靶向抗TIGIT和PVRIG双特异抗体的制备及体外生物性活性的研究

目的制备靶向抗T细胞免疫球蛋白-ITIM结构域蛋白(T cell immune receptor with Ig and ITIM domains,TIGIT)和脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域蛋白(Poliovirus receptor-related immunoglobin domain-containing protein,PVRIG)双特异抗体,探究其体外生物学活性。方法用PVRIG人源化抗体hP1和TIGIT人源化抗体hT1构建KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV双特异性抗体,将纯化得到KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体进行SDS-PAGE凝胶电泳、热稳定性检测和稳定性分析;采用流式细胞术(Fluorescence activated cell sorting,FACS)检测双特异性抗体的结合活性;采用生物干涉膜技术(Bio-layer interferometry,BLI)检测双特异性抗体亲和力;用Jurkat-NFAT-Luc2-PD1-TIGIT-PVRIG细胞和293T-OS8-PVRL2-PDL1细胞中检测双特异性抗体KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV对于TIGIT/PVRIG靶点的阻断作用;采用CMV recall assay法检测IFN-r在上清液中的浓度。结果SDS-PAGE凝胶电泳结果显示KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV双特异性抗体纯度>95%;Tm结果为Tm1:66.34,Tm2:80.95。采用SEC-HPLC对双特异性抗体KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV进行稳定性分析,其纯度均>90%。KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体和PVRIG的人源化抗体hP1与293T-PVRIG cell line的EC 50分别为0.16870μg/mL和0.03865μg/mL,与293T-cyno-PVRIG cell line的EC 50分别为0.03714μg/mL和0.03198μg/mL,与Human PVRIG Protein,His Tag的亲和力为1.74E-10M和1.69E-10M。KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体和TIGIT的人源化抗体hT1与293T-PVRIG cell line的EC 50分别为0.07027μg/mL和0.03121μg/mL;与293T-cyno-TIGIT cell line的EC 50分别为0.02028μg/mL和0.02822μg/mL;与Human TIGIT Protein,His Tag的亲和力为8.50E-10M和8.47E-10M。KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体具有阻断PD1/PDL1/TIGIT/PVRIG相互作用活性,且KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV的EC 50为0.007μg/mL,优于单独人源化抗体hT1(EC 50为0.013μg/mL)和hP1(EC 50为0.048μg/mL)的作用。在含pp65 peptide条件下KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体分泌IFN-r为349.72 pg/mL,明显高于其他抗体。结论KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体具有高亲和力和良好的生物学活性,有望开发成为肿瘤免疫治疗的抗体药物。

帕妥珠单抗联合含蒽环类化疗方案新辅助治疗HER2阳性乳腺癌的获益与安全性

目的 探究帕妥珠单抗联合含蒽环类化疗方案新辅助治疗人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌的获益与安全性。方法 前瞻性选取2021年5月至2022年5月在运城市中心医院进行治疗的HER2阳性乳腺癌患者486例纳入本研究,按照随机数字表法将患者分为对照组(n=243)和研究组(n=243)。对照组接受传统含蒽环类化疗方案,研究组接受帕妥珠单抗联合含蒽环类化疗方案新辅助化疗,两组化疗后均接受手术治疗。比较两组疗效,检测并记录两组治疗前后肿瘤标志物[癌胚抗原、癌抗原(CA)125、CA153]水平,并记录两组不良反应发生情况和预后情况。结果 研究组的治疗总有效率为90.12%,高于对照组(76.15%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的癌胚抗原、CA125、CA153水平均较治疗前有所下降,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组的癌胚抗原水平为(1.89±0.78) pg/mL,低于对照组[(1.89±0.78) pg/mL],差异有统计学意义(P<0.05),但两组间的CA125、CA153水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组不良反应发生情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组的复发率、转移率、病死率及总预后不良率分别为4.94%、6.58%、10.70%、22.22%,均低于对照组(10.29%、13.58%、22.63%、46.50%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 帕妥珠单抗联合含蒽环类化疗方案新辅助治疗HER2阳性乳腺癌患者是一种有效、安全的治疗方案。其可提高治疗有效率,且不会给患者带来额外的不良反应,改善患者的预后情况。

