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Lavendustin A对gp120抑制大鼠海马CA1区LTP的翻转作用
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作者 董军 陆大祥 +2 位作者 颜亮 付咏梅 李楚杰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1646-1646,共1页
目的:为了探讨酪氨酸蛋白激酶抑制剂Lavendustin A(Lav A)对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)的包膜糖蛋白gp120引起大鼠海马脑片CA1区的长时程增强效应(long-term potentiation,LTP)的影响. 方法:应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区... 目的:为了探讨酪氨酸蛋白激酶抑制剂Lavendustin A(Lav A)对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)的包膜糖蛋白gp120引起大鼠海马脑片CA1区的长时程增强效应(long-term potentiation,LTP)的影响. 方法:应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位EPSP,研究了Lav A对gp120引起的大鼠海马脑片CA1区突触传递和可塑性变化的影响. 展开更多
关键词 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 海马CA1 gp120 大鼠 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 LTP 兴奋性突触后电位 长时程增强效应 海马脑片
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HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:4
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作者 楚鹰 宫祥丹 +5 位作者 高建伟 苏艾荣 陈德燕 宋红勇 吴喜林 吴稚伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期540-545,共6页
目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠... 目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定。结果制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1∶81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型。Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白。结论成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1) gp120可变区1/2 单克隆抗体 真核蛋白表达 疫苗
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EHV-1_(CN)与IL-2基因共表达核酸疫苗诱导产生CTL的观察 被引量:2
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作者 郭焱 金宁一 +5 位作者 张应玖 夏志平 王宏伟 郭志儒 罗晶 殷震 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期81-83,共3页
目的 观察HIV-1CN gp120基因与IL-2基因共表达核酸疫苗质粒pGPIL-2诱导产生CTL。方法 脂质体介导共表达中国流行株HIV-1Gag-gp120基因与IL-2基因的核酸疫苗质粒pGIL-2转染BHK-... 目的 观察HIV-1CN gp120基因与IL-2基因共表达核酸疫苗质粒pGPIL-2诱导产生CTL。方法 脂质体介导共表达中国流行株HIV-1Gag-gp120基因与IL-2基因的核酸疫苗质粒pGIL-2转染BHK-21细 胞,以间接免疫光法鉴定其表达。取pGPIL-2免疫鼠脾细胞,检测pGPIL-2诱导的细胞毒性T细胞杀伤活性。 结果pGPIL-2可有效地诱导CIL的产生,并可杀伤HIV-1CN嵌合基因转染的靶细胞。结论 为进一步设计中国流行株HIV-1核酸疫苗提供了重要实验依据。 展开更多
关键词 gp120基因 IL-2基因 细胞毒性T细胞 HIV-1 基因疫苗 CTL 诱导
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mTSLP-V1/V2融合蛋白的真核表达与鉴定 被引量:1
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作者 楚鹰 王亭亭 +6 位作者 芮昱文 宋思维 苏艾荣 程林 宋红勇 郑大同 吴稚伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期582-586,共5页
目的:将鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(mouse thymic stromal lymphopoietin,mTSLP)与人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)B亚型分离株BAL的gp120 V1/V2结构域在293F真核细胞表达体系中进行融合表达。方法:以真... 目的:将鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(mouse thymic stromal lymphopoietin,mTSLP)与人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)B亚型分离株BAL的gp120 V1/V2结构域在293F真核细胞表达体系中进行融合表达。方法:以真核表达质粒pCEP-Pu为载体,构建mTSLP与gp120BALV1V2融合基因的重组蛋白表达质粒pCTV1V2BAL。限制性酶切电泳与测序验证质粒构建正确后,使用PEI瞬时转染293F悬浮细胞,表达产物以SDS-PAGE与Western blot进行分析,并对纯化后重组蛋白的V1/V2抗原表位进行了ELISA分析。结果:SDS-PAGE、Western blot分析显示,在表观分子量35 kD至55 kD的范围内存在一条不均一的糖蛋白条带,并且能与抗mTSLP多克隆抗体和抗His标签单克隆抗体发生反应。HIV-1阳性病人血清能够识别mTSLP-V1/V2BAL上的HIV-1V1/V2抗原表位。结论:在293F中成功表达了mTSLP-V1/V2BAL融合蛋白,该蛋白具有HIV-1gp120BALV1/V2区的抗原表位,能够用于HIV-1 gp120 V1/V2亚单位疫苗的研究。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒1 gp120可变1 2 鼠胸腺基质淋巴细胞生成素 293 F表达体系 融合蛋白
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抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1抗体可变区基因克隆、串联和表达 被引量:2
