广西猪瘟流行毒与C-株疫苗毒gp55(E_2)主要抗原区DNA序列差异的比较

采用反转录 PCR(RT- PCR)和套式 PCR(nest Polym erase Chain Reaction,n PCR)扩增出 3株广西省近期 (1999～ 2 0 0 0年 )猪瘟流行野毒的 E2 基因 ,将其分别克隆于 PMD- 18T载体上并进行了核苷酸序列测定 ,根据 C株及 Brescia和 Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行氨基酸序列推导 ,同时进行了同源性比较及 E2 糖蛋白结构的分析。结果表明 ,所测 3株 HCV E2 基因的长度均为 1170 bp,编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和部分跨膜序列 ,共由 384个氨基酸组成。3株流行毒的 E2 基因核苷酸序列同源性为 90 .10 %～ 98.5 4%,相应的氨基酸序列同源性为 89.5 9%～ 97.92 %。这 3株流行毒与 C-株兔脾组织毒 (疫苗种毒 ) E2 基因的核苷酸序列同源性为 82 .87%～ 83.99%,相应的氨基酸序列同源性为 86 .98%～ 90 .10 %,表明近期猪瘟流行毒与 C-株疫苗毒的 gp5 5蛋白之间存在一定的差异。

河南省猪瘟流行毒的E_2基因序列分析和基因分型

采用 RT- PCR和 n PCR扩增出 3株河南省近期 (1999～ 2 0 0 0年 )猪瘟流行野毒的 E2 基因 ,分别克隆于 PMD- 18T载体 ,对其进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列推导 ,同时进行了同源性比较及 E2 糖蛋白结构的分析。结果表明 ,所测 3株 HCV E2 基因的长度均为 116 9bp。编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和部分跨膜序列 ,共由 384个氨基酸组成。3株流行毒的 E2 基因核苷酸序列同源性在 99%以上 ,相应的氨基酸序列同源性也在 99%以上 ;这 3株流行毒与 C-株兔脾组织毒 (疫苗种毒 ) E2 基因的核苷酸序列同源性在 83.14 %～ 83.2 3% ,相应的氨基酸序列同源性在 88.14 %～ 88.6 8%。经遗传发生关系分析 ,C-株兔组织毒 C-株细胞毒属于组群 1(group 1) ,河南省近期流行猪瘟毒属于组群 2 (group 2 ) ,近期猪瘟流行毒与 C-株疫苗毒的 gp5

猪瘟病毒及其囊膜糖蛋白E_2基因的研究进展

简要阐述近年来猪瘟病毒及其囊膜糖蛋白E2基因在分子生物学、分子免疫学和基因工程疫苗研究领域的最新研究进展。

Studies of the Expression of Estrogen Receptor Gene in the Rat Uterus during the Estrous Cycle and Periimplantational Period

The correlation or serum estradiol concentrstion and uterine estrogen receptor (ER) gene expression (ERn and ERc quantitated by Dextrsn Coat Charcoal assay and ER mRNA by Northern blotting) was studied during the rat estrous cycle and early Pregnant stage (dl-d10). The ER gone expression was up - regulated by estrogen and the levels of ER mRNA synchronized with the changes of ER protein, suggesting that estrogen influenced the trsnscriPtional step of the ER gene. Post-coitum ER expression increased with the serum estrsdiol progressively, reached a peak on d4-ds (Just before implantation), but drastically dropped to the nadir on d6-d7 (during implantation) and then recovered. It was of interest to discover that ER mRNA level in the nonimplantstion sites (NIS) of uterus was much higher than that in the implantstion sites (IS).