风湿性多肌痛误诊为类风湿关节炎六例临床分析

目的 探讨风湿性多肌痛(PMR)的临床特点及误诊原因和防范措施。方法 回顾性分析2020年3月—2023年3月收治的被误诊为类风湿关节炎(RA)PMR 6例的临床资料。结果 本组4例无诱因出现多处外周关节轻微疼痛持续1个月~1.5年,疼痛加剧3 d;2例肩颈部肌肉僵痛,全身关节痛,并伴发热症状。6例均误诊为RA,误诊时间9 d~6个月。给予相应治疗后效果不佳,进一步完善相关检查,磁共振发现患者疼痛处无侵袭或破坏性病变,查抗环瓜氨酸肽抗体阴性,使用小剂量糖皮质激素治疗有效。详细询问家族史,并结合疼痛部位的特点及检查、试验治疗结果,最终确诊为PMR。给予小剂量糖皮质激素联合非甾体抗炎药或不同的免疫抑制剂治疗,症状消失后减量维持治疗,效果较好。结论 PMR临床表现多样化,缺少特异性实验检查指标,极其容易误诊为RA。临床医师需加强对该病的鉴别诊断能力,及时完善相关检查,减少PMR误诊或漏诊。

基于肠道炎症反应研究降糖3号方抗糖尿病的作用机制

目的:观察降糖3号方对2型糖尿病小鼠肠道炎症相关指标的影响,揭示其抗糖尿病的作用机制。方法:选取4周龄C57BL/6N雄性小鼠,高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素(STZ)注射构建2型糖尿病小鼠模型,采用随机数字表法将成模小鼠分成模型组、二甲双胍组、降糖3号方组,每组8只。选取8只标准饲料喂养的小鼠作为正常组。药物干预8周结束后,应用细胞因子抗体芯片技术检测小鼠结肠组织中多种炎症介质水平,并进行差异表达蛋白筛选、基因本体(GO)蛋白功能、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析。蛋白质印迹法检测各组小鼠结肠组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活与肠道黏膜屏障相关的因子G蛋白偶联受体43(GPR43)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶(Caspase-1)以及闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)的蛋白表达水平。结果:各组间肠道炎症介质差异明显,与模型组比较,降糖3号方组IL-1β、IL-6等炎症介质表达下降,降糖3号方可上调结肠组织中ZO-1、Occludin、GPR43蛋白表达水平,降低ASC、Caspase-1蛋白表达水平(P<0.05)。结论:2型糖尿病小鼠结肠炎症反应明显,降糖3号方能够有效抑制2型糖尿病小鼠肠道炎症,其作用可能与调控NLRP3炎症小体,进而影响下游炎症介质有关。

兔抗小鼠卷曲螺旋结构域蛋白189(Ccdc189)多克隆抗体的制备与鉴定

目的制备兔抗小鼠卷曲螺旋结构域蛋白189(Ccdc189)多克隆抗体。方法构建pET⁃28a⁃Ccdc189原核表达质粒。将重组质粒转化入大肠杆菌E.coli BL21中,异丙基⁃β⁃D⁃硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导Ccdc189原核蛋白表达。将纯化的重组蛋白免疫成年雄性新西兰大白兔,获得兔抗小鼠Ccdc189多克隆抗体。Western blot法、间接ELISA及免疫荧光组织化学染色分析鉴定多克隆抗体特异性。结果成功构建pET⁃28a⁃Ccdc189重组质粒并诱导Ccdc189重组蛋白表达。ELISA检测多克隆抗体效价为1∶1000000,Western blot法及免疫荧光组织化学染色显示Ccdc189多克隆抗体能特异性识别Ccdc189原核蛋白及成年野生型小鼠睾丸组织中的Ccdc189蛋白。结论成功制备了特异性强的兔抗小鼠Ccdc189多克隆抗体。

