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Effects of Duck Tembusu Virus on Serum Biochemical Indexes, Cytokines and Viral Replication of Ducklings
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作者 曹宗喜 谭树义 +3 位作者 贺冬梅 顾丽红 林哲敏 叶保国 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2017年第8期1428-1431,1547,共5页
In order to understand the pathogenicity of duck Tembusu virus (DTMUV), it was injected into muscle of 5-d-old Cherry Valley ducklings according to the dosage of 1×104 EID50. Then, the biochemical indexes of du... In order to understand the pathogenicity of duck Tembusu virus (DTMUV), it was injected into muscle of 5-d-old Cherry Valley ducklings according to the dosage of 1×104 EID50. Then, the biochemical indexes of duckling serum samples were determined by kits, and the changes in detoxification, tissue viral load and cytokines were detected by using fluorescence quantitative PCR. The results showed that DTMUV had serious damage to the liver, kidney, heart and muscle of ducklings; DTMUV could proliferate in the liver, spleen, lung and brain; the virus levels in the liver and brain reached the peaks on day 5 after the inoculation and those in the lung and spleen reached the peaks on day 9; the virus content was highest in the brain, liver and spleen; and DTMUV induced the overexpression of IFN-γ, IFN-α, IL-6, IFN-β, IL-1β, TLR-7,IL-2, major histocompatibility complex type I (MHC-I) andmajor histocompatibility complex type II (MHC-II) in the spleen on day 1 and the overexpression of IL-6 and IL-2 in the brain on days 1, 2 and 3. 展开更多
关键词 Duck tembusu virus (DTMUV) Biochemical index Viral load CYTOKINE PATHOGENICITY
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Isolation and PCR Identification of Duck Tembusu Virus
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作者 Huang Lili He Dongmei +5 位作者 Ye Baoguo Zhang Yan Yang Shaoxiong Chen Chaoxi Lin Zhemin Cao Zongxi 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2017年第5期318-319,共2页
Duck tembusu virus disease is one of the most serious infectious diseases endangering duck industry. A strain of virus was isolated from a dead duck,and performed PCR identification and sequence analysis. The results ... Duck tembusu virus disease is one of the most serious infectious diseases endangering duck industry. A strain of virus was isolated from a dead duck,and performed PCR identification and sequence analysis. The results showed that the sequence of the isolate shared above 99% homology with duck tembusu virus( DTMUV) sequence on Gen Bank. The result indicated that the isolated virus was DTMUV. 展开更多
关键词 DUCK tembusu virus (DTMUV) ISOLATION PCR IDENTIFICATION