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作者 王霞 彭晓东 +2 位作者 黎光 胡丽娟 毕建虹 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期548-551,共4页
目的克隆抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneousnuclearribonucleoproteinA2/B1,HnRNPA2/B1)单克隆抗体的重链可变区(variableregionofheavychain,VH)和轻链可变区(variableregionoflightchain,VL)基因,构建抗HnRNPA2/B1单链抗体... 目的克隆抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneousnuclearribonucleoproteinA2/B1,HnRNPA2/B1)单克隆抗体的重链可变区(variableregionofheavychain,VH)和轻链可变区(variableregionoflightchain,VL)基因,构建抗HnRNPA2/B1单链抗体(singlechainFv,ScFv)基因,并在大肠杆菌表达。方法采用斑点ELISA、Western印迹和免疫组化检测抗HnRNPA2/B1单克隆抗体3E8的特异性,并通过逆转录-聚合酶链反应、重叠延伸PCR来克隆、串联VH和VL基因,构建抗HnRNPA2/B1ScFv基因pET28(a+)表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、竞争抑制ELISA检测表达产物。结果3E8抗体能特异性地与HnRNPA2/B1合成肽以及3株人肺癌细胞内HnRNPA2/B1结合;克隆的VH基因为345bp,VL基因为309bp,符合小鼠抗体可变区特性;抗HnRNPA2/B1ScFv蛋白以包涵体形式表达,分子量约28000,并具有与抗原结合活性。结论成功构建了抗HnRNPA2/B1ScFv基因克隆,并在大肠杆菌中获得了功能性表达,为阐明HnRNPA2/B1与肺癌相关性奠定了实验基础。 展开更多
关键词 HNRNPA2/B1 核内不均一核糖核蛋白A2/B1 单克隆抗体 诱导表达 可变基因 克隆 特异性 VL基因 表达载体 抗原结合活性
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HIV包膜蛋白Gp120在果蝇Schneider 2细胞内的表达纯化及初步性质鉴定 被引量:2
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作者 孙佩龙 周建华 +1 位作者 吕淑霞 刘新奇 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期460-464,共5页
构建pMT/BiP/V5-HisA-HIVgp120真核表达载体,通过稳定转染获得稳定表达gp120蛋白的果蝇Schnei-der2(S2)细胞系,并对gp120蛋白进行大量表达和纯化。应用聚合酶链式反应技术从重组载体PVR1012-gp120中扩增出中国流行株CRF07-BCgp120全长... 构建pMT/BiP/V5-HisA-HIVgp120真核表达载体,通过稳定转染获得稳定表达gp120蛋白的果蝇Schnei-der2(S2)细胞系,并对gp120蛋白进行大量表达和纯化。应用聚合酶链式反应技术从重组载体PVR1012-gp120中扩增出中国流行株CRF07-BCgp120全长基因后,将其插入载体pMT/BiP/V5-HisA。应用脂质体转染技术将真核表达载体和抗性筛选质粒共转染果蝇S2细胞,通过杀稻瘟菌素反复筛选,建立稳定高表达gp120蛋白的果蝇S2细胞系,并通过镍柱亲和层析和分子筛法纯化目的蛋白。用SDS-PAGE对重组蛋白的分子量和纯度进行分析,并通过Western blot和酶联免疫吸附技术(ELISA)对其进行鉴定。成功构建了gp120真核表达载体并获得了稳定转染该蛋白的果蝇S2细胞系,成功的表达了具有良好抗体反应性的gp120全长蛋白。此结果为深入研究HIV包膜蛋白gp120的生物学特性及进行HIV疫苗的研究提供了良好的物质基础。 展开更多
关键词 HIV-1包膜蛋白gp120 真核表达载体 转染 S2细胞系 酶联免疫吸附技术
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HIV-1CRF07-BC gp41 HR2高突变区氨基酸结构和功能分析
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作者 杜建森 马婧 +1 位作者 刘方 刘新奇 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期35-41,共7页
HIV-1包膜蛋白ENV介导病毒进入靶细胞,这个过程可以作为设计抗艾滋病药物的一个重要靶点,进入抑制剂能够抑制HIV进入靶细胞,从而在感染的最初环节抑制病毒的传播.为了更好地筛选针对中国株CRF07-BC的进入抑制剂,建立了细胞-细胞融合系统... HIV-1包膜蛋白ENV介导病毒进入靶细胞,这个过程可以作为设计抗艾滋病药物的一个重要靶点,进入抑制剂能够抑制HIV进入靶细胞,从而在感染的最初环节抑制病毒的传播.为了更好地筛选针对中国株CRF07-BC的进入抑制剂,建立了细胞-细胞融合系统.通过比较CRF07-BC gp41和B亚型gp41的序列同源性和融合能力,gp41 HR2存在着一个7个氨基酸的高突变区.通过结构生物学对gp41 HR2高突变区进行分析发现,高突变区内氨基酸可以在功能上互补,保持了gp41的融合能力.这种功能互补性的研究可以为HIV gp41进化提供理论参考,为HIV-1进入抑制剂的设计提供更准确的靶点. 展开更多
关键词 HIV-1 gp41 HR2 高突变 结构分析
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Curcumin ameliorates hippocampal neuron damage induced by human immunodeficiency virus-1 被引量:3
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作者 Hongmei Tang Rui Pan +8 位作者 Wenli Fang Yanyan Xing Dexi Chen Xiaobao Chen Yuanyuan Yu Junbing Wang Zheng Gong Guoyin Xiong Jun Dong 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第15期1368-1375,共8页