兔抗小鼠含IQ基序及泛素结构域蛋白(IQUB)多克隆抗体的制备和应用

目的 制备兔抗小鼠含IQ基序及泛素结构域蛋白(IQUB)多克隆抗体并检测IQUB在小鼠睾丸中的表达情况。方法将IQUB蛋白编码序列全长插入pET-30a(+)载体,构建pET-30a-IQUB原核表达质粒。将原核表达质粒转化入大肠杆菌BL21中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。利用组氨酸融合蛋白纯化柱纯化蛋白,使用梯度浓度的尿素复性原核蛋白。蛋白复性后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。免疫完成后ELISA测定多克隆抗体效价,应用Western blot及免疫荧光染色分析多克隆抗体的有效性与特异性。结果 成功构建了pET-30a-IQUB重组质粒,并通过IPTG诱导成功表达了原核蛋白。ELISA检测多克隆抗体效价达到1∶1 000 000,制备的多克隆抗体能识别成年野生型小鼠睾丸组织中的内源性IQUB蛋白,IQUB在成年小鼠睾丸的各级生精细胞表达,在成熟精子中定位于顶体及鞭毛。结论 成功制备出高特异性的兔抗小鼠IQUB多克隆抗体,可用于Western blot及免疫荧光组织化学染色。

玻璃内包材界面修饰对机械应力诱导的单克隆抗体聚集体形成的影响

利用十八烷基三氯硅烷(octadecyltrichlorosilane,OTS)对中硼硅玻璃管制注射剂瓶内表面进行化学改性,使用接触角仪(水接触角从50°±1°增加至90°±2°)、原子力显微镜(表面粗糙度从0.448±0.086增加至1.282±0.117)、红外(出现—CH_(2)—和—CH_(3)特征峰)对表面进行验证,成功制备了具有疏水性能的玻璃表面。给玻璃瓶中的单克隆抗体施加机械应力,使用微流成像技术、尺寸排阻-高效液相色谱法(size exclusion-high performance liquid chromatography,SE-HPLC)、外源荧光对单抗制剂的稳定性进行全面表征。结果表明,OTS处理的疏水性界面可以减少机械应力诱导的蛋白质聚集体的产生。由于疏水表面与蛋白质强的疏水相互作用,OTS处理的疏水表面可有效抑制机械应力诱导的抗体分子的聚集。

兔抗小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)多克隆抗体制备和应用

目的在大肠杆菌表达小鼠含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶)8(Setd8)蛋白并制备兔抗Setd8多克隆抗体。方法将p GADT7-Setd8质粒和p ET-30a载体分别双酶切后连接、转化和鉴定,构建p ET-30a-Setd8原核表达质粒。将p ET-30a-Setd8质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过镍亲和层析柱进行蛋白纯化。应用纯化的Setd8蛋白免疫新西兰大白兔,获得Setd8多克隆抗体。利用ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色法对所得多克隆抗体进行效价测定及特异性鉴定。结果应用限制性内切酶双酶切后电泳及序列测定法,成功构建的p ET-30a-Setd8重组质粒在大肠杆菌中IPTG诱导下能够高效表达重组Setd8蛋白。免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶1 000 000,Western blot法结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别细胞和组织中的Setd8蛋白,免疫组织化学染色法显示多克隆抗体识别的Setd8主要表达于成年小鼠睾丸组织中的精原细胞。结论成功获得较高纯度Setd8蛋白,制备的Setd8多克隆抗体具有较高反应性和特异性。

含胆囊收缩素抗体卵黄粉对断奶仔猪生产性能及养分消化率的影响

本试验旨在研究含胆囊收缩素(CCK)抗体卵黄粉对断奶仔猪生产性能、日粮养分消化率及血清CCK浓度的影响。90头(30±2)日龄断奶约克仔猪[平均体重(7.05±0.20)kg]随机分为5个处理,分别饲喂基础日粮和基础日粮中添加100、200、300mg/kg和400mg/kg含CCK抗体卵黄粉的试验日粮,每个处理6个重复,每个重复3头仔猪。试验期28d。结果表明,与基础日粮组相比,添加含CCK抗体卵黄粉可提高仔猪全期平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI),降低料肉比(F/G),其中200mg/kg组ADG提高12.14%(P>0.05),ADFI提高6.92%(P>0.05),F/G降低4.62%(P>0.05)。同时,日粮粗蛋白质消化率随含CCK抗体卵黄粉添加量的增加呈二次曲线变化(P=0.044)。添加含CCK抗体卵黄粉后,仔猪血清CCK浓度下降,200mg/kg组降低35.6%(P>0.05)。综合来看,添加200mg/kg含CCK抗体卵黄粉组效果最好。