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Phylogenetic Analysis Revealed Concurrent Circulation of Two Clusters of Duck Tembusu Virus in South China
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作者 Linlin LI Jiawen DONG +3 位作者 Chunhong ZHANG Ruihuan KUANG Minhua SUN Jianfeng ZHANG 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2019年第4期81-85,共5页
Eleven strains of duck Tembusu virus(TMUV)were isolated from diseased ducks at different duck farms in South China during 2011–2015,and their whole genomes were sequenced.The 11 isolated strains shared high sequence ... Eleven strains of duck Tembusu virus(TMUV)were isolated from diseased ducks at different duck farms in South China during 2011–2015,and their whole genomes were sequenced.The 11 isolated strains shared high sequence identity from 95.9%to 99.5%.Phylogenetic analysis revealed that all TMUV strains isolated after 2010 are clustered into two distinct branches,one branch comprising 2 Malaysian strains,and the other branch comprising all Chinese and Thai strains forming Chinese cluster 1 and Chinese cluster 2.Five of the 11 isolated strains were closely related to classical Chinese strains(BYD)belonging to Chinese cluster 1,and the remaining 6 isolated strains were closely related to strains newly isolated in South China and Thailand,belonging to Chinese cluster 2(a mixed China-Thailand cluster).Phylogenetic analysis of the partial E and NS 5 gene of TMUVs also showed the similar results.The results collectively showed a new trend of TMUV disease that two Chinese clusters of TMUV have been concurrently circulating in South China.This study provides practical guidance for preparing vaccines against TMUV in South China. 展开更多
关键词 DUCK tembusu virus PHYLOGENETIC analysis
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1株鸡源坦布苏病毒的分离鉴定及致病性研究
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作者 刘涛 何平有 +2 位作者 范京惠 尤永君 邹立宏 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第16期62-67,77,117,118,共9页
为了查明湖北省某种鸡场发病鸡的病原并了解其遗传进化特征及致病性,试验首先提取发病鸡的卵泡和脾脏组织样本核酸,分别对坦布苏病毒、鸡传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、减蛋综合征病毒和滑液囊支原体6种病原体进行检测,... 为了查明湖北省某种鸡场发病鸡的病原并了解其遗传进化特征及致病性,试验首先提取发病鸡的卵泡和脾脏组织样本核酸,分别对坦布苏病毒、鸡传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、减蛋综合征病毒和滑液囊支原体6种病原体进行检测,然后对检出的病原体进行分离培养、效价测定、遗传进化分析、中和试验和致病性试验(产蛋鸡、鸭胚和产蛋鸭)。结果表明:病料中仅坦布苏病毒核酸检测结果为阳性,新城疫病毒、禽流感病毒、减蛋综合征病毒、鸡传染性支气管炎病毒和滑液囊支原体5种病原核酸检测结果均为阴性,确定病原为坦布苏病毒。经病毒的分离培养与RT-PCR扩增后确定分离到1株坦布苏病毒,将该毒株命名为坦布苏病毒HuB株,连续传代3次获得的病毒液效价为1×10^(7.0)TCID_(50)/mL。坦布苏病毒HuB株E基因与近年来流行的坦布苏病毒参考株E基因的序列相似性为86.5%~99.8%,其中与中国鸡源参考株(GX2021和CTLN)、中国蚊源参考株(YN2020)和泰国鸭源参考株(CU56)的亲缘关系较近。坦布苏病毒HuB株能被坦布苏病毒阳性血清完全中和。接种坦布苏病毒HuB株的产蛋鸡主要表现为采食量、产蛋量明显下降,卵泡变性、液化和出血,部分鸡只表现为卵泡萎缩、腹腔中有少量干酪样物;接种坦布苏病毒HuB株的鸭胚于攻毒后96小时内全部死亡(10/10),死亡鸭胚主要表现为体表发红、出血,羽毛发育迟缓,肝脏出血、呈斑驳样;接种坦布苏病毒HuB株的产蛋鸭主要表现为停止产蛋,卵泡出血、变性、萎缩。说明成功从该种鸡场发病鸡病料中分离到1株坦布苏病毒,该毒株可能由泰国鸭源毒株变异而来,且该毒株对鸭胚有致死性,对产蛋鸭的致病性较产蛋鸡更高。 展开更多