克氏原螯虾前列腺素E_(2)受体EP4基因的序列特征及表达分析

前列腺素E_(2)(PGE_(2))受体EP4在动物体的卵巢发育、排卵和生殖调控方面具有重要的作用。利用转录组测序的方法从克氏原螯虾卵巢中获得了PGE_(2)受体EP4(PcEP4)基因的具有完整开放阅读框的cDNA序列。为阐明该基因的序列特征及其在克氏原螯虾卵巢中的作用,对该基因的序列进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR方法对该基因的表达模式进行检测。生物信息学分析结果显示:PcEP4基因开放阅读框长2505 bp,编码835个氨基酸;PcEP4是一个典型的具有7个跨膜α-螺旋结构的G蛋白偶联受体蛋白;克氏原螯虾EP4氨基酸序列与凡纳滨对虾的相似性最高,亲缘关系最近。基因表达结果显示:PcEP4基因表达量在克氏原螯虾成熟卵巢中的表达量最高;在Ⅰ~Ⅵ期的卵巢中,PcEP4基因在Ⅴ期卵巢中的表达量最高;PGE_(2)注射后36、48、60 h,克氏原螯虾卵巢中PcEP4基因表达量与对照组相比显著升高(P<0.05),注射72 h后克氏原螯虾的抱卵率与对照组相比也升高。试验结果表明,EP4作为PGE_(2)的受体与PGE_(2)一起在克氏原螯虾的卵巢中具有促进卵子成熟和排卵的重要作用。

2型糖尿病家系膜糖蛋白PC1基因多态性的研究

目的 探讨膜糖蛋白PC 1基因多态性与胰岛素抵抗 (IR)特征和 2型糖尿病 (T2DM )的关系。 方法 选择T2DM家系中的T2DM患者 (2 16例 )、非DM一级亲属 (133例 ) ,运用PCR RFLP技术进行PC 1基因编码区K12 1Q多态性研究 ,同时检测临床和生化指标 ,并与正常人 (10 6名 )相比较。 结果 (1)T2DM患者基因型频率和等位基因频率与正常对照无明显差异。携带Q等位基因的DM患者 ,收缩压、甘油三酯 (TG)、胆固醇 (TC)、空腹胰岛素 (FIns)水平等较后者明显增高。 (2 )非DM一级亲属的基因型频率和等位基因频率与正常对照比较差异无显著意义。携带KQ基因型者虽然其体质指数明显低于KK基因型者 ,但前者舒张压、TG、TC、FIns、餐后 2h胰岛素(2hIns)、空腹血浆C肽 (FCP)水平等显著高于后者。 (3)合并高血压的DM患者 (84例 )和无高血压的DM患者 (132例 )比较 ,QQ基因型只见于前者。 结论 (1)T2DM患者、非DM一级亲属和正常人中该多态性分布没有明显差异。 (2 )PC 1基因Q12 1K基因型与家族性T2DM家系成员的IR表型相关。 (3)PC 1基因Q12 1K基因多态性与T2DM患者的高血压无关。

微乳丹参酮逆转肿瘤多药耐药的作用

目的:观察中药新剂型微乳丹参酮对人白血病敏感细胞株(sensitive K562 cell line,KS)及其阿霉素(ADM)耐药株(ADM resistant K562 cell line,KA)的多药耐药性逆转效果,并探讨其可能机制。方法:用中药制剂微乳丹参酮作为逆转剂,丹参酮和空白微乳体系作为对照,作用于耐药株,采用MTT法、流式细胞术、荧光强度法检测逆转前后相关指标变化。结果:微乳丹参酮、空白微乳体系及丹参酮均可显著降低KA的耐药性,微乳丹参酮的作用最强,逆转倍数显著高于空白微乳体系和丹参酮两组(P<0.05)。微乳丹参酮、空白微乳体系及丹参酮均可降低KA的P-gp和Bcl-2表达水平,使肿瘤细胞凋亡比率上升,微乳丹参酮的作用最强,使肿瘤细胞在ADM作用下的凋亡比率增加(P<0.05)。三者均可使细胞内ADM药物浓度升高,微乳丹参酮作用后的KA细胞中ADM的浓度最高,与空白微乳体系和丹参酮组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:P-gp药物外排和Bcl-2高表达引起的凋亡抑制是多药耐药的发生机制之一。微乳丹参酮有很强的多药耐药逆转作用,可显著增加KA细胞内ADM药物浓度。