新城疫含硒油佐剂疫苗增强肉鸡免疫效果的研究

以新城疫ＬａＳｏｔａ系疫苗滴鼻，采用自制的含１５×１０－６亚硒酸钠新城疫油佐剂疫苗给４０只５日龄ＡＡ肉鸡颈部皮下接种，于１５、２５、３５、４５日龄时分别抽取１０只进行称重和测定血硒含量、Ｈｌ抗体水平。结果表明，新城疫含硒油佐剂疫苗接种肉鸡的增重、血硒含量及ＨＩ抗体水平均高于非含硒新城疫油佐剂疫苗接种鸡（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。

丹寿汤含药血清对抗心磷脂抗体引起的内皮细胞损伤的影响

目的探讨丹寿汤含药血清对抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody, aCL)致人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)损伤的影响及作用机制。方法制备丹寿汤大鼠含药血清,将HUVEC为5组:空白血清对照组、损伤模型组、低浓度含药血清处理组、中浓度含药血清处理组、高浓度含药血清处理组。10%含药血清预处理24 h后,加入aCL诱导建立细胞模型。细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)分析各组细胞的增殖能力,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4, TLR4)、髓样分化因子88(mydoid differentiation factor88, MyD88)、胞核p65的表达,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测各组细胞上清液中白细胞介素1β(interleukin1β, IL-1β)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF-α)、白细胞介素6(interleukin6, IL-6)表达水平,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)结合Western Blot检测组织因子(tissue factor, TF)、血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesionmolecule-1, VCAM-1)。结果丹寿汤含药血清可抑制aCL引起的细胞活力下降,抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路活性,抑制炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α释放,降低TF、VCAM-1 mRNA和蛋白表达。结论丹寿汤含药血清对aCL所致HUVEC损伤的保护作用可能与其抗炎及抗黏附作用有关。

含Hp特异性抗体羊奶2种检测方法的比较及初步临床效果

目的比较含抗Hp特异性抗体羊奶的2种检测方法,并初步观察抗体羊奶的临床效果。方法用国际标准菌株ATCC26695及ATCC26695、SS1混合菌液制备2种含抗Hp特异性抗体的羊奶,分别用双相免疫扩散试验及酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测羊奶中抗Hp特异性抗体含量,并比较二者检测效果;30名受试者按照随机抽样法分为试验组和对照组,试验组每天饮用抗体羊奶,对照组饮用普通羊奶,连续饮用30 d,用14 C尿素呼气试验(14 C urea breath test,14 C-UBT)评估效果。结果2种方法检测结果均证实了抗体羊奶中抗Hp特异性抗体的存在,ELISA结果显示,2种抗体羊奶中抗Hp特异性抗体含量高于对照孔,差异有统计学意义(P<0.05),且随着稀释倍数增大,抗体含量逐渐降低;2种抗体羊奶间抗体含量差异无统计学意义(P>0.05)。初步临床试验证明试验组经服用抗体羊奶后有效率为66.6%,与服用前比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论2种检测方法均可较好地反映抗体羊奶中抗Hp特异性抗体存在,ELISA法简便、快速,能够更为精确地定量检测抗体含量,所获得的结果更为可靠。临床试验表明抗体羊奶能够有效降低患者14 C-UBT数值,具有良好的临床应用前景。

具有cGPX活力的含硒抗体酶的酶学及动力学性质研究

通过单克隆抗体制备技术得到三株特异结合半抗原 4 ( GSH-S-DNP二苄酯 )的单克隆抗体 HB4 ,HB5和 HB7.抗体经两步化学诱变得到具有细胞谷胱甘肽过氧化物酶 ( c GPX)活性的含硒抗体酶 m HB4 ,m HB5和 m HB7,活力分别为 1 70 ,1 867,32 U/μmol.其中 m HB5的活力是天然兔肝 c GPX的 0 .32倍 ,m 4 A4的1 .51倍 .等离子体 -质谱 ( ICP/MS)测得每分子含硒抗体酶分子中大约存在 2个硒原子 .m HB5的最适 p H为8.6～ 8.8.在 p H值范围为 7.0和 37℃条件下 ,m HB5催化 GSH和 H2 O2 或 t-ROOH反应的二级速率常数为 :k+ 1 ( H2 O2 ) 9.71× 1 0 6 L /( mol· min) ,k+ 1 ( t-ROOH) 5.99× 1 0 5 L/( mol· min) . m HB5使非酶催化反应速率提高了 9.8× 1 0 6和 3.7× 1 0 5倍 .