关键词 鸡源坦布苏病毒 坦布苏病毒 病毒分离 病毒鉴定 遗传进化分析 致病性试验
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表达绿色荧光蛋白的坦布苏病毒的构建与鉴定
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作者 章丽娇 田宇杰 +9 位作者 张兰香 赵冬敏 韩凯凯 黄欣梅 杨婧 吴凤瑶 刘青涛 刘宇卓 张小飞 李银 《动物医学进展》 北大核心 2024年第6期44-50,共7页
报告病毒在高通量抗病毒药物筛选、活体动物体内成像及新型疫苗研发等方面具有重要应用价值。通过反向遗传操作技术,以坦布苏病毒JXSP株感染性克隆为基础,采用两种策略构建报告病毒,即分别在病毒基因组5′UTR和C蛋白基因、N S5基因和3′... 报告病毒在高通量抗病毒药物筛选、活体动物体内成像及新型疫苗研发等方面具有重要应用价值。通过反向遗传操作技术,以坦布苏病毒JXSP株感染性克隆为基础,采用两种策略构建报告病毒,即分别在病毒基因组5′UTR和C蛋白基因、N S5基因和3′UTR间引入外源基因EGFP,通过融合PCR获得全长cDNA PCR产物,体外转录生成mRNA,转染至BHK-21拯救重组病毒并研究其生长特性。结果显示,利用5′UTR-C位点构建的报告病毒mRNA转染BHK-21细胞后能观察到明显的绿色荧光;报告病毒P0接种DEF细胞后可高强度表达绿色荧光蛋白,在BHK-21和DEF细胞上增殖速度略微低于亲本毒株,但差异不显著。结果表明,成功构建了1株坦布苏绿色荧光报告病毒rJXSP-5′EGFP,在BHK-21和DEF细胞上均能有效增殖。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 绿色荧光蛋白 报告病毒
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坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)的截短表达及其抗体间接ELISA方法的建立与应用
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作者 唐晟 马瑶 +11 位作者 冯贺龙 李丽 汪宏才 张蓉蓉 曾哲 姚伦 温国元 邵华斌 罗青平 曾驰 谢佳燕 商雨 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第16期54-61,116,共9页
为了大量表达坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)并建立一种可检测坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法,试验首先将去除跨膜域的截短坦布苏病毒E基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)上并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达重组蛋白,利... 为了大量表达坦布苏病毒囊膜蛋白(E蛋白)并建立一种可检测坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法,试验首先将去除跨膜域的截短坦布苏病毒E基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)上并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达重组蛋白,利用His标签对表达的重组蛋白进行纯化;然后以重组蛋白为包被抗原、鸭待测血清为一抗、HRP标记兔抗鸭IgG为二抗,通过反应条件[抗原包被质量浓度、抗原包被条件、封闭液、封闭时间、一抗(待测血清样品)稀释液、一抗(待测血清样品)稀释度、一抗(待测血清样品)孵育条件、二抗稀释度、二抗孵育条件和显色条件]的优化和临界值的确定建立间接ELISA方法;最后进行特异性、敏感性和重复性试验,并通过临床样品检测比较该方法与Western-blot方法的符合性。结果表明:PCR扩增得到大小为1227 bp的坦布苏病毒截短E基因,经双酶切与测序验证后,成功构建重组表达质粒pET28a-E-tr。诱导后的重组蛋白分子量大小为49 ku并以包涵体的形式表达,纯化后的重组蛋白条带单一,可与鸭源坦布苏病毒阳性血清发生特异性结合。建立的ELISA方法优化后的抗原包被质量浓度为5μg/mL,抗原包被条件为4℃过夜,封闭液为2%BSA,封闭时间为60 min,一抗(待测血清样品)稀释液为1%BSA,一抗(待测血清样品)稀释度为1∶800,一抗(待测血清样品)孵育条件为37℃、30 min,二抗稀释度为1∶7500,二抗孵育条件为37℃、90 min,显色条件为37℃、10 min,阴阳临界值为0.368;仅可检测出鸭源坦布苏病毒阳性血清,无法检测出鸭源鸭疫里默氏杆菌、新城疫病毒、禽腺病毒、禽流感病毒、细小病毒阳性血清;待测血清最高稀释度为1∶3200(Western-blot方法待测血清最高稀释度仅为1∶1600);批次内重复变异系数(CV)为1.7%~4.7%,批次间重复CV为1.4%~5.7%;对137份临床鸭血清样品进行检测,阳性率为81.7%,与Western-blot方法比较样品阳性率较高,两种方法的符合率为87.6%。说明成功表达了坦布苏病毒截短E蛋白,并建立了一种特异性良好、敏感性较高、重复性较好的可检测坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 E蛋白 原核表达 间接ELISA 抗体
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鸭坦布苏病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 陈平平 嵇辛勤 +5 位作者 阮涌 王晗晗 罗晓宇 安而立 龙丹丹 段志强 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第10期75-80,共6页
