脱脂羊脑蛋白水解多肽的分离纯化及抗氧化活性

为制备羊脑蛋白抗氧化肽,本实验对脱脂羊脑蛋白含量及氨基酸组成进行了分析;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对枯草芽孢杆菌中性蛋白酶不同酶解时间的酶解液分子质量进行了分析;采用交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25和Sephadex G-15对羊脑酶解产物进行了逐级分离纯化,以羟自由基(·OH)和亚硝酸根离子清除能力为指标对分离组分进行抗氧活性评价,并对纯化后的组分抗氧化活性进行了测定。结果表明,脱脂羊脑粉中蛋白含量为60.55%,在测定的17种氨基酸中,谷氨酸和天冬氨酸这两种酸性氨基酸含量最高,且含有7种必需氨基酸;羊脑蛋白经酶解后,分子质量集中在10 k D以下;经Sephadex G-25纯化后,得到了6个组分,其中组分F4的抗氧化活性最强,组分F4经Sephadex G-15纯化后,得到3个组分,其中组分F4-2的抗氧化活性最强,组分F4-2对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、·OH、超氧阴离子自由基(O_2^-·)、亚硝酸根离子的半数抑制率IC_(50)分别为1.64、2.47、7.98、5.14 mg/m L。

脱脂羊脑蛋白酶解条件优化及酶解产物体外抗氧化活性

以脱脂羊脑蛋白为原料,采用响应面(response surface method,RSM)法建立脱脂羊脑蛋白的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶水解回归模型,优化酶解工艺条件,在体外研究脱脂羊脑中性蛋白酶酶解产物的抗氧化性能。结果表明:脱脂羊脑蛋白底物质量浓度为3.03 g/100 mL,酶添加量为5 653.20 U/g,温度为39.4 ℃时,脱脂羊脑蛋白水解度最高,达到(14.59±1.26)%。当脱脂羊脑蛋白水解度为(14.39±1.17)%时,酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟自由基(?OH)清除能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为(12.48±0.71)%时 ,酶解产物对超氧阴离子自由基(O2-?)清除能力和总还原能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为(12.48±0.71)%时,酶解产物对DPPH自由基、?OH、O2-?、亚硝酸根阴离子的IC50分别2.49、3.13、10.37、10.89 mg/mL,酶解产物对Fe2+螯合率的IC50为7.48 mg/mL,证明脱脂羊脑蛋白酶解产物具有一定抗氧化活性。