gp130结合分子融合蛋白的表达、纯化及其mAb的制备

ｇｐ１３０结合分子（ＧＡＭ）是一种新发现的可与ｇｐ１３０胞浆内近膜区结合的蛋白质，其在ｇｐ１３０信号传导中的作用尚待深入研究。我们在原核表达ＧＡＭｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｈｉｏ）融合蛋白的基础上，制备并纯化了抗Ｔｈｉｏ的多克隆抗体，将其与Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联，经亲和层析提纯该融合蛋白，以此为免疫原，通过杂交瘤技术获得了３株抗ＧＡＭｍＡｂ。其中两株为ＩｇＧ１，１株为ＩｇＧ２ａ，与Ｔｈｉｏ及空载体转染的工程菌裂解液均无交叉反应。３株ｍＡｂ腹水抗体效价为（１．２４．８）×１０－７，同变性与非变性、单体与聚合体形式的ＧＡＭＴｈｉｏ融合蛋白都能起反应，用于Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ的效果满意，为ＧＡＭ的功能研究提供了重要的手段。

沙库巴曲缬沙坦和缬沙坦在老年心力衰竭的应用价值比较

目的基于血清热休克蛋白27(serum heat shock protein 27,HSP27)和可溶性糖蛋白130(soluble glycoprotein 130,sgp130)水平的变化,探究沙库巴曲缬沙坦与缬沙坦在老年慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)治疗中的应用价值差异。方法回顾性选取2021年6月至2023年12月徐州医科大学第二附属医院收治的204例CHF患者为研究对象,随机数字表法分为A组和B组,各102例。A组给予沙库巴曲缬沙坦治疗,B组给予缬沙坦治疗。比较治疗6个月后的临床疗效及心功能等级差异;比较治疗前后患者HSP27、sgp130、N末端B型钠尿肽前体、心脏超声相关指标;记录患者心血管事件发生情况。结果治疗后,A组患者临床总有效率显著高于B组,A组患者纽约心脏病协会心功能分级优于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后2组患者HSP27、sgp130、N末端B型钠尿肽前体、左心室舒张末期内径、左心室后壁厚度、室间隔厚度水平显著降低,且A组低于B组(P<0.01);治疗后2组左心室射血分数、心排血量显著升高,A组高于B组[(55.47±5.27)%vs(52.70±5.08)%,(4.97±0.26)L/min vs(4.61±0.16)L/min,P<0.01]。治疗后,A组心肌梗死、心血管事件总发生率低于B组(0.98%vs 6.86%,P=0.030;8.82%vs 18.63%,P=0.042)。结论在老年CHF患者中,相较于缬沙坦治疗,沙库巴曲缬沙坦更能有效调节机体血清HSP27、sgp130水平,逆转心室重构情况,改善患者心功能。

补阳还五汤治疗脊髓外伤性截瘫的作用机制

目的:探讨补阳还五汤治疗脊髓外伤性截瘫的作用机制。方法:将27只SD健康清洁级大鼠分为3组:假手术组、模型组和补阳还五汤治疗组,分别于术后1、3、5周通过Tarlov评分和斜板试验观察大鼠神经功能的变化,免疫组化检测脊髓组织中BrdU的水平,Westernblot检测脊髓组织中p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、gp130和白细胞介素6(IL-6)蛋白水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠改良Tarlov评分、倾斜平面临界角度及脊髓组织BrdU含量显著降低(P<0.05),损伤脊髓组织中p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、gp130和IL-6蛋白水平均显著上调(P<0.05);与模型组相比,补阳还五汤干预后大鼠改良Tarlov评分、倾斜平面临界角度及脊髓组织BrdU含量显著上升(P<0.05),损伤脊髓组织中p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、gp130和IL-6蛋白水平均显著下调(P<0.05)。结论:补阳还五汤能够减轻脊髓损伤后的炎症反应,促进大鼠脊髓外伤性截瘫后运动功能的恢复,并且通过抑制gp130和IL-6蛋白表达及PI3K/AKT和JAK2/STAT3信号通路磷酸化起作用。

人gp130结合分子与TLE1分子通过同源的Q结构域相互作用

目的 确定人gp130结合分子 (GAM)与transducinlikeenhancerofsplit 1(TLE1)分子间是否存在相互作用及相互作用的结构基础 ,以深入研究这两种分子的功能。方法 扩增编码GAM与TLE1分子不同结构域的cDNA ,构建含有这些不同结构域的酵母双杂交载体 ,通过酵母双杂交系统分析和免疫共沉淀试验 ,研究这两种分子间的相互作用。结果 DNA序列测定证实成功构建了含GAM与TLE1分子不同结构域的酵母双杂交载体 ,酵母双杂交分析表明GAM与TLE1分子通过氨基端的Q结构域相互结合 ,免疫共沉淀试验证实了这一发现。

细胞因子受体-抗人AFP嵌合抗体融合蛋白的构建及表达

用RT-PCR方法从人胎肝组织中扩增EpoR胞外区基因及gp130跨膜区基因,并用酶切连接方法将其与抗人AFP嵌合抗体拼接,连接到质粒pVITRO上,构建真核表达载体.将重组质粒转染CHO细胞,以RT-PCR、Western blot和ELISA方法检测融合蛋白的表达.结果显示稳定转染细胞株有约150kDa的融合蛋白表达.