为了建立一种有效、快速、准确的鸭坦布苏病毒(DTMUV)TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,本试验针对NCBI发布的DTMUV E基因保守序列设计特异性引物和探针,建立qPCR反应体系。通过制备的标准质粒建立标准曲线,评估该方法的特异性... 为了建立一种有效、快速、准确的鸭坦布苏病毒(DTMUV)TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,本试验针对NCBI发布的DTMUV E基因保守序列设计特异性引物和探针,建立qPCR反应体系。通过制备的标准质粒建立标准曲线,评估该方法的特异性、敏感性和重复性,并使用该方法对临床样本进行检测。结果显示,所建立的标准曲线相关系数为0.999 5,有良好的线性关系;该方法可特异检测DTMUV;对标准质粒的最低检测限为2.72×10^(2) copies/μL,是普通PCR的100倍;CT值组内变异系数为0.97%~1.32%,组间变异系数为1.24%~1.79%;人工感染DTMUV的20份鸭胚成纤维细胞样本以及12份人工攻毒2 d的雏鸭脾脏组织样本和12份泄殖腔棉拭子样本阳性率为100%(44/44);疑似感染的12份活鸭泄殖腔棉拭子阳性率为25.00%(3/12),14份病死鸭脾脏组织样本阳性率为28.57%(4/14)。结果表明,本试验建立的TaqMan探针qPCR方法有良好的敏感性、准确性和重复性,能特异检测DTMUV,适用于临床快速检测,为DTMUV的分子流行病学调查和临床疾病诊断提供了技术支撑。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒(DTMUV) TAQMAN探针 实时荧光定量PCR(qPCR)
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桦褐孔菌口服佐剂对禽类疫苗的体液免疫增强作用研究
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作者 杨硕 费智国 +9 位作者 郭梦帅 郭玲 陈智 张琳 丁志勇 关红艳 赵晓明 黄悦妍 刘娜 刘建钗 《安徽农业科学》 CAS 2024年第17期94-97,共4页
为了明确桦褐孔菌发酵产物(Inonotus obliquus fermentation product,IOFP)作为禽类疫苗佐剂的适用性,选择商品化禽流感灭活疫苗和鸭坦布苏病毒弱毒活疫苗分别免疫SPF鸡和SPF鸭,并饲喂含0.8%IOFP的饲粮,同时设置饲喂商品化饲粮的对照组... 为了明确桦褐孔菌发酵产物(Inonotus obliquus fermentation product,IOFP)作为禽类疫苗佐剂的适用性,选择商品化禽流感灭活疫苗和鸭坦布苏病毒弱毒活疫苗分别免疫SPF鸡和SPF鸭,并饲喂含0.8%IOFP的饲粮,同时设置饲喂商品化饲粮的对照组。在免疫后不同时间点采集鸡和鸭的外周血,分离血清后分别测定禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)特异性血凝抑制(hemagglutinin inhibition,HI)抗体、鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)特异性抗体及二者中和抗体效价。使用统计学方法评价IOFP对机体体液免疫反应的影响。鸭免疫后28 d使用DTMUV强毒株攻毒,持续检测泄殖腔排毒量,以确定IOFP对DTMUV排毒量的影响。结果显示,IOFP作为口服佐剂能够显著提升AIV、DTMUV疫苗抗体和中和抗体水平,特别是对免疫早期抗体的改善效果尤为显著。此外,添加IOFP还能够减少DTMUV的排毒量,缩短排毒时间。由此可见,IOFP是一种禽类病毒性疫苗普遍适用的口服佐剂,对于缩短免疫“空窗期”、提升疫苗保护效果具有较好的改善作用。 展开更多
关键词 桦褐孔菌发酵产物 禽流感病毒灭活疫苗 鸭坦布苏病毒弱毒活疫苗 抗体 中和抗体
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表达鸭坦布苏病毒衣壳蛋白的重组腺病毒载体构建与鉴定
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作者 吴庆国 李莎莎 +2 位作者 王安平 卢会鹏 成玉婷 《中国家禽》 北大核心 2024年第3期51-57,共7页
为构建鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)衣壳蛋白的复制缺陷型人5型腺病毒(Ad5)为载体的重组腺病毒,研究通过一步克隆技术将DTMUV Capsid基因插入到含有结核分枝杆菌的热休克蛋白70(mHsp70)为佐剂的pShuttle-CMV-Hsp70质粒中,构... 为构建鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)衣壳蛋白的复制缺陷型人5型腺病毒(Ad5)为载体的重组腺病毒,研究通过一步克隆技术将DTMUV Capsid基因插入到含有结核分枝杆菌的热休克蛋白70(mHsp70)为佐剂的pShuttle-CMV-Hsp70质粒中,构建能够表达DTMUV Capsid和mHsp70蛋白的重组穿梭质粒pShuttle-DTMUV Capsid,并与含有pAdEasy-1腺病毒骨架载体的大肠杆菌BJ5183感受态细胞进行同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd-DTMUV Capsid。载体质粒经Pac I酶切线性化后转染至HEK 293A细胞,包装重组腺病毒rAdv-DTMUV Capsid。结果显示,rAdv-DTMUV Capsid在病毒传代过程中目的基因稳定存在,且病毒滴度可达2.3×10^(8)PFU/mL。Western blot等结果表明rAdv-DTMUV Capsid在HEK 293A细胞中表达了DTMUV特异性蛋白Capsid。DEF细胞感染试验证明rAdv-DTMUV Capsid可感染鸭源细胞,且诱导IFN-α、IL-10和IL-17 mRNA表达。结果表明,研究成功制备表达DTMUV Capsid蛋白的重组腺病毒rAdv-DTMUV Capsid,能引起细胞免疫反应,可作为一种候选疫苗。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 衣壳蛋白 重组腺病毒 HSP70
