性(P<0.01),并且sgp130、IL-6的水平有随MODS严重程度增加而逐渐升高;三组MODS患者sgp130/IL-6比值均明显降低,与健康对照组比较差异有显著性(P<0.01),并且sgp130/IL-6比值有随MODS严重程度增加而逐渐降低,且各组间差异显著(P<0.01)。结论血清sgp130、IL-6参与MODS的发生、发展,sgp130/IL-6比值可作为评估大手术后MODS患者病情严重程度的有效指标。

gp130介导的信号转导通路在哺乳动物着床中的作用

IL-6相关细胞因子家族成员包括LIF、IL-6、IL-11以及它们的共同受体gp130,在哺乳动物的着床过程中起着重要的作用。LIF敲除的小鼠不能着床。IL-11Rα敲除的小鼠不能完全发生蜕膜化,从而导致妊娠的失败。IL-6敲除的小鼠着床数和着床胚胎的存活率均降低。这些细胞因子通过与受体结合,激活下游信号分子STAT,从而形成了 gp130/Jak/STAT信号转导通路,并且STAT3基因敲除的小鼠也不能着床。这些细胞因 子通过gp130/Jak/STAT信号转导通路在着床过程中起着重要的作用。了解此信号通路在着床中的作用对解决一些不明原因的不孕症,以及开发着床相关的避孕药物等具有重要意义。

gp130及其介导的信号转导

ｇｐ１３０是ＩＬ－６等细胞因子的共有信号传导链，其胞浆区具有在细胞因子受体家族中有一定保守性的ＢＯＸ１、ＢＯＸ２和ＢＯＸ３，在信号传导中具有重要作用。已知ｇｐ１３０通过ＪＡＫ－Ｓｔａｔ途径和ＭＡＰ激酶途径传导信号。但不能激活上述两条途径的ｇｐ１３０截断变异体仍可传导增殖信号，表明有其它ｇｐ１３０信号传导途径存在。

gp130结合分子抑制JAK激酶与gp130的结合

ｇｐ１３０结合分子（ＧＡＭ）是以ｇｐ１３０胞浆内段为探针新近克隆成功的一个分子，其功能仍不清楚。为探讨ＧＡＭ在ｇｐ１３０信号传导中的可能作用，我们将不同长度的ｇｐ１３０变异体转染Ｈｅｐ３Ｂ细胞，观察ＧＡＭ与ｇｐ１３０的免疫共沉淀。结果表明ＧＡＭ可与ｇｐ１３０胞浆内近胞膜部分相结合。当ＧＡＭ、ｇｐ１３０和ＪＡＫ激酶共转染ＣＯＳ细胞时，ＧＡＭ的表达可明显抑制ＪＡＫ激酶对ｇｐ１３０的磷酸化。以上结果提示，ＧＡＭ可能作为一个抑制分子参与ｇｐ１３０的信号传导。

Thioredoxin-GAM融合蛋白的表达及其与GST-gp130融合蛋白的结合

ＧＡＭ是以ｇｐ１３０胞浆区为探针筛选而得到的一个新的ｇｐ１３０结合分子，探讨其在ｇｐ１３０信号传导中可能具有的重要作用的基础是证实ｇｐ１３０胞浆区与ＧＡＭ的结合。我们采用ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ融合蛋白表达系统表达了ＧＡＭ分子的融合蛋白。在此基础上，发现ＧＳＴ－ｇｐ１３０融合蛋白与ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ－ＧＡＭ融合蛋白共沉淀，而单独ＧＳＴ不与ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ－ＧＡＭ融合蛋白共沉淀，证实了ＧＡＭ与ｇｐ１３０的特异性结合，此结果为探讨ＧＡＭ分子的功能打下了重要的基础。

sgp130 cDNA在痘苗病毒载体系统中的表达

ｇｐ１３０是一种分子量为１３０ｋＤ的细胞膜糖蛋白，是ＩＬ－６等多种细胞因子共用的信号传递分子。本研究将含ｇｐ１３０胞外区全长的可溶性片段的基因（ｓｇｐ１３０ｃＤＮＡ）构建到痘苗病毒载体中，并与野生型痘苗病毒在ＴＫ－１４３细胞中发生同源重组，用ＢｕｄＲ和Ｘ－ｇａｌ双重选择，得到带有人ｓｇｐ１３０的重组痘苗病毒（Ｖｓｇｐ１３０）。采用ＩＤＡ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ法证实：感染Ｖｓｇｐ１３０的ＴＫ－１４３细胞上清中有较强的ｓｇｐ１３０表达，表达产物分子量为１００ｋＤ左右。

Gp130分子的活化在树突状细胞分化和成熟中的意义

目的 :研究激发型抗gp130分子单抗B S12对树突状细胞 (DC)分化成熟和功能的影响。方法 :人外周血单核细胞在GM CSF和IL 4作用下分化为未成熟DC后 ,加入B S12单抗 ,观察它对DC表型、摄取抗原的能力以及DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反应及趋化T细胞能力的影响 ;同时比较B S12和激发型抗CD4 0单抗 5C11对DC的作用。结果 :激发型抗gp130分子单抗B S12作用于未成熟DC ,可以上调DC上CD1a和共刺激分子CD80、CD86以及成熟DC的标志CD83分子的表达 ,下调CD14的表达 ,降低DC摄取抗原的能力 ,增强DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反应及趋化T细胞的能力 ,但这些作用都稍弱于 5C11对DC的作用。结论 :未成熟DC上gp130分子的直接活化可以诱导DC的分化和功能成熟。