环氧化酶-2在肝细胞肝癌中的表达及与多药耐药的相关性研究

目的观察环氧化酶-2(COX-2)、P糖蛋白(P-gp)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达并分析两者的相关性。方法应用免疫组化S-P法、逆转录多聚酶链反应法(RT-PCR)检测重庆医科大学附属第二医院2005年10月～2007年6月手术切除经病理证实的52例HCC标本、癌旁组织及10例正常肝组织中COX-2和P-gp及其基因的表达情况。结果COX-2/COX-2 mRNA、P-gp/MDR1 mRNA在肝细胞肝癌组织中的表达明显上调,与其在正常肝组织、癌旁组织中的表达比较差异有统计学意义(P<0.01)。且COX-2、P-gp在肝细胞肝癌中的阳性表达具有明显相关性,相关系数r=0.563(P<0.01)。结论(1)COX-2高表达参与了肝癌的发生、发展。(2)COX-2与P-gp在肝细胞肝癌中的表达密切相关,COX-2可能干预P-gp的表达从而参与肝癌的多药耐药过程。

早产儿颅内出血与血小板参数变化及血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性的相关性研究

目的探讨早产儿颅内出血(ICH)与外周血血小板参数变化的关系,分析血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性与ICH的相关性。方法选择2005年5月至2007年5月在温州医学院附属育英儿童医院新生儿科住院的胎龄<34周、出生体重<1500g的早产儿为研究对象。按生后2周内头颅B超检查结果,分为ICH组和无ICH组。ICH组根据ICH分度结果分为轻度(Ⅰ和Ⅱ度)和重度ICH(Ⅲ和Ⅳ度)亚组。入选患儿在入院第2天检测血小板各项参数,采用PCR及限制性内切酶分析法检测血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性。各组等位基因比例采用Hardy-Weinberg平衡检验。结果ICH组纳入68例,其中轻度ICH亚组53例,重度ICH亚组15例;无ICH组纳入75例。ICH组PLT和平均血小板体积(PCT)显著低于无ICH组,P<0.05;重度ICH亚组较轻度ICH亚组上述指标下降更显著,P<0.05。ICH组58/68例、无ICH组65/75例成功进行了血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性检测。ICH组血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2的各基因型比例为:TT77.6%(45/58例),TM17.2%(10/58例),MM5.2%(3/58例);M基因频率为13.8%(16/116频次);无ICH组为TT89.2%(58/65例),TM10.8%(7/65例),MM0;M基因频率为5.4%(7/130频次)。两组M基因频率差异有统计学意义。轻度ICH亚组与重度ICH亚组M基因频率差异无统计学意义(12.5%vs20.0%)。ICH组和无ICH组各基因型比例符合Hardy-Weinberg遗传平衡。含有M等位基因患儿PLT和PCT显著低于无M等位基因患儿。结论①ICH早产儿存在血小板参数异常现象;②血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2基因多态性与早产儿ICH发生的关联性值得更细化的研究;③血小板膜糖蛋白GPIbαHPA-2M等位基因可能与早产儿ICH的严重程度无关。

单纯疱疹病毒2型糖蛋白G的基因扩增、克隆及其B细胞抗原表位分析

目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白G-2(gG-2)全长基因并对糖蛋白G-2进行B细胞抗原表位预测.方法:用PCR法扩增HSV-2的gG-2基因,连接到pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α株后测序.利用Lasergene,C lustal X等软件,进行B细胞抗原表位预测.结果:完成单纯疱疹病毒2型(HSV-2)gG-2全长基因克隆.通过B细胞抗原表位分析,发现HSV-1的gG-1和HSV-2的gG-2氨基端的同源性很低.gG-2蛋白在“独特区”存在抗原指数非常强的抗原表位.结论:成功构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)gG-2全长基因克隆,为单纯疱疹病毒感染的诊断试剂的研发及抗单纯疱疹病毒疫苗研究寻找更好的靶位点提供研究材料和参考.

乳腺癌组织中雌激素受体与C-erbB-2基因、多药耐药基因MDR1表达

目的观察乳腺癌组织中雌激素受体(ER)与C-erbB-2基因、多药耐药基因MDR1(P-gp)蛋白表达并探讨其相互关系。方法用免疫组织化学法(S-P法)对162例乳腺癌手术切除标本进行ER、C-erbB-2、MDR1(P-gp)检测,结果作统计学分析。结果ER、C-erbB-2、MDR1(P-gp)的阳性表达率各为53.7%、37.0%和27.7%。ER在分化越高和无腋窝淋巴结转移者的乳腺癌中其阳性表达率高,C-erbB-2在分化越差的乳腺癌中其阳性表达率高,组间相比有显著差异(P<0.05)。在有腋窝淋巴结转移的乳腺癌中C-erbB-2、MDR1(P-gp)表达率明显升高。C-erbB-2与MDR1(P-gp)的阳性表达率间具有一定的正相关性,C-erbB-2表达与ER表达呈负相关。结论ER、C-erbB-2基因、MDR1(P-gp)在乳腺癌中有一定的内在联系,联合检测有助于乳腺癌预后的判断,为合理制定综合治疗方案提供依据。