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鸭坦布苏病毒prM蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定
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作者 刘亚林 梁真洁 +1 位作者 杨兴淼 曹瑞兵 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第1期98-106,共9页
为制备鸭坦布苏病毒(DTMUV)膜前体蛋白(prM)的单克隆抗体,将原核表达的重组prM蛋白配伍佐剂免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,3次免疫后分离小鼠脾细胞并将其与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA筛选,获得2株能稳定分泌抗DTMUV prM蛋白单克隆抗... 为制备鸭坦布苏病毒(DTMUV)膜前体蛋白(prM)的单克隆抗体,将原核表达的重组prM蛋白配伍佐剂免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,3次免疫后分离小鼠脾细胞并将其与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA筛选,获得2株能稳定分泌抗DTMUV prM蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3H4和5C10。2株杂交瘤细胞均能稳定分泌抗体,制备的腹水抗体效价分别为1∶51200和1∶102400。亚型鉴定结果显示,3H4和5C10单克隆抗体的重链均属于IgG2b,轻链均为Kappa型。Western blot和间接免疫荧光试验结果显示,这2株单克隆抗体均能与BHK-21细胞中感染的DTMUV发生特异性反应,而与同属的日本脑炎病毒无交叉反应。微量病毒空斑减少中和试验结果表明,这2株单克隆抗体均具有中和活性。进一步原核表达prM蛋白不同截短体,发现2株单抗针对不同表位,均位于prM蛋白的pr片段上。本研究制备的单克隆抗体3H4和5C10为快速检测DTMUV感染和研究prM蛋白的结构与功能奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 prM蛋白 原核表达 单克隆抗体 B细胞表位
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肉鹅坦布苏病毒病免疫程序初探
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作者 段娜 韦汉群 +3 位作者 何晓露 张文丽 杨凤仪 郝桂英 《西昌学院学报(自然科学版)》 2024年第2期11-16,共6页
为了制定合理、有效的肉鹅坦布苏病毒病免疫程序,选取鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)和弱毒疫苗(FX2010-180P株)对7日龄和14日龄浙东白鹅进行不同疫苗组合(7日龄灭活苗+21日龄灭活苗组(A组)、7日龄弱毒疫苗组(B组)、7日龄弱毒疫苗+21日... 为了制定合理、有效的肉鹅坦布苏病毒病免疫程序,选取鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)和弱毒疫苗(FX2010-180P株)对7日龄和14日龄浙东白鹅进行不同疫苗组合(7日龄灭活苗+21日龄灭活苗组(A组)、7日龄弱毒疫苗组(B组)、7日龄弱毒疫苗+21日龄灭活苗组(C组)、14日龄灭活苗+28日龄灭活苗组(D组)、14日龄弱毒疫苗组(E组)、14日龄弱毒疫苗+28日龄灭活苗组(F组)、未免疫组(G组))的试验,用双抗体夹心ELISA法检测免疫后不同时间的抗体含量。结果表明:弱毒疫苗免疫组产生抗体较其他组快,但抗体含量持续时间较短;灭活疫苗+灭活疫苗(A组和D组)抗体含量从免疫完成后第24~36天抗体含量均高于弱毒疫苗(B组和E组)和弱毒疫苗+灭活疫苗(C组和F组),抗体持续时间更长。建议肉鹅可在14日龄用坦布苏病毒病灭活疫苗进行首免,14d后再接种一次,可获得较高的抗体含量。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 灭活疫苗(HB株) 弱毒疫苗(FX2010-180P株) 浙东白鹅
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鸭坦布苏病毒E蛋白功能的研究进展
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作者 赵赛赛 唐熠 刁有祥 《中国家禽》 北大核心 2024年第10期165-172,共8页
鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)病是由DTMUV引起以病毒性脑炎(雏鸭、育成鸭)及产蛋下降(产蛋鸭)为主要特征的传染性疾病,该病的暴发和传播给水禽养殖业造成了巨大的经济损失。包膜蛋白E(Envelope,E)作为DTMUV关键的免疫原性蛋... 鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)病是由DTMUV引起以病毒性脑炎(雏鸭、育成鸭)及产蛋下降(产蛋鸭)为主要特征的传染性疾病,该病的暴发和传播给水禽养殖业造成了巨大的经济损失。包膜蛋白E(Envelope,E)作为DTMUV关键的免疫原性蛋白,在介导病毒与宿主细胞融合、侵入等方面发挥作用。文章总结了近年来DTMUV E蛋白结构特点、关键毒力位点、潜在抗原表位、蛋白互作及生物制品等最新研究进展,以期为鸭坦布苏病毒病的特异性诊断、疫苗研究和抗病毒药物的设计提供参考。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 E蛋白 毒力位点 抗原表位 生物制品
