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In situ Synthesis of Oligonucleotide and Detection of Gold-label-silver-stain on PTFE Slices
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作者 谭美军 汤建新 陈洪 《Chinese Journal of Chemistry》 SCIE CAS CSCD 2005年第9期1247-1252,共6页
Poly(tetrafluoroethylene) (PTFE) was treated with plasma in a mixture of nitrogen and hydrogen (1 : 2 in volume). X-ray photoelectron spectroscopy (XPS) demonstrated the success of amino group grafting. The a... Poly(tetrafluoroethylene) (PTFE) was treated with plasma in a mixture of nitrogen and hydrogen (1 : 2 in volume). X-ray photoelectron spectroscopy (XPS) demonstrated the success of amino group grafting. The as-treated PTFE slices were successively applied to the in situ synthesis of oligonucleotides. With the detection of gold-label-silver-stain, the hybridization signals were recorded with a gel document and analysis system. A target DNA concentration as low as 10 pmol/L could be detected. The complementary and mismatched sequences were distinguished clearly, and the ratio of background-subtracted gray scale values for perfect match : 1 base mismatch : 2 base mismatch : 3 base mismatch was 72 : 44.4 : 22.5 : 11.4. The sensitivity of in situ synthesis system was 1 order of magnitude higher than that of spotting system, and the signal of the former was about 1.5 times stronger than that of the latter under the same target DNA concentration. These plasma modified PTFE slices might open novel prospects for the in situ synthesis of DNA micro-arrays. 展开更多
关键词 OLIGONUCLEOTIDE gold-label-silver-stain in situ synthesis plasma poly(tetrafluoroethylene)
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金电极上自组装巯基DNA生物传感器的研究 被引量:2
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作者 江南 谭晓风 +3 位作者 王秀利 许利剑 曾晓希 李福枝 《分析科学学报》 CAS CSCD 2008年第2期193-196,共4页
本文在金电极上自组装单链巯基DNA,制备能识别正错配的简单DNA生物传感器,采用金标银染和线性扫描阳极溶出法对制备工艺条件和识别能力进行了研究,确定最佳制备工艺条件为:巯基DNA自组装时间为6 h,采用巯基己醇封闭时间为3 h,正错配DNA... 本文在金电极上自组装单链巯基DNA,制备能识别正错配的简单DNA生物传感器,采用金标银染和线性扫描阳极溶出法对制备工艺条件和识别能力进行了研究,确定最佳制备工艺条件为:巯基DNA自组装时间为6 h,采用巯基己醇封闭时间为3 h,正错配DNA表现出不同的检测信号,制得的DNA生物传感器具有快速、准确的识别能力。 展开更多
关键词 生物传感器 金标银染 自组装
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玻碳电极上的自组装APMDES制备电化学生物传感器 被引量:1
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作者 何农跃 许利剑 杜晶晶 《湖南工业大学学报》 2008年第2期59-62,共4页
在玻碳电极表面自组装氨丙基甲基二乙氧基硅烷(APMDES)单分子膜,从而使玻碳电极上修饰了-NH2基团,用于检测低浓度小牛血清蛋白,采用金标银染的方法,对修饰电极检测蛋白的能力和自组装膜的致密性进行了研究。试验结果表明:自组装膜的致... 在玻碳电极表面自组装氨丙基甲基二乙氧基硅烷(APMDES)单分子膜,从而使玻碳电极上修饰了-NH2基团,用于检测低浓度小牛血清蛋白,采用金标银染的方法,对修饰电极检测蛋白的能力和自组装膜的致密性进行了研究。试验结果表明:自组装膜的致密性主要受组装液浓度、组装时间和温度的影响。当APMDES在乙醇溶液中的体积分数为3%,组装时间为4 h、温度为30℃时,组装膜成膜状况较为理想。在最佳试验条件下,修饰上氨基的玻碳电极对检测质量浓度为0.5~0.05 ng/mL的小牛血清蛋白有良好的响应,回归线性方程为:I(μΑ)=0.825 4+1.431 9×C(ng/mL),R=0.958,检测极限为0.02 ng/mL,背景电流信号小于2.0×10-7A,检测的信噪比达到最佳。 展开更多
关键词 自组装单分子膜 阳极溶出伏安法 金标银染
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银增强共振光散射法测定神经元特异性烯醇化酶
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作者 邹明静 王娜 魏彦刚 《化学试剂》 CAS 北大核心 2018年第1期76-80,共5页