PC-1基因多态性与2型糖尿病及胰岛素抵抗的相关性

目的探讨浆细胞膜糖蛋白PC-1基因多态性与胰岛素抵抗(IR)特征和2型糖尿病(DM)的关系。方法运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCRR-FLP)技术对深圳市133例2型DM患者和108例非DM对照人群的PC-1基因第四外显子K121Q多态性进行分析,并对2型DM组不同基因型间临床及生化指标进行比较。结果2型DM组与非DM对照组比较,PC-1基因型频率和等位基因频率分布差别均无统计学意义;2型DM组携带Q等位基因者空腹血糖、甘油三酯及空腹血C肽水平显著高于携带K等位基因者。结论PC-1基因K121Q多态性与2型DM患者IR表型相关,但与2型DM的发生无明显关联。

新辅助化疗对ⅡB期骨肉瘤细胞Cyclin D1、Bcl-2、PCNA和P-gp表达的影响

目的探讨新辅助化疗对骨肉瘤组织中细胞周期素D1(CyclinD1)、Bcl-2、增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响,及与肿瘤细胞坏死率(tumorcellnecrosisrate,TC-NR)的关系。方法应用免疫组织化学技术检测化疗前后23例骨肉瘤组织标本中CyclinD1、Bcl-2、PCNA和P-gp的表达,并计算TCNR。结果新辅助化疗前CyclinD1、Bcl-2、PCNA和P-gp的阳性表达率分别为73.9%(17/23)、69.6%(16/23)、91.3%(21/23)和21.7%(5/23),新辅助化疗后的阳性表达率分别为52.2%(12/23)、34.8%(8/23)、43.5%(10/23)和56.5%(13/23)。化疗后,骨肉瘤组织中Bcl-2、PCNA的表达低于化疗前,P值分别为0.039和0.034;P-gp高于化疗前,P=0.021;CyclinD1的表达差别无统计学意义,P=0.180。化疗前CyclinD1、Bcl-2、PCNA和P-gp的表达与TCNR无相关性,P值分别为0.155、0.371、1.000和0.640;而化疗后Bcl-2、PCNA和P-gp的表达与TCNR呈负相关,P值分别为0.009、0.012和0.015;CyclinD1的表达与TCNR无相关性,P=0.100。结论新辅助化疗可能通过抑制肿瘤细胞的增殖和促进肿瘤细胞的凋亡达到杀灭骨肉瘤细胞的目的;同时,由于MDR的过度表达,增加骨肉瘤细胞对化疗药物的耐药性。检测化疗前CyclinD1、Bcl-2、PCNA和P-gp在肿瘤细胞中的表达尚难以预测骨肉瘤的化疗疗效。

环氧合酶-2抑制剂对人舌鳞癌Tca8113/BLM细胞MDR1/P-gp表达的影响

目的探讨环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌耐药细胞系Tca8113/BLM细胞多药耐药基因和P-糖蛋白表达的影响。方法采用BLM(30μg/ml)反复24h暴露法处理人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞,采用不同浓度的塞来昔布作用于Tca8113/BLM细胞,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪测定P-gp的表达水平,RT-PCR检测多药耐药基因mRNA的表达。结果塞来昔布显著抑制Tca8113/BLM细胞增殖、下调Tca8113/BLM细胞MDR1基因表达,其作用呈剂量依赖关系。结论塞来昔布以剂量依赖方式抑制人舌鳞癌耐药细胞系Tca8113/BLM细胞MD1l/P-gp表达,并抑制细胞增殖,这种作用可能与COX-2抑制剂增强抗癌药物对肿瘤细胞的杀伤作用有关。