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鸭坦布苏病毒单克隆抗体的制备和治疗效果分析
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作者 王丹娜 乌兰 李三 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第2期27-31,共5页
为了制备、筛选和评价治疗鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染的中和抗体,本试验克隆DTMUV E基因,连接至原核表达载体pET-30a(+),转化至大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态,提取质粒,鉴定重组质粒pET30-E,转化E.coli BL21感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳... 为了制备、筛选和评价治疗鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染的中和抗体,本试验克隆DTMUV E基因,连接至原核表达载体pET-30a(+),转化至大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态,提取质粒,鉴定重组质粒pET30-E,转化E.coli BL21感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析E蛋白表达,使用镍柱亲和层析纯化E蛋白,将E蛋白与弗氏佐剂混合、乳化,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠3次后,取小鼠脾脏,分离脾细胞,在聚乙二醇(PEG)的作用下,将脾细胞与SP2/0细胞融合,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)筛选分泌抗E蛋白抗体的杂交瘤细胞株,通过Western blot进行单克隆抗体鉴定,通过间接免疫荧光技术检测DTMUV,病毒中和试验评价单克隆抗体中和DTMUV感染的能力,并评价单克隆抗体治疗DTMUV感染小鼠的能力。结果显示,含质粒pET30-E的E.coli BL21经诱导后可在裂解的沉淀物中表达E蛋白;制备的E蛋白单克隆抗体4A1可以与E蛋白发生免疫反应,不与鸭A型肝炎病毒、呼肠孤病毒、新城疫病毒、细小病毒和H9亚型禽流感病毒发生交叉反应;4A1株杂交瘤细胞株分泌的抗体对DTMUV具有中和活性,且能够很好地识别DTMUV并与之发生中和反应,可完全清除感染小鼠血液中的DTMUV。结果表明,本试验制备的单克隆抗体4A1在应对DTMUV感染方面具有潜在治疗价值。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 单克隆抗体 中和活性 治疗效果
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坦布苏病毒分子致病机制研究进展
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作者 陈玉明 崔德福 +5 位作者 白小飞 乔仕承 侯世豪 周子彻 王跃扬 刘永相 《中国家禽》 北大核心 2024年第10期152-157,共6页
坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)感染可引起鸭的急性传染病,导致神经系统和生殖系统等的损伤,该病毒的广泛传播给我国养鸭业带来了严重的损失。TMUV除感染鸭外,还可以感染鹅、鸡等禽类,对我国养禽业有较大威胁。文章综述了TMUV与天然免... 坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)感染可引起鸭的急性传染病,导致神经系统和生殖系统等的损伤,该病毒的广泛传播给我国养鸭业带来了严重的损失。TMUV除感染鸭外,还可以感染鹅、鸡等禽类,对我国养禽业有较大威胁。文章综述了TMUV与天然免疫系统、细胞凋亡、自噬、泛素-蛋白酶体系统、微小核糖核酸等的关系,为TMUV致病机制的深入研究和TMUV感染的科学防控提供理论参考。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 分子致病机制 天然免疫 细胞凋亡 自噬 泛素-蛋白酶体系统
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2群坦布苏病毒NS1蛋白抑制鸭Ⅰ型干扰素产生的机制研究
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作者 黄允真 张俊勤 +4 位作者 李林林 董嘉文 向勇 廖明 孙敏华 《广东农业科学》 CAS 2024年第7期151-160,共10页
【目的】坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)病是重要的水禽传染病,研究发现TMUV感染鸭早期,2群TMUV在肝、肾、脑等组织中的病毒拷贝数显著高于3群TMUV。研究2群TMUV非结构蛋白(Non-structural protein,NS protein)和3群TMUV NS蛋白对鸭天... 【目的】坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)病是重要的水禽传染病,研究发现TMUV感染鸭早期,2群TMUV在肝、肾、脑等组织中的病毒拷贝数显著高于3群TMUV。研究2群TMUV非结构蛋白(Non-structural protein,NS protein)和3群TMUV NS蛋白对鸭天然免疫反应是否存在差异。