gp130结合分子融合蛋白的表达、纯化及其mAb的制备

ｇｐ１３０结合分子（ＧＡＭ）是一种新发现的可与ｇｐ１３０胞浆内近膜区结合的蛋白质，其在ｇｐ１３０信号传导中的作用尚待深入研究。我们在原核表达ＧＡＭｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｈｉｏ）融合蛋白的基础上，制备并纯化了抗Ｔｈｉｏ的多克隆抗体，将其与Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联，经亲和层析提纯该融合蛋白，以此为免疫原，通过杂交瘤技术获得了３株抗ＧＡＭｍＡｂ。其中两株为ＩｇＧ１，１株为ＩｇＧ２ａ，与Ｔｈｉｏ及空载体转染的工程菌裂解液均无交叉反应。３株ｍＡｂ腹水抗体效价为（１．２４．８）×１０－７，同变性与非变性、单体与聚合体形式的ＧＡＭＴｈｉｏ融合蛋白都能起反应，用于Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ的效果满意，为ＧＡＭ的功能研究提供了重要的手段。