基于结合能量模型的往复泵泵阀故障诊断研究

基于生物免疫系统抗原与抗体互识别的结合能量模型,结合矩阵的奇异值分解,研究了适于三缸往复泵夏阀故障诊断的新方法.通过对三缸往复泵泵阀实际故障的诊断分析,表明基于结合能量的故障诊断方法具有较强的容错性和鲁棒性,并具有可视化及可解释性好等特点。

含CCK抗体卵黄粉和丙谷胺对生长猪生产性能、养分消化率和内分泌激素的影响

采用单因子试验设计,将30头体重(34.93±2.46)kg的DLY生长猪随机分为5个处理,研究饲粮添加不同水平丙谷胺和含CCK抗体卵黄粉对生长猪生产性能、养分消化率和内分泌激素的影响。5个处理分别为对照组(C)、C+含CCK抗体卵黄粉400mg/kg、C+含CCK抗体卵黄粉800mg/kg、C+丙谷胺500mg/kg和C+丙谷胺1000mg/kg。结果表明:添加CCK抗体卵黄粉400mg/kg组试猪全期日增重(ADG)提高11.10%(P>0.05),饲料增重比(F/G)降低8.33%(P>0.05)。丙谷胺500mg/kg组全期ADG提高6.02%(P>0.05),F/G降低7.54%(P>0.05),同时饲粮干物质、有机物和粗蛋白质的消化率显著改善(P<0.05)。添加含CCK抗体卵黄粉或丙谷胺均有降低试猪第1周末采食前后及试验结束时血清尿素氮含量的趋势。同时,添加含CCK抗体卵黄粉有降低试猪第1周末采食前后血清CCK浓度的趋势。含CCK抗体卵黄粉或丙谷胺对血清瘦素和胰岛素含量均无显著影响。

小鼠KCTD10特异性抗体制备及其在小鼠背神经上皮和背根神经节中的表达

KCTD10蛋白是一个TNF-α诱导表达的蛋白,能与DNA聚合酶δ的小亚基和PCNA相互作用。但其具体功能尚不清楚。为了研究KCTD10的功能,用小鼠KCTD10融合蛋白免疫新西兰大白兔获得兔抗鼠KCTD10多克隆抗体。由于小鼠KCTD10蛋白与小鼠PDIP1蛋白和TNFAIP1蛋白有较高的蛋白序列相似性,KCTD10抗体同PDIP1蛋白、TNFAIP1蛋白有抗体交叉反应。将同源蛋白PDIP1和TNFAIP1的部分降解片段与抗KCTD10血清在4℃下孵育3h从而消除非特异性抗体,成功地消除了KCTD10多克隆抗体对PDIP1蛋白和TNFAIP1蛋白的交叉反应。用此抗体做小鼠胚胎及胚胎切片的免疫组化,发现KCTD10蛋白在E12.5d的小鼠胚胎背根神经节以及神经管神经上皮中有明显的表达。该结果提示KCTD10可能在小鼠的神经管神经上皮和背根神经节发育中发挥作用。

含MYND结构域的锌指蛋白10的原核表达及其多克隆抗体的制备

目的表达纯化含MYND结构域的锌指蛋白10(ZMYND10)的重组蛋白并制备其大鼠多克隆抗体。方法全基因合成ZMYND10基因的开放阅读框,构建原核表达载体p ET-28m-ZMYND10。在大肠杆菌中诱导表达HisZMYND10,利用His标签镍柱纯化His-ZMYND10重组蛋白,并用泛素样蛋白酶1除去重组蛋白的His标签。用纯化蛋白免疫大鼠,蛋白A/G混合琼脂糖纯化血清得到抗体。通过Western blot和免疫沉淀方法鉴定抗体的特异性。结果成功构建原核表达载体p ET-28m-ZMYND10,并获得可溶性表达。利用His柱得到高纯度的重组ZMYND10抗原,免疫大鼠后纯化得到的ZMYND10多克隆抗体可以检测到B16F10细胞中过表达及内源性表达的ZMYND10蛋白,并可用于免疫沉淀实验。结论本实验成功制备了ZMYND10的多克隆抗体,为后续探索ZMYND10在肿瘤细胞中的功能奠定了基础。