【方法】以2群TMUV-JM株和3群TMUV-GX株为研究对象,构建两种毒株NS蛋白真核表达质粒,通过双荧光素酶报告系统研究NS蛋白对视黄酸诱导基因蛋白I(Retinoic acid-inducible gene protein I,RIG-I)诱导的β干扰素(βinterferon,IFN-β,为I型)启动子活性的影响。构建重组嵌合NS1蛋白真核表达质粒,通过激光共聚焦、免疫共沉淀、Western Blotting技术研究NS1与RIG-I信号通路中关键分子的互作区域。利用反向遗传操作系统构建NS1重组嵌合病毒,研究NS1在TMUV感染DEF细胞后对IFN-β产生的抑制作用。【结果】TMUV-JM株NS1能抑制RIG-I诱导的IFN-β启动子活性,而TMUV-GX株NS1对其无抑制作用。进一步研究发现,TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)为TMUV-JM NS1蛋白抑制RIG-I介导的I型IFN表达的作用节点分子,且NS1蛋白255~352 aa为发挥抑制作用的功能区域。TMUV-JM NS1与TBK1不存在直接相互作用,是间接降低TBK1磷酸化水平从而降低I型IFN的表达量。【结论】2群TMUV NS1具有抑制RIG-I信号通路的活性,并鉴定出其抑制功能的关键活性区域及作用的通路节点分子,明确2群TMUV NS1通过间接抑制TBK1磷酸化而影响鸭I型IFN产生。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 非结构蛋白 RIG-I信号通路 I型干扰素 TBK1磷酸化
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一株肉种鸡坦布苏病毒的分离鉴定及致病特点研究
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作者 王友 李培勇 段宝敏 《家禽科学》 2024年第6期17-26,I0008,I0009,共12页
2010年坦布苏病毒传入我国,对我国养鸭业造成损失。随后发现,此病毒也能够感染鸡群,对养鸡场生物安全形成威胁。本研究从发生不明原因产蛋率下降的肉种鸡中分离到一株坦布苏病毒HB20210株,发病鸡群主要剖检病变为卵泡膜出血和卵泡液化... 2010年坦布苏病毒传入我国,对我国养鸭业造成损失。随后发现,此病毒也能够感染鸡群,对养鸡场生物安全形成威胁。本研究从发生不明原因产蛋率下降的肉种鸡中分离到一株坦布苏病毒HB20210株,发病鸡群主要剖检病变为卵泡膜出血和卵泡液化等生殖系统病变。将分离株接种到DF-1细胞和SPF鸡胚中,48 h后即可出现明显病变。动物试验结果表明,胸肌注射、颈部皮下注射和灌服的攻毒方式造成的病毒血症持续时间均为5 d。将分离株进行肉种鸡回归试验,卵泡会出现显著病变。E蛋白氨基酸同源性和进化树分析表明,分离株HB202010与活疫苗FX2010-180P株、灭活疫苗DF2株、HB株属于同一分支,均为中国分离株II分支,并且与灭活疫苗DF2株和HB株同源性最高,可达99.0%。HB20210株的分离鉴定为进一步探讨该病毒对种鸡产蛋性能的影响和完善种鸡场防控方法奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 TMUV 肉种鸡 分离鉴定
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一例鸭坦布苏病毒与鸭圆环病毒混合感染樱桃谷肉鸭的病例报告
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作者 潘彦林 张俊勤 +2 位作者 孙敏华 徐志宏 廖明 《广东畜牧兽医科技》 2024年第3期71-76,共6页
2023年8月,广西某养鸭场鸭子突发软脚、腿部肌肉震颤等神经症状,为探究该场鸭群致病病原,对该鸭场的患病鸭进行调查。剖检结果显示:患病鸭肝脏轻度肿大、质脆,呈黄褐色,肾脏肿大。病理切片显示:肝细胞胞质中可见微小圆形空泡,可见少量淤... 2023年8月,广西某养鸭场鸭子突发软脚、腿部肌肉震颤等神经症状,为探究该场鸭群致病病原,对该鸭场的患病鸭进行调查。剖检结果显示:患病鸭肝脏轻度肿大、质脆,呈黄褐色,肾脏肿大。病理切片显示:肝细胞胞质中可见微小圆形空泡,可见少量淤血;脾脏组织见较多细胞坏死,细胞核固缩。病原检测结果显示:鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭圆环病毒(DuCV)为阳性,细菌及其他病原检测结果为阴性。序列分析发现,该场流行的DTMUV与SCS01毒株遗传距离最近,属于Cluster 2.1;DuCV与山东毒株YF180401遗传距离最近,属于DuCV-1型,确定该养殖场鸭群突然发病为DTMUV混合感染DuCV所致。这两种病毒都是临床中常见危害鸭群的病原,但混合感染情况却少有报道。该研究旨在为我国今后开展DTMUV和DuCV的检测和综合防控提供参考。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 鸭圆环病毒 混合感染 樱桃谷肉鸭
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两株坦布苏病毒的分离鉴定及全基因组序列分析 被引量:1
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作者 胡峰 于可响 +4 位作者 马秀丽 黄兵 宋敏训 吴家强 李玉峰 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第1期139-145,共7页
2019年,从山东某地疑似坦布苏病毒(TMUV)感染的发病鸭和发病鹅组织病料中进行病毒分离,并通过RT-PCR、间接免疫荧光试验以及基因序列分析,确定分离到1株鸭源和1株鹅源TMUV,并命名为BZ0162和WS12101。将分离株全基因组进行PCR分段扩增、... 2019年,从山东某地疑似坦布苏病毒(TMUV)感染的发病鸭和发病鹅组织病料中进行病毒分离,并通过RT-PCR、间接免疫荧光试验以及基因序列分析,确定分离到1株鸭源和1株鹅源TMUV,并命名为BZ0162和WS12101。将分离株全基因组进行PCR分段扩增、测序,发现BZ0162和WS12101基因组全长包含10 991个核苷酸。全基因组核苷酸同源性比较结果显示,BZ0162和WS12101之间同源性是99.5%,与其他TMUV参考毒株同源性均大于95.7%。E蛋白核苷酸和氨基酸同源性分别大于95.2%和98.0%。遗传进化分析结果显示,BZ0162和WS12101与GenBank最新公布的CHN-JL中国株以及泰国株DK/TH/CU-1亲缘关系最近,处于同一进化分支上。分别成功分离到1株鸭源和1株鹅源坦布苏病毒,为进一步探究坦布苏病毒遗传变异及跨宿主传播机制提供了材料。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 分离 全基因组 遗传进化分析