采用平均粒径约为15 nm的纳米金颗粒标记神经元特异性烯醇化酶抗体(anti-NSE)获得金标记anti-NSE,其与神经元特异性烯醇化酶(NSE)发生特异性免疫反应后生成NSE免疫金复合物,经离心分离后可获得含有金标记anti-NSE的上层清液。以上... 采用平均粒径约为15 nm的纳米金颗粒标记神经元特异性烯醇化酶抗体(anti-NSE)获得金标记anti-NSE,其与神经元特异性烯醇化酶(NSE)发生特异性免疫反应后生成NSE免疫金复合物,经离心分离后可获得含有金标记anti-NSE的上层清液。以上清液中的纳米金催化银离子还原生成金银复合纳米微粒,该复合纳米微粒在470 nm处具有较强的共振光散射信号。结果表明,NSE浓度在0.02-15.0 ng/mL范围内与共振光散射强度变化值ΔI470 nm呈现良好的线性关系,检出限为0.003 ng/mL,用于人血清中NSE的定量分析,测定结果令人满意。 展开更多
关键词 纳米金 神经元特异性烯醇化酶 金标记 银增强 共振光散射
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同时检测禽类六种病毒的金标银染可视化基因芯片的构建及初步应用
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作者 向华 杨国淋 +5 位作者 曹三杰 黄小波 伍锐 赵勤 文心田 文翼平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2698-2706,共9页
本研究旨在利用金标银染显色技术,构建同时检测禽白血病病毒(ALV)、鸡马立克病病毒(MDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的可视化基因芯片。利用T-A法分别克隆得到ALV-env、MD... 本研究旨在利用金标银染显色技术,构建同时检测禽白血病病毒(ALV)、鸡马立克病病毒(MDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的可视化基因芯片。利用T-A法分别克隆得到ALV-env、MDV-meq、IBDV-vp_2基因,并利用本实验室已保存的AIV-np、NDV-f、ILTV-tk基因序列,设计寡核苷酸探针,制备ALV-MDV-IBDV-AIV-NDV-ILTV基因芯片阵列。引入生物素标记的引物进行PCR扩增,并与芯片进行杂交银染显色,肉眼观察检测结果,并对芯片的特异性、敏感性、稳定性进行评价,以及临床初步验证。成功克隆ALV-env、MDV-meq及IBDV-vp_2共3个靶基因,测序鉴定其正确性。发现寡核苷酸探针最优使用浓度为50μmol·L^(-1),40℃条件下杂交2 h,Nanogold-Streptavidin链霉亲和素溶液的质量浓度为4μg·mL^(-1),银染5 min,可见明显的检测信号。特异性试验显示,ALV、MDV、IBDV、NDV、AIV、ILTV之间无交叉反应,且以鸡传染性支气管炎病毒为模板制备的PCR扩增标记不与ALV-MDV-IBDV-AIV-NDV-ILTV芯片杂交。芯片检测的灵敏度为1 pg·μL^(-1)。芯片在常温条件下保存60 d,在4℃条件下保存75 d仍可进行有效检测。临床病料检测结果与PCR检测结果一致。本研究成功构建同时检测ALV、MDV、IBDV、NDV、AIV和ILTV的金标银染可视化基因芯片,并确定其最佳反应条件,为临床标准化应用奠定了基础。 展开更多
关键词 家禽 病毒检测 可视化芯片 金标银染
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基于固态基底的SERS免疫检测新方法研究
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作者 贾小飞 荣振 +2 位作者 何小羊 肖瑞 王升启 《生物技术通讯》 CAS 2019年第1期98-103,共6页
目的:通过引入新型表面增强拉曼散射(SERS)检测探针(Au-DTNB-Tyr NPs)和金标银染技术,建立基于固态硅片基底的SERS免疫检测新技术。方法:羊抗人IgM-HRP作为检测抗体,在硅片基底上检测不同浓度的人IgM,HRP催化SERS检测探针沉积,利用金标... 目的:通过引入新型表面增强拉曼散射(SERS)检测探针(Au-DTNB-Tyr NPs)和金标银染技术,建立基于固态硅片基底的SERS免疫检测新技术。方法:羊抗人IgM-HRP作为检测抗体,在硅片基底上检测不同浓度的人IgM,HRP催化SERS检测探针沉积,利用金标银染技术增强SERS信号。结果:所建立的SERS免疫检测新方法检测人IgM的检测限为10 pg/mL,且SERS信号强度与人IgM浓度具有良好的线性关系(R2=0.993)。结论:基于硅片基底的SERS免疫检测新技术可高灵敏地定量检测人IgM,为实现固态硅片基底对多种抗原的高通量集成化检测奠定了基础。 展开更多
关键词 表面增强拉曼散射(SERS) 免疫检测 固态基底 SERS检测探针 金标银染
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猪腹泻病毒可视化基因芯片的两种靶基因标记技术的比较 被引量:4
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作者 马锐 文心田 +6 位作者 杨国淋 滑翔 赵玉佳 黄小波 曹三杰 文翼平 伍锐 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期409-417,共9页
本研究同时采用常规PCR和不对称PCR分别进行靶基因片段生物素标记,应用于金标银染可视化基因芯片,分析其对猪腹泻病毒可视化共检基因芯片杂交效率的影响。分别选取猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的S和M基因... 本研究同时采用常规PCR和不对称PCR分别进行靶基因片段生物素标记,应用于金标银染可视化基因芯片,分析其对猪腹泻病毒可视化共检基因芯片杂交效率的影响。分别选取猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的S和M基因,猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)的N和S基因,A型猪轮状病毒(group A porcine rotavirus,GAR)的VP7和NSP4基因设计引物。根据目的基因片段设计60-mer寡核苷酸探针,在其5′端修饰15个T碱基后,利用芯片点样仪喷样于醛基玻片上制成基因芯片。应用常规PCR和不对称PCR两种生物素标记方法,对本实验室构建保存的三种腹泻病毒的阳性质粒进行生物素掺入标记,在相同条件下与基因芯片进行杂交。利用生物素-链霉亲和素的特异性链接,将链霉亲和素修饰的纳米金颗粒引入反应体系,通过银离子染色后直接眼观试验结果。结果表明,应用此可视化共检芯片特异性好,CSFV、PRRSV、PCV2、JEV杂交结果均呈阴性。不对称PCR标记法可有效提高杂交效率,不对称PCR标记技术和常规PCR标记技术的最低检测浓度分别为10^5copies/L和10^7copies/L,前者的灵敏性是后者的10~100倍。应用不对称PCR标记技术对样品进行生物素标记后,可明显提高腹泻病毒可视化共检芯片的杂交效率,有利于检测型可视化基因芯片的应用。 展开更多