保产无忧散对孕晚期大鼠Cx-43基因表达及宫颈成熟相关指标的影响

目的:探讨保产无忧散对孕晚期大鼠Cx-43基因表达及宫颈成熟相关指标的影响。方法:取受孕成功的孕鼠30只,采用随机法将孕鼠分成模型对照组(孕鼠)、保产无忧散低剂量给药组(低剂量给药组)、保产无忧散高剂量给药组(高剂量给药组)三组,每组10只,另取11只未孕鼠作为正常对照组。保产无忧散煎煮滤过后浓缩为含生药1.17 g/ml和含生药0.585 g/ml。模型对照组、正常对照组均予以蒸馏水灌胃,保产无忧散低剂量给药组(0.585 g/ml)、高剂量给药组(1.17 g/ml)孕鼠于妊娠第16天开始给药,1次/d,均按1 ml/100 g体重灌胃给药。所有动物连续灌胃5 d。采用酶联免疫吸附剂法(ELISA)测定大鼠子宫体Cx-43含量及子宫前列腺素E 2(PEG 2)、宫颈白介素-8(IL-8)以及宫颈基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1),采用免疫组化法检测子宫体Cx-43阳性表达强度。结果:与正常对照组比较,模型对照组、低剂量给药组、高剂量给药组子宫Cx-43表达及子宫平滑肌中Cx-43阳性表达强度均显著升高(t=-8.593,-3.642;均P<0.01),与模型对照组比较,低剂量给药组Cx-43表达及子宫平滑肌中Cx-43阳性表达强度升高(t=-2.883,-1.950,P=0.005,0.033),高剂量给药组表达下降,差异无统计学意义(t=1.147、-0.653,P=0.133、0.261)。与正常对照组比较,模型对照组、低剂量组、高剂量组子宫组织中PEG_(2)、IL-8、MMP-9水平均显著升高(PEG_(2):t=-3.423、-6.004、-5.079,P=0.001、<0.001、<0.001;IL-8:t=-6.097、-7.995、-5.430,均P<0.001;MMP-9:t=-3.619、-6.172、-4.529,均P<0.001;TIMP-1:t=-2.522、-10.938、-10.938,P=0.011、<0.001、<0.001),与模型对照组比较,低剂量给药组子宫组织中PEG_(2)、IL-8、MMP-9、T1MP-1水平均升高(t=-2.157,-3.163,-2.671,-6.912;P=0.022,0.003,0.008,<0.001),高剂量给药组子宫组织中PEG_(2)、IL-8、MMP-9、TIMP-1水平均升高,但差异无统计学意义(t=-1.304、-0.567、-1.189、-1.610,P=0.104、0.289、0.125、0.062)。结论:低剂量保产无忧散通过提高孕晚期大鼠子宫组织中Cx-43表达及PEG_(2)、MMP-9和IL-8含量,参与并介导宫颈成熟。

退变腰椎间盘组织细胞凋亡及相关基因Fas和Bcl-2蛋白的表达

目的观察髓核组织Fas和Bcl-2蛋白的表达,探讨其在腰椎间盘退变过程可能发挥的作用。方法采用原位DNA片断末端标记(TUNEL)和免疫组织化学方法,检测20例退变腰椎间盘(退变组)及6例正常腰椎间盘(对照组)髓核组织的细胞凋亡状态及凋亡相关基因Fas和Bcl-2的表达。结果退变组及对照组髓核组织细胞凋亡指数(AI)分别为(50.23±13.36)和(28.32±6.67)(P<0.05),Fas蛋白阳性细胞百分比(74.26±10.15)%和(41.72±4.62)%(P<0.01),Bcl-2蛋白阳性细胞百分比(55.37±13.65)%和(27.17±5.17)(P<0.01)。凋亡细胞越多,Fas和Bcl-2的表达越强。结论Fas和Bcl-2蛋白均参与腰椎间盘组织中细胞凋亡的调节,可能在腰椎间盘退变中发挥重要作用。

烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响

目的探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制。方法以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用Lipofectamine;2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染pcDNA3.1)、ALKBH5-WT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组。采用比色法检测细胞中N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平。结果与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响。与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD_(450nm)值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响。结论沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性。