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鸭坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ-Ⅱ与Ⅲ的反应原性和免疫原性比较 被引量:1
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作者 曲哲会 鲁绍芳 +8 位作者 郭晓秋 陈敏 焦凤超 王梦瑶 魏星 马君钊 张茹 黄立 张喜文 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第20期89-95,100,共8页
为了比较鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)E蛋白结构域Ⅰ-Ⅱ(EDⅠ-Ⅱ)与结构域Ⅲ(EDⅢ)的反应原性和免疫原性,试验将重组质粒pET-EDⅠ-Ⅱ[EDⅠ-Ⅱ基因插入表达载体pET-30a(+)构建的重组质粒]和pET-EDⅢ[EDⅢ基因插入表达载体pET-... 为了比较鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)E蛋白结构域Ⅰ-Ⅱ(EDⅠ-Ⅱ)与结构域Ⅲ(EDⅢ)的反应原性和免疫原性,试验将重组质粒pET-EDⅠ-Ⅱ[EDⅠ-Ⅱ基因插入表达载体pET-30a(+)构建的重组质粒]和pET-EDⅢ[EDⅢ基因插入表达载体pET-30a(+)构建的重组质粒]分别转化至大肠杆菌(E.coli)Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定,采用亲和层析法纯化重组蛋白EDⅠ-Ⅱ和EDⅢ,通过Dot-blot试验和间接ELISA试验比较二者的反应原性;将重组蛋白EDⅠ-Ⅱ和EDⅢ免疫小鼠,通过测定免疫小鼠血清中特异性抗体、病毒中和(VN)抗体和细胞因子(IL-6、IFN-γ)水平比较两者的免疫原性;将DTMUV分离株感染重组蛋白EDⅠ-Ⅱ和EDⅢ免疫小鼠,采用实时荧光定量PCR方法检测小鼠肺脏、肝脏和脑组织中DTMUV RNA相对表达水平,比较重组蛋白EDⅠ-Ⅱ和EDⅢ对免疫小鼠的保护力。结果表明:含重组质粒pET-EDⅠ-Ⅱ和pET-EDⅢ诱导4 h的菌体蛋白经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定分别在分子量约33 ku和17 ku位置出现明显条带,可与鸡抗DTMUV多克隆抗体发生特异性免疫反应;经Dot-blot试验和间接ELISA试验分析发现,重组蛋白EDⅠ-Ⅱ比重组蛋白EDⅢ具有更好的反应原性;重组蛋白EDⅠ-Ⅱ免疫小鼠后第42天血清中特异性抗体水平、IFN-γ和IL-6水平均极显著高于重组蛋白EDⅢ(P<0.01或P<0.001),但VN抗体水平极显著低于重组蛋白EDⅢ(P<0.01);免疫小鼠感染DTMUV后,重组蛋白EDⅢ免疫小鼠肺脏、肝脏和脑组织中DTMUV mRNA相对表达水平均显著或极显著低于重组蛋白EDⅠ-Ⅱ免疫小鼠(P<0.05或P<0.01),即EDⅢ蛋白诱导小鼠产生的免疫应答较EDⅠ-Ⅱ蛋白对于抑制DTMUV复制的效果更好。说明EDⅠ-Ⅱ蛋白更适合作为以E蛋白及相关特异性抗体为基础的免疫学检测方法研究的目标蛋白,而EDⅢ蛋白更适合作为DTMUV新型疫苗研究的目标蛋白。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 E蛋白 结构域 反应原性 免疫原性
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三株鹅源坦布苏病毒的分离鉴定及遗传进化分析 被引量:2
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作者 童佳欣 王杰煌 +3 位作者 朱婉君 涂军 张济培 陈济铛 《中国家禽》 北大核心 2023年第5期48-56,共9页
为了解广东地区鹅源坦布苏病毒流行情况,研究对自2020年6月至2021年6月从广东地区疑似坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)感染鹅的组织病料进行TMUV分离鉴定。结果显示:共分离出3株鹅源TMUV,可感染BHK-21细胞并导致细胞病变;3株分离株核苷... 为了解广东地区鹅源坦布苏病毒流行情况,研究对自2020年6月至2021年6月从广东地区疑似坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)感染鹅的组织病料进行TMUV分离鉴定。结果显示:共分离出3株鹅源TMUV,可感染BHK-21细胞并导致细胞病变;3株分离株核苷酸相似性为99.2%~99.7%,与Cluster2.1参考株基因同源性最高,为95.9%~99.3%,与Cluster2.2参考毒株同源性相对较低,为95.0%~96.4%;全基因组遗传进化分析和E蛋白氨基酸序列分析结果表明,3株鹅源分离株均位于Cluster2.1,其中Goose/GD/939/2021和Goose/GD/1025/2021 E蛋白氨基酸序列与其他毒株E蛋白相比多个位点存在差异。研究表明,从广东地区分离的3株鹅源TMUV均位于Cluster2.1,为进一步研究广东地区鹅源TMUV流行、进化及相关疾病的防控奠定基础。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 BHK-21细胞 E基因 遗传进化
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