尿酸钠诱导HUVEC损伤的急性痛风模型研究

目的:通过尿酸钠(MSU)体外直接刺激血管内皮细胞(HUVEC),促进胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,建立体外急性痛风细胞模型。方法:刺激组分别用终浓度为0、25、50、75、100(μg/mL)MSU处理HU-VEC24h、48h,MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测HUVEC的ICAM-1表达。结果:24h时,随着MSU浓度的提高,HUVEC活力显著下降(P(0.01),同时细胞上清液中的ICAM-1表达提高;结论:100μg/mLMSU刺激HUVEC24h,造成急性痛风细胞模型。

蠲痹历节清方对痛风细胞模型中PPARγ、TLR4、NF-κB的影响

目的体外考察蠲痹历节清方抗痛风炎症作用及其分子机制。方法利用单钠尿酸盐(MSU)结晶诱导巨噬细胞建立体外痛风模型,用蠲痹历节清方(44 g·kg^-1)大鼠含药血清(10%),以及PPARγ激动剂吡格列酮20μmol·L^-1、NF-κB阻断剂SN5020μmol·L干预,酶联免疫法测定TNF-α、IL-1β、IL-6含量,RTPCR法与Western-Blot法分别检测PPARγ、TLR4基因转录及蛋白表达,免疫荧光法考察NF-κB核移位。结果与正常对照组比较,MSU诱导巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著增加(P<0.01),PPARγ基因转录与表达显著降低(P<0.01),TLR4基因转录与表达显著增加(P<0.01),NF-κB核移位。与模型组比较,蠲痹历节清方含药血清,可显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6水平(P<0.01),增加PPARγ基因转录与表达(P<0.01),降低TLR4基因转录与表达(P<0.01),阻止NF-κB核移位,其作用与吡格列酮相似。SN50对PPARγ无影响。结伦蠲痹历节清方可能部分通过上调巨噬细胞PPARγ,抑制TLR4/NF-κB信号通路,抑制痛风炎症反应。

复方土茯苓颗粒对大鼠滑膜细胞炎症因子及mi-RNA的影响

【目的】观察复方土茯苓颗粒含药血清对大鼠滑膜细胞痛风模型的影响以及与白细胞介素-1β/白细胞介素-6(IL-1β/IL-6)、小片段RNA miR-146a的关系。【方法】从SD大鼠身上摘取膝关节滑膜组织进行原代培养并传代,将滑膜细胞分成空白对照组,空白血清组,模型组,中药血清低、中、高剂量组6组;分别制备复方土茯苓颗粒中药血清和尿酸盐晶体混悬液,并进行细胞活性试验后,按组进行相应的干预,然后收集细胞培养液采用酶联免疫吸附反应(ELISA)法检测IL-1β/IL-6水平;提取滑膜细胞总RNA并进行逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-146a表达,并分析它们的关系。【结果】模型组滑膜细胞培养液中IL-1β/IL-6的含量显著升高(P<0.05),滑膜细胞miR-146a表达显著下调(P<0.05);中药血清各剂量组IL-1β/IL-6的含量显著降低(P<0.05),miR-146a则显著上调(P<0.05);IL-1β/IL-6与miR-146a表达呈反比关系。【结论】复方土茯苓颗粒含药血清可能是通过上调大鼠滑膜细胞miR-146a的表达,抑制IL-1β/IL-6,从而缓解炎症反应。