2型糖尿病视网膜病变患者血清ZAG、Egr-1、CMKLR1水平与糖脂代谢和胰岛素抵抗的关系及其影响因素

目的分析2型糖尿病视网膜病变(DR)患者血清锌a2糖蛋白(ZAG)、早期生长反应基因1(Egr-1)、趋化因子样受体1(CMKLR1)水平与糖脂代谢和胰岛素抵抗(IR)的关系及其影响因素。方法选取2017年6月至2020年3月期间汉中市人民医院眼科收治的2型糖尿病患者227例作为研究对象,其中DR患者93例(DR组),非DR患者134例(n-DR组),另取同期于我院接受体检的健康志愿者70例为对照组。比较三组受检者的基线资料、血清学指标,采用Pearson相关分析血清ZAG、Egr-1、CMKLR1水平与糖脂代谢和IR的关系,多因素Logistic回归分析发生DR的影响因素。结果三组受检者的收缩压(SBP)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血清ZAG、Egr-1、CMKLR1水平比较差异均具有统计学意义(P<0.05),其中n-DR组、DR组患者的SBP、FBG、HbA1c、HOMA-IR、血清Egr-1、CMKLR1水平明显高于对照组,DR组患者的SBP明显高于n-DR组,n-DR组、DR组患者的血清ZAG水平明显低于对照组,且DR组血清ZAG水平明显低于n-DR组,差异均具有统计学意义(P<0.05);DR组病程为(7.85±1.97)年,明显长于n-DR组的(3.12±0.86)年,差异具有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关分析结果显示,血清ZAG与FBG、HbA1c、HOMA-IR呈负相关(P<0.05);血清Egr-1与FBG、HbA1c、HOMA-IR呈正相关(P<0.05),血清CMKLR1与FBG、HbA1c、HOMA-IR、FINS呈正相关(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,病程、HbA1c、ZAG、Egr-1、CMKLR1是DR的独立影响因素(P<0.05)。结论2型糖尿病DR患者血清Egr-1、CMKLR1水平升高,血清ZAG水平降低,其与糖代谢紊乱和IR具有显著相关性,是DR发生发展的独立影响因素。

HSV-2病毒gD基因的扩增和测序

目的:确定单纯疱疹病毒-2型(HSV-2)糖蛋白D的基因序列。方法:从3位生殖器疱疹患者中分离出3株HSV-2,提取标本中病毒DNA,通过PCR扩增gD基因并进行测序,用CLUSTALW排序软件和GENEDOC32软件进行分析。结果:样品1:有4个碱基发生突变,碱基序列的一致性为99.66%,并引起了4个氨基酸发生突变,氨基酸序列的一致性为99.24%。样品6:有1个碱基发生突变,碱基序列的一致性为99.92%,并引起了1个氨基酸发生突变,氨基酸序列的一致性为99.75%。样品8:有1个碱基发生突变,碱基序列的一致性为99.92%,并引起了1个氨基酸发生突变,氨基酸序列的一致性为99.75%。结论:三株野生株的gD基因序列与已公布的序列基本一致,说明HSV-2型的gD基因具有较强的保守性,可成为HSV-2型基因疫苗的侯选抗原。

Cox-2在乳腺癌多药耐药中的作用及其与P-gp、MRP1的关系

目的通过检测环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,Cox-2)抑制剂尼美舒利(nimesulide)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的对化疗药物敏感性及其对P-gp、MRP1表达的影响,探讨Cox-2在乳腺癌细胞肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)中的作用及其作用机制。方法 (1)MTT法检测丝裂霉素(MMC)及其与不同浓度Cox-2抑制剂nimesulide联合作用对MDA-MB-231的抑制作用(IC50);(2)流式细胞术检测不同浓度nimesulide作用后,细胞凋亡率的变化及Cox-2、P-gp、MRP1的表达情况。结果 (1)以25、50μmol/L的nimesulide与MMC联合作用,MDA-MB-231细胞的IC50值(5.89±0.66、3.31±0.30)小于MMC单独作用的IC50值(8.59±1.16)且呈剂量依赖性,差异有统计学意义;(2)nimesulide可诱导细胞凋亡,且随着浓度的增加,凋亡率也随之增加(0.13±0.15至29.2±0.95),差异有统计学意义;(3)25、50μmol/L nimesulide作用于MDA-MB-231细胞后,Cox-2、P-gp、MRP1的表达值均下降。结论 nimesulide能增加乳腺癌细胞株MDA-MB-231对化疗的敏感性,诱导细胞凋亡;Cox-2参与肿瘤多药耐药(MDR),且可能通过影响P-gp、MRP1的表达来实现。