Our previous studies have shown that infection with the gp120 V3 loop can cause human immunodeficiency virus-1 associated neurocognitive disorders. Curcumin has been shown to improve these effects to some degree, but ... Our previous studies have shown that infection with the gp120 V3 loop can cause human immunodeficiency virus-1 associated neurocognitive disorders. Curcumin has been shown to improve these effects to some degree, but the precise mechanisms remain unknown. The present study analyzed the neuroprotective effect and mechanism of curcumin in relation to hippocampal neurons. Results showed that 1 nmol/L gp120 V3 loop suppressed the growth of synapses. After administration of 1 !umol/L curcumin, synaptic growth improved. Curcumin is neuroprotective against gp120 V3 loop-induced neuronal damage by inhibiting the activation of L-type calcium currents, relieving intracellular Ca^2+ overload, promoting Bcl-2 expression, and inhibiting Bax activation. The effect of curcumin was identical to nimodipine, suggesting that curcumin has the same neuroprotective effects against gp120 V3 loop-induced neuronal damage. 展开更多
关键词 neural regeneration traditional Chinese medicine CURCUMIN gp120 V3 loop humanimmunodeficiency virus-1 associated neurocognitive disorders Ca^2 SYNAPSE apoptosis grants-supported paper NEUROREGENERATION
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Ficolin-2 binds to HIV-1 gp120 and blocks viral infection 被引量:1
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作者 Fengling Luo Tielong Chen +4 位作者 Jun Liu Xihui Shen Yinnan Zhao Rongge Yang Xiaolian Zhang 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2016年第5期406-414,共9页
Ficolin-2 is a lectin complement pathway activator present in normal human plasma and usually associated with infectious diseases, but little is known about the role of ficolin-2 in human immunodeficiency virus(HIV) i... Ficolin-2 is a lectin complement pathway activator present in normal human plasma and usually associated with infectious diseases, but little is known about the role of ficolin-2 in human immunodeficiency virus(HIV) infection. Here, we describe our novel findings that serum ficolin-2concentrations of 103 HIV-1 patients were much higher compared to those of 57 healthy donors. In vitro analysis showed that HIV-1 infection could enhance ficolin-2 expression. We further demonstrated that recombinant ficolin-2 protein could bind with HIV-1 envelope glycoprotein gp120, and subsequently induce complement dependent cytotoxicity. Moreover, ficolin-2 could block the entry of HIV-1 into target cells(TZM-b1 and MT-2 cells) and infection in a ficolin-2 dosedependent manner. To our knowledge, this is the first report about the protective role of ficolin-2against HIV-1 infection and our study suggests that ficolin-2 is an important human innate immune molecule against HIV. 展开更多
关键词 ficolin-2 HIV-1 gp120
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HIV-1 V2区175位变异可提高中和抗体对病毒的结合能力
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作者 刘沐桑 松下修三 +1 位作者 柴田润二 刘维达 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期717-719,共3页
目的探讨HIV-1V2区175位变异对于v3中和抗体与病毒结合能力的影响。方法使用真核细胞表达质粒分别串联HIV-1野生型和突变型的env基因和绿色荧光蛋白GFP,并转染293T细胞,使gp120表达到293T细胞的表面,并根据GFP荧光来检出转染成功细... 目的探讨HIV-1V2区175位变异对于v3中和抗体与病毒结合能力的影响。方法使用真核细胞表达质粒分别串联HIV-1野生型和突变型的env基因和绿色荧光蛋白GFP,并转染293T细胞,使gp120表达到293T细胞的表面,并根据GFP荧光来检出转染成功细胞。然后使用免疫染色和双荧光流式细胞仪检测几种常见V3区中和抗体对野生型和突变型gp120的结合力。结果L175P突变使表达在293T细胞表面的gp120三聚体与3种V3区特异性抗体结合的荧光强度差异有统计学意义,与阴性对照的荧光强度分布差异有统计学意义,图形的位置和峰值均有变化,平均荧光强度MFI显著升高;而表达野生株gp120三聚体的293T细胞与V3抗体作用后,曲线与阴性对照的荧光强度分布基本重叠,MFI基本相同。结论提示V2区突变可以提升病毒对V3抗体中和作用的敏感性。 展开更多
关键词 HIV-1 gp120 V2 V3 中和抗体
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