关键词 猪病毒性腹泻 基因芯片 金标银染 常规PCR 不对称PCR 杂交效率
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基于酪胺信号放大和金标银染的致病菌生物芯片检测方法的灵敏度评价研究 被引量:4
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作者 陆琳 车志军 +2 位作者 孙福军 杨秀娟 刘国传 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2012年第6期365-368,共4页
目的对基于酪胺信号放大和金标银染技术的致病菌可视化生物芯片检测方法进行评价。方法以伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌作为检测对象,建立生物芯片的TSA-金标银染高灵敏度可视化检测技术,优化试剂浓度、反应温度、温育及银染时间等检测条件... 目的对基于酪胺信号放大和金标银染技术的致病菌可视化生物芯片检测方法进行评价。方法以伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌作为检测对象,建立生物芯片的TSA-金标银染高灵敏度可视化检测技术,优化试剂浓度、反应温度、温育及银染时间等检测条件,比较了TSA-金标银染与单独金标银染、TSA-金标银染与TSA-荧光的检测灵敏度。并对进口水产品样品进行了伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌的应用检测。结果检测条件优化结果为:Streptavidin-HRP稀释比例为1:1 500,Biotin-Tyramine稀释比例为1:200+0.5%H2O2,Streptavidin-Nanogold稀释比例为1:100;温育温度37℃,温育时间20 min,银染显色时间8~10 min。TSA-金标银染比单独金标银染的检测灵敏度提高10~100倍,与TSA-荧光的检测灵敏度相同,达到103CFU/ml。检测进出口水产品样品伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌结果与SN标准方法检测结果一致。结论基于酪胺信号放大和金标银染技术的致病菌可视化生物芯片检测方法,为致病菌低成本快速检测提供了新思路。 展开更多
关键词 致病菌 酪胺信号放大 金标银染 生物芯片
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Ultrasensitive electrochemical immunosensor of carcinoembryonic antigen based on gold-label silver-stain signal amplification
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作者 Gaojian Yang Yuxuan Lai +2 位作者 Ziqi Xiao Congli Tang Yan Deng 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2018年第12期1857-1860,共4页
A novel gold-label silver-stain electrochemical immunosensor was developed based on polythioninegold nanoparticles(PTh-Au) modified glassy carbon electrode(GCE) as a platform and secondary antibody labeled Au NPs... A novel gold-label silver-stain electrochemical immunosensor was developed based on polythioninegold nanoparticles(PTh-Au) modified glassy carbon electrode(GCE) as a platform and secondary antibody labeled Au NPs(Ab;-Au) as immumoprobe for carcinoembryonic antigen(CEA) detection. The sandwich-type biosensor adopted anodic stripping voltammetry to detect silver stripping signal when the Ab;-Au of the formed immunocomplexes were stained with silver. The optimized detection conditions were investigated. The effect of different electrochemical responses at various concentrations of CEA was checked by anodic stripping voltammetry. This immunosensor showed a low detection limit of 0.055 ng/mL and a wide linear calibration of 0.1-120 ng/mL(R;=0.99856). Moreover, this immunoassay also existed the advantages of good reproducibility, stability and selectivity. Thus, this immunosensing protocol may provide a potential application for effective clinical detection of CEA. 展开更多
关键词 Gold-label silver-stain Carcinoembryonic antigen Sandwich-type immunoassay Electrochemical immunosensor Anodic stripping voltammetry
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