β_2GPI/抗β_2GPI抗体复合物激活THP-1细胞内TRIF途径

目的:观察β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能否激活单核细胞株THP-1的TRIF途径,以探讨TRIF依赖途径在抗磷脂综合征(APS)发病机制中的作用。方法:采用一定剂量β2GPI/抗β2GPI抗体复合物刺激THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA及总蛋白,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞TRIF mRNA水平,Western blot检测细胞TRIF蛋白表达情况;进一步观察TLR4途径抑制剂-TAK-242是否干预β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对TRIF的诱导表达以及相关细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的表达。结果:β2GPI/抗β2GPI抗体复合物(100 mg/L)能够诱导THP-1细胞表达TRIF(mRNA及蛋白),并显示时间效应,分别于刺激1 h和2 h时TRIF mRNA及蛋白表达至高峰。TAK-242(5μmol/L)能够明显抑制β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞TRIF的诱导表达,同时抑制IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子的表达。结论:TRIF依赖的TLR4途径参与了β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞的激活,提示其在抗磷脂综合征的病理机制中发挥一定作用。

特发性膜性肾病患者血清抗PLA2R抗体表达研究

目的分析特发性膜性肾病患者血清抗 PLA2R抗体的表达，探讨其在特发性膜性肾病诊断及病情评估中的价值。方法收集经肾活检确诊的118例肾小球疾病患者，其中包括97例 IMN和21例 IgA肾病与19例健康体检者作为研究对象，应用 ELISA法检测血清抗 M型磷脂酶 A2受体（PLA2R）抗体表达水平，并分析其与 IMN患者血清清蛋白，24 h尿蛋白量等指标的相关性。结果 IMN组，IgA肾病组及健康体检组血清抗 PLA2R抗体含量中位数分别为45.2（3.6～705.9）RU／ml，5.9（2.3～10.6）RU／ml和1.2（0.6～9.3）RU／ml，IMN组血清抗PLA2R抗体含量高于 IgA肾病组及健康体检组，差异有统计学意义（t＝－5.027，－3.077；P均＜0.05）；97例 IMN患者中76例血清抗PLA2R抗体阳性，阳性率为78.35％，IgA肾病组与健康体检组均未检出阳性样本。IMN组患者血清抗PLA2R抗体与血清清蛋白呈负相关（r＝－0.453，P＜0.05）；与肌酐、胆固醇、红细胞沉降率、24 h尿蛋白呈正相关（r＝0.233，0.234，0.363，0.586；P 均＜0.05）。结论血清抗PLA2R抗体可作为 IMN特异性标志物用于 IMN的血清学诊断，并对评估 IMN患者病情的严重程度有重要参考意义。

PLA2R、THSD7A与IgG亚型在特发性膜性肾病中的诊断价值

目的探讨特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)患者血清抗磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)抗体水平、肾小球PLA2R、1型血小板反应蛋白7A域(thrombospondin type I domain containing 7A,THSD7A)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)亚型的表达及其在IMN中的诊断价值。方法选取2016年1月至2019年6月在雅安市人民医院肾内科经肾活检并确诊的IMN患者72例,以同期72例非IMN肾小球疾病患者为对照。采用酶联免疫吸附法检测血清抗PLA2R抗体滴度,免疫荧光法检测肾小球PLA2R、THSD7A及IgG亚型表达。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清抗PLA2R抗体、肾小球PLA2R、THSD7A、IgG4诊断IMN的价值。结果血清抗PLA2R抗体、肾小球PLA2R、IgG4、THSD7A诊断IMN的灵敏度分别为61.11%、80.56%、97.22%、8.33%,特异度分别为97.22%、100.00%、97.22%、100.00%。血清抗PLA2R抗体和肾小球PLA2R任一指标阳性即诊断IMN的敏感性为83.33%;肾小球PLA2R、THSD7A和IgG4中任一指标阳性即诊断IMN的敏感性为97.22%。结论血清抗PLA2R抗体、肾小球PLA2R、THSD7A及IgG4亚型对于IMN诊断具有较高的临床价值。血清抗PLA2R抗体及肾小球PLA2R抗原的联合检测,肾小球PLA2R、THSD7A与IgG4的联合检测可以增加IMN诊断的敏感性。